Původní článek
Jacob Rosenblit, Cláudia Regina Abreu,
Leonel Nulman Szterling, José Mauro Kutner, Nelson Hamerschlak,
Paula Frutuoso, Thelma Regina Silva Stracieri de Paiva,
Orlando da Costa Ferreira Júnior
Vyhodnocení tří metod měření hemoglobinu u dárců krve
Hemoterapeutická služba, Hospital Israelita Albert Einstein, São Paulo, Brazílie
ABSTRACT
CONTEXT: Hladina hemoglobinu (Hb) je nejpoužívanějším parametrem pro screening dárců krve na přítomnost anémie, jedna z nejpoužívanějších metod měření hladiny Hb je založena na fotometrické detekci kyanmetahemoglobinu, jako alternativu k této technologii vyvinula společnost HemoCue fotometrickou metodu založenou na stanovení azidového metahemoglobinu.
CÍL: Zhodnotit výkonnost tří metod stanovení hemoglobinu (Hb) v podmínkách krevní banky.
CÍL: Prospektivní studie využívající krevní vzorky k porovnání metod stanovení Hb.
ZASTAVENÍ: V rámci studie byly porovnány metody stanovení Hb: Hemoterapeutická služba nemocnice Hospital Israelita Albert Einstein, soukromého zařízení terciárního zdravotnického systému.
SOUBOR: Sériové vzorky krve byly odebrány 259 osobám v období od března do června 1996.
MĚŘENÍ: Výkony testů a jejich porovnání byly hodnoceny pomocí analýzy variačních koeficientů (CV), lineární regrese a průměrných rozdílů.
VÝSLEDKY: CV pro tři metody byly následující: Coulter 0,68 %, Cobas 0,82 % a HemoCue 0,69 %. Mezi průměrnými hodnotami stanovení Hb u těchto tří metod nebyl zjištěn žádný rozdíl (p>0,05). Metody Coulter a Cobas vykazovaly nejlepší shodu a metoda HemoCue poskytla nižší stanovení Hb ve srovnání s metodami Coulter i Cobas. Zdá se však, že dvojice metod zahrnující HemoCue mají užší meze shody (± 0,78 a ± 1,02) než kombinace metod Coulter a Cobas (± 1,13).
ZÁVĚR: Tyto tři metody poskytují dobrou shodu pro stanovení hemoglobinu.
KLÍČOVÁ SLOVA: Hemoglobin. Metody. Kvantifikace. Zařízení.
ÚVOD
Hladina hemoglobinu (Hb) je nejpoužívanějším parametrem pro screening dárců krve na přítomnost anémie. Toto měření se obvykle provádí během klinicko-epidemiologického pohovoru, který předchází odběru krve.
V současné době je jedna z nejpoužívanějších metod měření hladiny Hb založena na fotometrické detekci kyanmetahemoglobinu, což je stabilní sloučenina odvozená od Hb. Kromě toho jsou komerčně dostupné reagencie připravené k použití a také standardní roztok kyanmetahemoglobinu pro kalibraci.
Jako alternativu k této technologii vyvinula společnost HemoCue fotometrickou metodu založenou na stanovení azidového metahemoglobinu,1 standardizovanou podle metody Mezinárodního výboru pro standardizaci v hematologii (ICSH).2 Azidový metahemoglobin se měří při 570 nm. Pro kompenzaci zákalu, např. způsobeného lipidy, se provádí druhé měření při 880 nm.3 Výhodou této technologie je, že je jednoduchá, rychlá a nevyžaduje sofistikované hematologické vybavení. Systém je navržen pro použití kapilární, žilní nebo arteriální krve. Přístroj je také malý a přenosný, což umožňuje jeho použití v mobilních odběrových jednotkách a ordinacích lékařů.
Několik studií provedených na amerických dárcích krve potvrdilo dobrou reprodukovatelnost a přesnost metody HemoCue.4,5 Srovnatelnost hladiny Hb měřené metodou HemoCue s jinými, nověji dostupnými hematologickými přístroji však nebyla provedena.
V této studii jsme přezkoumali výkonnost systému HemoCue ve srovnání s metodami Coulter a Cobas. Obě tyto metody jsou založeny na detekci kyanmetahemoglobinu.
METODY
Výběr vzorků. V období od března do června 1996 bylo odebráno celkem 259 vzorků krve. Krev byla odebrána systémem Vacutainer s EDTA-K3 (Becton-Dickinson) do celkového objemu 4,5 ml.
Měření Hb. U 259 vzorků byla provedena třemi metodami v intervalu 10-20 minut, aby se zabránilo odchylkám během zpracování a měření. Pro analýzu reprodukovatelnosti měření Hb jsme použili jeden vzorek, který byl každou metodou vyhodnocen 10krát. Na základě těchto stanovení jsme vypočítali variační koeficient (CV) definovaný jako poměr mezi směrodatnou odchylkou a průměrem hladin Hb, vynásobený 100. Přístroje Coulter a Cobas byly denně kalibrovány podle doporučení výrobců. Fotometr HemoCue je kalibrován z výroby a neměl by být rekalibrován. Kalibrace byla denně kontrolována podle doporučení výrobce. Kalibrace byla během období naší studie stabilní.
