4.2.1.2 Métodos Espectrométricos Visibles
CBZ y PHT son dos FAE que se utilizan simultáneamente. En este trabajo se describe un método de calibración PLS para la determinación espectrofotométrica simultánea de CBZ y PHT en plasma. Las mezclas binarias estándar de CBZ y PHT se han resuelto mediante la aplicación de PLS-1 a sus espectros UV. A continuación, se prepararon las soluciones estándar binarias, adicionadas al plasma, y tras la extracción de los fármacos, se analizó su correspondiente espectro UV mediante regresión PLS para calcular la concentración de fármacos en el plasma desconocido. Se empleó un procedimiento de validación cruzada leave-one-out para encontrar los números óptimos de variables latentes utilizando el PLS. También se aplicó un método de HPLC para la determinación simultánea de dos fármacos en el plasma y en metanol. Las recuperaciones medias obtenidas por PLS fueron 98,4 y 98,2 para CBZ y PHT y las obtenidas por HPLC fueron 100,1 y 101,7, respectivamente. Aunque el método de HPLC mostró un mejor rendimiento que el de PLS, se encontró que los resultados obtenidos por PLS eran comparables con los obtenidos por el método de HPLC.
Se proponen dos métodos espectrofotométricos para el ensayo de OXC a granel y en formas de dosificación utilizando el reactivo fenólico de Folin-Ciocalteu (FCP) y el hidrocloruro de 3-metil-2-benzotiazolinona (MBTH) como reactivos. El primer método implica la adición del reactivo FCP al OXC en medio alcalino seguida de la medición de la absorbancia a 760 nm (método A), y el otro implica la adición de un volumen fijo de MBTH tras el tratamiento del OXC con cloruro férrico y la medición de la absorbancia a 456 nm (método B). En ambos métodos, la cantidad de cromógeno formada corresponde a la cantidad de OXC y se comprobó que la absorbancia medida aumenta linealmente con la concentración de OXC, lo que se corrobora con los coeficientes de correlación de 0,9985 y 0,9984 para los métodos A y B, respectivamente. Los sistemas obedecen la ley de Beer para 5-30 y 10-50 μg/mL para los métodos A y B, respectivamente. La absorbencia molar aparente se calculó en 8,06 × 103 y 3,126 × 103 L/mol/cm para los métodos A y B, respectivamente. El LOD y el LOQ se calcularon en 1,6 y 5 μg/mL para el método A y en 3 y 10 μg/mL para el método B. Las imprecisiones inter e intradiarias de los métodos se encontraron en el rango de 1,1-1,7% y 0,9-1,1% para el método A, y de 1,1-1,9% y 0,6-0,9% para el método B. La exactitud osciló entre 98,9-99,7% y 99,3-100,1% para los métodos A y B, respectivamente. No se observaron interferencias de excipientes farmacéuticos comunes. Los métodos se aplicaron con éxito al ensayo de OXC en preparaciones de comprimidos.
La CBZ sufre una biotransformación enzimática a través de la epoxidación con la formación de su metabolito, CBZ-E. Se ha propuesto un sencillo método espectrofotométrico asistido por quimiometría para la determinación simultánea de CBZ y CBZ-E en plasma. Se utilizó un procedimiento de extracción líquida para separar los analitos del plasma, y los espectros de absorbancia UV de las soluciones resultantes se sometieron a una regresión PLS. El número óptimo de variables latentes del PLS se seleccionó según los valores de PRESS de la validación cruzada leave-one-out. También se empleó un método de HPLC para la comparación. Las recuperaciones medias respectivas para el análisis de CBZ y CBZ-E en mezclas sintéticas fueron de 102,57 (± 0,25)% y 103,00 (± 0,09)% para PLS y de 99,40 (± 0,15)% y 102,20 (± 0,02)%. También se determinaron las concentraciones de CBZ y CBZ-E en cinco pacientes mediante los métodos PLS y HPLC. Los resultados mostraron que los datos obtenidos por PLS eran comparables con los obtenidos por el método HPLC.
