4.2.1.2 Viditelné spektrometrické metody
CBZ a PHT jsou dva AED, které se používají současně. V tomto článku je popsána kalibrační metoda PLS pro simultánní spektrofotometrické stanovení CBZ a PHT v plazmě. Standardní binární směsi CBZ a PHT byly rozlišeny aplikací PLS-1 na jejich UV spektra. Poté byly připraveny binární standardní roztoky, nasycené do plazmy, a po extrakci léčiv byla jejich odpovídající UV spektra analyzována pomocí PLS regrese pro výpočet koncentrace léčiv v neznámé plazmě. K nalezení optimálního počtu latentních proměnných pomocí metody PRESS byl použit postup křížové validace s vynecháním jedné proměnné. Metoda HPLC byla rovněž použita pro simultánní stanovení dvou léčiv v plazmě a v methanolu. Průměrné výtěžnosti získané metodou PLS byly 98,4 a 98,2 pro CBZ a PHT a výtěžnosti získané metodou HPLC byly 100,1 a 101,7 %. Ačkoli metoda HPLC vykazovala lepší výkonnost než PLS, bylo zjištěno, že výsledky získané metodou PLS jsou srovnatelné s výsledky získanými metodou HPLC .
Dvě spektrofotometrické metody jsou navrženy pro stanovení OXC v sypkých a lékových formách s použitím Folin-Ciocalteuova fenolového činidla (FCP) a 3-methyl-2-benzothiazolinon hydrazin-hydrochloridu (MBTH) jako činidel. První metoda zahrnuje přidání činidla FCP k OXC v alkalickém prostředí s následným měřením absorbance při 760 nm (metoda A) a druhá zahrnuje přidání pevného objemu MBTH po úpravě OXC chloridem železitým a měření absorbance při 456 nm (metoda B). U obou metod odpovídá množství vytvořeného chromogenu množství OXC a bylo zjištěno, že naměřená absorbance lineárně roste s koncentrací OXC, což potvrzují korelační koeficienty 0,9985 pro metodu A a 0,9984 pro metodu B. Systémy se řídí Beerovým zákonem pro 5-30 a 10-50 μg/ml pro metody A a B. Zdánlivá molární absorptivita byla vypočtena na 8,06 × 103 a 3,126 × 103 l/mol/cm pro metody A a B. LOD a LOQ byly vypočteny na 1,6 a 5 μg/ml pro metodu A a 3 a 10 μg/ml pro metodu B. Bylo zjištěno, že mezidenní a vnitrodenní nepřesnosti metod se pohybují v rozmezí 1,1-1,7 % a 0,9-1,1 % pro metodu A a 1,1-1,9 % a 0,6-0,9 % pro metodu B. Přesnost se pohybovala v rozmezí 98,9-99,7 % a 99,3-100,1 % pro metody A a B, v tomto pořadí. Nebyly pozorovány žádné interference běžných farmaceutických pomocných látek. Metody byly úspěšně použity pro stanovení OXC v tabletových přípravcích .
CBZ podléhá enzymové biotransformaci prostřednictvím epoxidace za vzniku jeho metabolitu, CBZ-E. Byla navržena jednoduchá chemometricky asistovaná spektrofotometrická metoda pro simultánní stanovení CBZ a CBZ-E v plazmě. K oddělení analytů z plazmy byl použit postup kapalinové extrakce a UV absorpční spektra výsledných roztoků byla podrobena PLS regresi. Optimální počet latentních proměnných PLS byl zvolen podle hodnot PRESS při křížové validaci s vynecháním jedné proměnné. Pro srovnání byla použita také metoda HPLC. Příslušné průměrné výtěžnosti pro analýzu CBZ a CBZ-E v syntetických směsích byly 102,57 (± 0,25) % a 103,00 (± 0,09) % pro PLS a 99,40 (± 0,15) % a 102,20 (± 0,02) %. Koncentrace CBZ a CBZ-E byly rovněž stanoveny u pěti pacientů metodami PLS a HPLC. Výsledky ukázaly, že údaje získané metodou PLS jsou srovnatelné s údaji získanými metodou HPLC .