Statistické metody. Všechny statistické analýzy byly provedeny na sharewarovém softwaru EPIINFO, verze 6 (lineární regresní analýza, Studentův t-test, výpočet průměru a směrodatné odchylky).6 Za statisticky významnou byla považována hodnota p menší než 0,05. V případě, že byla hodnota p menší než 0,05, byla tato hodnota považována za statisticky významnou.
VÝSLEDKY
Reprodukovatelnost každé metody byla hodnocena desetinásobným měřením hladiny Hb z jednoho vzorku krve a stanovením variačního koeficientu (CV) pro každé vyšetření. CV pro metody Coulter, Cobas a HemoCue byl 0,68 %, 0,82 % a 0,69 % (tabulka 1).
Nejprve jsme vyhodnotili měření centrální tendence (průměr a medián) a variability (rozsah a směrodatná odchylka) pro 259 stanovení Hb z každé metody. Jak ukazuje tabulka 2, u těchto parametrů jsme nezjistili žádný statistický rozdíl. Pozorovali jsme však, že metoda HemoCue vykazuje nejnižší průměr (11,5 g/dl) a nejnižší medián (11,4 g/dl) ve srovnání s metodami Coulter i Cobas (průměr = 11,6 a medián = 11,7, resp. 11,6 g/dl).
Na základě lineární regresní analýzy stanovení Hb pro tři metody jsme dále studovali korelační koeficient pro dvojice metod. Tabulka 3 uvádí parametry této analýzy a ukazuje, že každá dvojice měla vynikající korelační koeficient (rozsah 0,97 až 0,99). Tento výsledek byl do jisté míry očekávaný, protože všechny tři metody byly určeny k měření stejného parametru (hladina Hb v g/dl). Za těchto okolností není shoda mezi dvěma proměnnými správně vyjádřena měřením síly jejich vztahu nebo, statisticky řečeno, stanovením koeficientu korelace lineární regrese.
Proto jsme se rozhodli vyhodnotit shodu tří metod stanovení Hb pomocí přístupu navrženého Blandem a Altmanem.7 Stručně řečeno, tento přístup předpokládá, že pokud se mají dvě metody shodovat, pak průměr rozdílu mezi každým párovým stanovením nebude statisticky odlišný od nuly. Pomocí tohoto přístupu je také možné stanovit hranici shody (v rámci daného intervalu spolehlivosti) mezi oběma metodami a graficky znázornit rozptyl těchto rozdílů napříč hladinami Hb. To by mohlo například naznačit, zda s určitým rozsahem stanovení Hb může být spojena větší variabilita, a tím naznačit nedostatečnou přesnost spojenou s tímto rozsahem Hb.
Aplikace Blandova a Altmanova přístupu na naše údaje je uvedena v tabulce 4. Je vidět, že jedinou dvojicí metod, jejíž průměrný rozdíl se neliší od nuly, je dvojice Coulter/Cobas (p = 0,588). Jedná se tedy o metody, které se v měření Hb shodují. Dvojice metod, které zahrnovaly metodu HemoCue, poskytly průměr rozdílu statisticky odlišný od nuly (p < 0,001).
Blandova a Altmanova metoda nám umožnila vypočítat hranici shody mezi libovolnými dvěma metodami. Tyto meze jsou rovněž uvedeny v tabulce 4. Dvojice Coulter/Cobas poskytla mez shody 1,13 g/dl, zatímco dvojice zahrnující metodu HemoCue vykazují nižší meze shody (Coulter/HemoCue = 0,78 g/dl a Cobas/HemoCue = 1,02 g/dl). Hranice shody odráží rozptyl údajů kolem střední hodnoty rozdílu (znázorněno na obrázku 1).
Obrázek 1 – Individuální rozdíly mezi hodnotami Hb (n=259) byly vyneseny proti průměrné hodnotě Hb stanovené dvojicemi metod měření Hb. Na každém obrázku jsou zobrazeny grafy následujících rozdílů a průměrů: A, Coulter-Cobas; B, Coulter-HemoCue; a C, Cobas-HemoCue. Čára označuje nulový rozdíl.
DISKUSE
Všechny naše údaje ukazují, že metody Coulter a Cobas vykazují nejlepší shodu a že metoda HemoCue poskytuje nižší hodnotu stanovení Hb ve srovnání s metodami Coulter i Cobas. Tento rozdíl činí 0,10 a 0,13 g/dl ve vztahu k metodám Coulter a Cobas. Zdá se však, že dvojice metod zahrnující metodu HemoCue mají užší meze shody než kombinace metod Coulter a Cobas. To je v souladu s CV pro tyto tři metody. Ačkoli tedy metoda HemoCue vykazuje nižší naměřené hodnoty Hb, zdá se, že tato měření ve srovnání s ostatními metodami méně kolísají.