Se desarrolló un método selectivo y sensible para la determinación de los anticonvulsivos vigabatrina (I) (CAS 60643-86-9) y gabapentina (II) (CAS 60142-96-3). El método se basa en la condensación de los fármacos a través de sus grupos amino con acetilacetona y formaldehído según la reacción de Hantzsch, dando lugar a los derivados dihidropiridínicos altamente fluorescentes. El color amarillo-naranja también se midió espectrofotométricamente a 410 y 415 nm para I y II, respectivamente. Los gráficos de absorbancia-concentración fueron rectilíneos en los rangos de 10-70 y 20-140 μg/mL para I y II, respectivamente. En cuanto a los gráficos de fluorescencia-concentración, fueron lineales en los rangos 0,5-10 y 2,5-20 μg/mL con límites mínimos de detección (S/N = 2) de 0,05 μg/mL (~ 2,1 × 10- 8 mol/L) y 0,1 μg/mL (~ 5,8 × 10- 7 mol/L) para I y II, respectivamente. El método espectrofotométrico se aplicó a la determinación de I y II en sus comprimidos. Los porcentajes de recuperación ± SD (n = 6) fueron 99.45 ± 0.13 y 98.05 ± 0.53, respectivamente. El método espectrofluorimétrico se aplicó con éxito a la determinación de I y II en orina y plasma humanos enriquecidos. Los porcentajes de recuperación ± SD (n = 5) fueron de 98,77 ± 0,29 y 98,39 ± 0,53 para la orina y 99,32 ± 0,74 y 98,90 ± 0,96 para el plasma, para I y II, respectivamente. No se encontraron interferencias con los fármacos coadministrados: ácido valproico (CAS 99-66-1), difenilhidantoína (CAS 57-41-0), fenobarbital (CAS 50-06-6), carbamazepina (CAS 298-46-4), clonazepam (CAS 1622-61-3), clobazam (CAS 22316-47-8) o cimetidina (CAS 51481-61-9). Se sugiere una propuesta de la vía de reacción. Se discuten las ventajas de los métodos propuestos sobre los existentes.
Se emplea un espectrofotómetro de infrarrojo cercano (IR), una óptica integradora y un superordenador de vectores paralelos para desarrollar un modelo matemático que predice la velocidad de disolución de comprimidos individuales intactos a partir de los espectros de infrarrojo cercano (r2 = 0,985). Cada comprimido puede ser analizado de forma no destructiva por el espectrofotómetro en menos de 1 minuto. El modelo permite utilizar cientos de longitudes de onda del infrarrojo cercano en la determinación de la velocidad de disolución, lo que aumenta la precisión.
Una muestra de 0,5 ml de suero, que contenía diferentes FAE, solos o combinados, se hizo alcalina, se cubrió con isooctano y se vaporizó en presencia de KMnO4. Los espectros de los productos oxidados en la capa orgánica se registraron en el rango UV. La fenobarbitona y la primidona oxidadas no muestran ningún pico de absorción; el diazepam un delta-max a 228 nm; la fenitoína a 247 nm; y la carbamazepina a 247 y 372 nm. En consecuencia, la fenobarbitona y el diazepam no interfieren en la cuantificación de la fenitoína, pero la carbamazepina sí. La contribución de la carbamazepina a 247 nm se calculó a partir de la absorción a 372 nm y la relación de sus coeficientes de extinción molar a las dos longitudes de onda. Esto se restó de los valores totales de A247 para obtener los valores reales debidos a la fenitoína. Así, se ha desarrollado un método para el análisis simultáneo de carbamazepina y fenitoína en una sola muestra.
La carbamazepina y la 5,5-difenilhidantoína se extraen simultáneamente de 100 a 200 μL de sangre con 1,2-dicloroetano. La 5,5-difenilhidantoína se elimina mediante un lavado de un solo paso en álcali. El dicloroetano se vuelve a lavar con ácido y luego se evapora hasta sequedad. La 5,5-difenilhidantoína se determina en el lavado alcalino mediante un procedimiento de benzofenona; la carbamazepina se determina en el residuo seco mediante el procedimiento de 9-metilacridina descrito anteriormente. El método combinado es rápido, fiable y tiene un umbral de detección inferior a 0,1 mg/100 mL para cada fármaco.
Se describe un procedimiento espectrofotométrico UV para la microdeterminación de carbamazepina en sangre que se basa en el método original de 9-metilacridina propuesto por K.H. Beyer, K. Klinge, Arzneim. Forsch. 19 (1969) 1759-1760). La carbamazepina se extrae de la sangre con diclorometano, que luego se lava con álcali y ácido. Una alícuota del extractor se evapora hasta sequedad y el residuo se calienta brevemente con ácido clorhídrico a 150°C. Tras eliminar las interferencias inespecíficas con n-heptano, se determina la absorbancia del producto del reordenamiento catalizado por el ácido (9-metilacridina) a 258 nm. El procedimiento resultante es rápido, fiable, sensible y específico. Requiere 100-200 μL de muestra para una sola estimación y tiene un umbral de detección inferior a 0,1 mg/100 mL. Se concluye que el método es adecuado para el uso clínico de rutina.
Se describe un método específico de cromatografía de gases directa para determinar la carbamazepina y, semicuantitativamente, la 10,11-epoxi carbamazepina en suero. La recuperación media de carbamazepina es del 98%, y el error en la determinación por duplicado es de ± 4%. El método se compara con el método espectrofotométrico clásico de Herrmann. En el material de 103 pacientes, la concentración sérica media de carbamazepina fue de 25,5 ± 12,8 μmol/L con GLC y de 23,0 ± 12,6 μmol/L con espectrofotometría. La diferencia fue altamente significativa. El volumen de la muestra de sangre es 1/10 del necesario en la espectrofotometría.