Vliv Digibind™ a DigiFab™ na měření sérového digoxinu
Digibind a DigiFab jsou Fab fragmenty protilátky proti digoxinu používané při léčbě život ohrožujícího akutního předávkování digoxinem. Digibind, první dostupné antidotum pro léčbu předávkování digoxinem, je ve Spojených státech k dispozici od roku 1986 (Glaxo Wellcome Inc.) a nedávno, v roce 2001, schválil Úřad pro kontrolu potravin a léčiv Spojených států amerických (FDA) přípravek DigiFab pro léčbu předávkování digoxinem. Digibind se vyrábí imunizací ovcí konjugátem digoxinu a lidského albuminu, po níž následuje izolace protilátky specifické pro digoxin z krve a štěpení papainu za účelem vytvoření Fab fragmentu protilátky. Fab fragment protilátky proti digoxinu se poté dále čistí. DigiFab se připravuje injekcí digoxin-dikarboxymetylaminu, analogu digoxinu, po níž následuje izolace antidigoxinové protilátky z krve, štěpení papainu a následné čištění Fab fragmentu pomocí afinitní chromatografie. Molekulová hmotnost DigiFab (46 000 Da) je podobná molekulové hmotnosti Digibind (46 200 Da). Obvykle se dávka přípravku Digibind rovná 80násobku tělesné zátěže digoxinem; pokud není známa ani požitá dávka, ani plazmatická koncentrace digoxinu, pak se pacientovi obvykle podá 380 mg přípravku Digibind. Poločas rozpadu Fab fragmentu u člověka je 12-20 hodin, ale u pacientů se selháním ledvin se může prodloužit . Digibind a DigiFab mají rovnocennou vazebnou kapacitu pro digoxin. Obě sloučeniny jsou navíc schopny vázat endogenní DLIS .
Kromě digoxinu Digibind vykazuje schopnost neutralizovat kardenolid, který je glykosylován v poloze 3 (digitoxin a ouabain) s podobnou účinností, bez ohledu na substituce v steroidní části molekuly. Digibind je proto účinný při léčbě otravy rostlinami s náprstníkem, které obsahují různé srdeční glykosidy. Rich et al. prokázali úspěšnou léčbu přípravkem Digibind u 22letého muže, který byl záměrně předávkován domácím extraktem z náprstníku . Digibind je navíc schopen neutralizovat jak srdeční glykosidy, tak příslušné aglykony – například oleandrin, účinnou složku extraktu oleandru – a je účinný při léčbě život ohrožující toxicity oleandru . Digibind může být navíc účinný při léčbě předávkování přípravkem Chan Su – Chan Su je čínský lék obsahující bufalin a další kardioaktivní steroidy ze skupiny bufadienolidů -, ale účinnost přípravku Digibind při léčbě otravy přípravkem Chan Su je ve srovnání s jeho účinností při léčbě předávkování digoxinem nízká. To je způsobeno nízkou specifitou přípravku Digibind neutralizovat cinobufagin a cinobufatolin, které jsou rovněž složkami přípravku Chan Su, stejně jako jed ropuchy .
Digibind i DigiFab interferují s měřením digoxinu v séru pomocí imunoanalýzy. Velikost interference závisí na konstrukci testu a specifičnosti protilátky proti digoxinu. Mikročásticová enzymová imunoanalýza digoxinu (MEIA na analyzátoru AxSYM, Abbott Laboratories, Abbott Park, IL) i analýza digoxinu Stratus prokázaly hodnoty digoxinu, které byly vyšší než naměřená koncentrace volného digoxinu v přítomnosti přípravku Digibind . McMillin a spol. studovali vliv Digibindu a DigiFabu na 13 různých imunoanalýz digoxinu. U Digibindu a DigiFabu byla pozorována pozitivní interference v přítomnosti i nepřítomnosti digoxinu, ačkoli u DigiFabu byla velikost interference o něco menší. Velikost interference se u jednotlivých metod výrazně lišila, přičemž nejvyšší interferenci vykazovaly digoxinové metody IMMULITE®, Vitros®, Dimension® a Access®. Minimální interference byly pozorovány u metod FPIA, MEIA, SYNCHRON a CEDIA. Autoři rovněž poznamenali, že sledování volného digoxinu (v bezbílkovinném ultrafiltrátu) tuto interferenci eliminuje, protože digibind i digiFab se vzhledem ke své přibližné molekulové hmotnosti 46 000 Da v bezbílkovinném ultrafiltrátu nevyskytují . Digibind a DigiFab neinterferují s měřením digoxinu v séru pomocí chromatografické metody, jako je kapalinová chromatografie kombinovaná s hmotnostní spektrometrií. Kanno a kol. popsali metodu simultánní analýzy digoxinu, digitoxinu a příbuzných sloučenin pomocí kapalinové chromatografie kombinované s tandemovou hmotnostní spektrometrií . Oiestad et al. rovněž popsali metodu kapalinové chromatografie s tandemovou hmotnostní spektrometrií (LC-MS/MS) pro digoxin a digitoxin v plné krvi pro případy pitvy. Vzorky byly připraveny extrakcí kapalina-kapalina za použití ethylacetátu/heptanu/dichlormethanu (3 : 1 : 1 objemově) a chromatografické separace bylo dosaženo použitím kolony C-18 s reverzní fází. Hmotnostní detekce byla provedena pomocí elektrospreje v režimu pozitivních iontů na amonných aduktech a jako vnitřní standard byl použit deuterovaný digoxin (digoxin-d3). Chromatografické metody se však v klinických laboratořích používají jen zřídka, ačkoli forenzní toxikologické laboratoře a kriminalistické laboratoře zabývající se vyšetřováním úmrtí jsou těmito analyzátory vybaveny.