V této studii jsme použili vzorky z venózní punkce odebrané přímo do zkumavek Vacutainer obsahujících EDTA-K3. To bylo provedeno za účelem standardizace měření Hb. Část 1% rozdílu (0,10 g/dl) mezi systémem HemoCue a Coulter STKS lze vysvětlit tím, že systém HemoCue kompenzuje zákal ve vzorku krve. Zákal způsobený například lipidy způsobí falešně zvýšené hodnoty u přístrojů Coulter a jiných přístrojů měřících fotometricky pouze při jedné vlnové délce.1,3 Metoda ICSH2 akceptuje zákal 0,003 absorpční jednotky, což odpovídá 0,11 g/dl hemoglobinu. Vyšší zákal se očekává, protože dárci krve nejsou nalačno.
Je také možné, že biochemická metoda použitá pro měření Hb (kyanmetahemoglobin versus hemoglobinazid) mohla ovlivnit náš výsledek. Je třeba zmínit, že cyanmetahemoglobin je metoda doporučená ICSH.
Výhody systému HemoCue z hlediska rychlosti, jednoduchosti a přenosnosti by jej doporučovaly jako screeningovou metodu nejen v prostředí krevní banky, ale i v ordinaci lékaře.
2. ICSH. Doporučení pro referenční metodu pro hemoglobinometrii v lidské krvi (norma ICSH 1995) a Specifikace pro mezinárodní standard hemoglobincyamidu (4. vydání). J Clin Pathol 1996;49:271-4.
3. Nicholls PD. Hodnocení přístroje HemoCue pro korekci hodnoty hemoglobinu u lipemických vzorků. Med Lab Sciences 1990;47:226-9.
4. Cable RG. Stanovení hemoglobinu u dárců krve. Transfusion Med Ver 1995;9:131-44.
5. Carlson DA, Daigneault RW, Statland BE. Hodnocení fotometru HemoCue pro měření hemoglobinu dárců krve. Abstrakt pro 40. výroční zasedání Americké asociace krevních bank, Orlando, FL, 1987.
7. Bland JM, Altman DG. Statistické metody pro hodnocení shody mezi dvěma metodami klinického měření. Lancet 1986;i:307-10.
Jacob Rosenblit – MD, Hemoterapeutická služba, Hospital Israelita Albert Einstein.
Cláudia Regina Abreu – BSC, Hemoterapeutická služba, Hospital Israelita Albert Einstein.
Leonel Nulman Szterling – MD, Hemoterapeutická služba, Hospital Israelita Albert Einstein.
José Mauro Kutner – MD, Hemoterapeutická služba, Hospital Israelita Albert Einstein.
Nelson Hamerschlak – MD, Hemoterapeutická služba, Hospital Israelita Albert Einstein.
Paula Frutuoso – BSc, Hemoterapeutická služba, Hospital Israelita Albert Einstein.
Thelma Regina Silva Stracieri de Paiva – BSC, Hemoterapeutická služba, Hospital Israelita Albert Einstein.
Orlando da Costa Ferreira Júnior – MD, PhD. Hemoterapeutická služba, Hospital Israelita Albert Einstein.
Zdroje financování: Není deklarováno
Střet zájmů: Nedeklaruje se
Posledy obdržel: 15. června 1998
Přijato: 23. července 1998
Adresa pro korespondenci:
Jacob Rosenblit
Hemoterapeutické oddělení nemocnice Alberta Einsteina
Av. Albert Einstein, 627, 4th floor
São Paulo/SP, Brazílie – CEP 05651-901
E-mail: [email protected]
RESUMO
CONTEXT: Měření hemoglobinu (Hb) je nejpoužívanějším ukazatelem pro kontrolu anémie při screeningu dárců krve. V současné době je nejpoužívanější fotometrickou metodou sinice-methemoglobin. Jako alternativu k této technologii vyvinula společnost Hemocue fotometrickou metodu založenou na stanovení azid-metahemoglobinu. CÍL: Zhodnotit účinnost tří metod stanovení hemoglobinu (Hb) u dárců krve. TYP STUDIE: Prospektivní studie využívající krevní vzorky k porovnání testů dávkování Hb. MÍSTO: Hemoterapeutické oddělení Hospital Israelita Albert Einstein, soukromé zařízení terciární péče. VZOREK: Od března do června 1996 byly odebrány sériové vzorky krve 259 jedincům. STUDOVANÉ PROMĚNNÉ: Provedení testů a jejich porovnání bylo provedeno pomocí analýzy korelačních koeficientů, lineární regrese a porovnání průměrů. VÝSLEDKY: Variační koeficienty tří metod byly následující: Coulter 0,68 %, Cobas 0,82 % a HemoCue 0,69 %. Mezi průměry stanovení hemoglobinu třemi metodami nebyly zjištěny statisticky významné rozdíly (p>0,05). Metody Coulter a Cobas vykazovaly lepší shodu, zatímco metoda HemoCue měla nižší hodnoty hemoglobinu. Dvojice Coulter/HemoCue a Cobas/HemoCue však měly užší meze shody (+ 0,78 a + 1,02) než dvojice Coulter/Cobas (+ 1,13). ZÁVĚRY: Tyto tři metody prokázaly vynikající shodu pro dávkování hemoglobinu.