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¿Tiene curiosidad por las pruebas ELISA de quimioluminiscencia, pero no sabe exactamente qué son o cómo utilizarlas? Nuestro vídeo Una comparación de los ELISA colorimétricos y de quimioluminiscencia analiza la similitud de estos dos tipos de ensayos y cómo pueden mejorar sus pruebas de laboratorio.

Vea nuestro vídeo para:

• Aprender cómo los ELISA de quimioluminiscencia y colorimétricos miden los biomarcadores
• Explorar los diferentes tipos de lectores de placas utilizados para ejecutar cada ensayo
• Comparar los componentes de cada ensayo

Una comparación de los ELISA colorimétricos y de quimioluminiscencia

Transcripción del vídeo

Hola, Soy Christi Caillouette de ALPCO. Hoy les mostraré una comparación de los ensayos inmunoenzimáticos colorimétricos y quimioluminiscentes, también llamados ELISAs.

Principio de los ELISAs en sándwich

Aunque hay muchos tipos de ensayos, los ELISAs a los que me referiré hoy son los ensayos en sándwich. Los ELISA en sándwich tienen un anticuerpo recubierto en la placa que se une específicamente al analito deseado. Tras un paso de lavado, se añade un anticuerpo de detección y una etiqueta enzimática que se unen al analito. Se añade un sustrato para generar una reacción en los pocillos. Dependiendo del tipo de ensayo, se produce color o luz. Esta reacción puede medirse con un lector de placas. El grado de cambio de color o de luz emitida indica la cantidad de analito en la muestra.

Medición de concentraciones desconocidas de biomarcadores

Tanto los ensayos colorimétricos como los quimioluminiscentes utilizan estándares conocidos para generar una curva estándar para medir la concentración desconocida de un analito en las muestras. Dependiendo del kit, esto se logra utilizando programas de software con algoritmos de ajuste de curvas logísticas de 4 o 5 parámetros. Ambos tipos de kits proporcionan al usuario mediciones del analito de forma muy similar.

Salida de los ELISA colorimétricos

Los ELISA colorimétricos requieren un lector de microplacas estándar para detectar la reacción de cambio de color entre la etiqueta de la enzima y el sustrato. El lector envía una longitud de onda, normalmente de 450 nm, a través de cada pocillo para determinar la densidad óptica, o lectura «OD» de las muestras. Dependiendo del lector de placas, las lecturas de DO proporcionadas están entre 0 y 4 a la milésima de punto decimal. Las lecturas de DO están limitadas por la capacidad del espectrofotómetro.

Producción de ELISA de quimioluminiscencia

Los ELISA de quimioluminiscencia requieren un lector de microplacas capaz de medir la luminiscencia para detectar la reacción lumínica entre la etiqueta de la enzima y el sustrato. La luz emitida por la reacción en los pocillos se transmite por un cable de fibra óptica a un fotomultiplicador en el lector que emite unidades de luz relativas o «RLU». Dependiendo del lector de placas, las RLUs pueden oscilar entre cientos y millones. Esta dispersión de las unidades ofrece a los usuarios una mejor sensibilidad analítica y un rango dinámico más amplio al proporcionar una mayor separación entre los puntos y reduce las limitaciones de las lecturas de densidad óptica de un lector de microplacas estándar.

Los ELISA colorimétricos frente a los de quimioluminiscencia

Ahora voy a mostrarles lo que generalmente viene en nuestras cajas de kits ELISA colorimétricos y quimioluminiscentes y cómo estos kits son sólo ligeramente diferentes. Les mostraré el ELISA colorimétrico de insulina humana de ALPCO y nuestro ELISA de amida STELLUX Chemi Active GLP-1 (7-36).

Componentes del ELISA colorimétrico de insulina humana

Primero, comenzaremos con el ELISA colorimétrico de insulina humana de ALPCO. En este ensayo colorimétrico, recibirá:

• Microplaca de 96 pozos – la placa es transparente para permitir las mediciones de DO del color en la placa
• Estándar cero
• Estándares, A a E – cada vial tiene valores conocidos de insulina para establecer la curva estándar
• Controles – contienen valores conocidos de insulina para el control de calidad.
• Anticuerpo de detección marcado con enzimas
• Concentrado de tampón de lavado
• Sustrato TMB – que, durante la incubación, cambia los pocillos de color azul.
• Solución de parada – que se añade para detener la reacción de cambio de color en los pocillos, haciendo que éstos se vuelvan amarillos.
• Y selladores de placas

Componentes del ELISA de quimioluminiscencia de GLP-1 (7-36) amida

A continuación, tenemos el ELISA de quimioluminiscencia de GLP-1 (7-36) amida de ALPCO. En este ensayo quimioluminiscente, recibirá:

• Microplaca de 96 pocillos de GLP-1 activo – Observe que la placa chemi es negra en lugar de transparente. Una placa negra reduce la interferencia de la luz de fondo cuando se lee la placa.
• Estándares
• Niveles de control
• Tampón de ensayo
• Anticuerpo detector
• Tampón de anticuerpo detector
• Concentrado de tampón de lavado
• Streptavidina-HRP – que funciona como etiqueta de la enzima.
• Tampón de estreptavidina-HRP – que se utiliza para diluir la estreptavidina-hrp hasta la fuerza de trabajo.
• Sustrato quimioluminiscente A
• Sustrato quimioluminiscente B – que se combinan para hacer el sustrato quimioluminiscente de fuerza de trabajo que interactúa con la etiqueta de la enzima para generar la reacción quimioluminiscente en cada pocillo.
• Selladores de placas

Conclusión

Como puede ver, algunos de los reactivos son diferentes entre los ELISA colorimétricos y quimioluminiscentes, pero el principio de cada ensayo es similar y ambos permiten medir la concentración de analitos desconocidos en las muestras. Tanto si utiliza kits colorimétricos como si está interesado en probar nuestros ensayos quimioluminiscentes, tenemos algo para usted. ALPCO está aquí para ayudarle a explorar las posibilidades de su laboratorio. Para ver nuestra oferta completa de ELISA, visite nuestro sitio web. Tenemos muchos recursos excelentes para ayudarle con sus proyectos, así que eche un vistazo.

¡Gracias por vernos!

Para saber más sobre los productos de ALPCO, póngase en contacto con Robert Somogyi en [email protected].