Byla vyvinuta selektivní a citlivá metoda pro stanovení antikonvulziv vigabatrinu (I) (CAS 60643-86-9) a gabapentinu (II) (CAS 60142-96-3). Metoda je založena na kondenzaci léčiv přes jejich aminoskupiny s acetylacetonem a formaldehydem podle Hantzschovy reakce za vzniku vysoce fluorescenčních dihydropyridinových derivátů. Žlutooranžové zbarvení bylo rovněž měřeno spektrofotometricky při 410 nm pro I a 415 nm pro II. Grafy závislosti absorbance na koncentraci byly pro I a II přímočaré v rozmezí 10-70 a 20-140 μg/ml. Pokud jde o grafy fluorescence-koncentrace, byly lineární v rozmezí 0,5-10 a 2,5-20 μg/ml s minimálními detekčními limity (S/N = 2) 0,05 μg/ml (~ 2,1 × 10- 8 mol/l) a 0,1 μg/ml (~ 5,8 × 10- 7 mol/l) pro I a II. Pro stanovení I a II v tabletách byla použita spektrofotometrická metoda. Procentuální výtěžnost ± SD (n = 6) byla 99,45 ± 0,13 a 98,05 ± 0,53 v uvedeném pořadí. Spektrofluorimetrická metoda byla úspěšně použita ke stanovení I a II ve spikované lidské moči a plazmě. Výtěžnost v % ± SD (n = 5) byla 98,77 ± 0,29 a 98,39 ± 0,53 pro moč a 99,32 ± 0,74 a 98,90 ± 0,96 pro plazmu pro I a II. U současně podávaných léčivých přípravků: kyseliny valproové (CAS 99-66-1), difenylhydantoinu (CAS 57-41-0), fenobarbitalu (CAS 50-06-6), karbamazepinu (CAS 298-46-4), klonazepamu (CAS 1622-61-3), klobazamu (CAS 22316-47-8) nebo cimetidinu (CAS 51481-61-9) nedošlo k žádné interferenci. Je navržen návrh reakční cesty. Jsou diskutovány výhody navržených metod oproti stávajícím metodám .
K vývoji matematického modelu, který předpovídá rychlost rozpouštění jednotlivých neporušených tablet z blízkých infračervených (IR) spekter (r2 = 0,985), je použit spektrofotometr, integrující optika a paralelní vektorový superpočítač. Každou tabletu lze nedestruktivně analyzovat pomocí spektrofotometru za méně než 1 min. Model umožňuje při stanovení rychlosti rozpouštění použít stovky vlnových délek v blízkém infračerveném spektru, což vede ke zvýšení přesnosti .
Vzorek séra o objemu 0,5 ml, obsahující různé AED, jednotlivě nebo v kombinaci, byl alkalický, překryt isooktanem a napařen v přítomnosti KMnO4. Spektra oxidovaných produktů v organické vrstvě byla zaznamenána v UV oblasti. Oxidovaný fenobarbiton a primidon nevykazují žádný absorpční pík; diazepam delta-max při 228 nm; fenytoin při 247 nm; a karbamazepin při 247 a 372 nm. Proto fenobarbiton a diazepam neruší kvantifikaci fenytoinu, ale karbamazepin ano. Příspěvek karbamazepinu při 247 nm byl vypočten z absorpce při 372 nm a poměru jeho molárních extinkčních koeficientů při obou vlnových délkách. Ten byl odečten od celkových hodnot A247, aby se získaly skutečné hodnoty způsobené fenytoinem. Tak byla vyvinuta metoda pro simultánní analýzu karbamazepinu a fenytoinu v jednom vzorku .
Karbamazepin a 5,5-difenylhydantoin se současně extrahují ze 100 až 200 μl krve 1,2-dichlorethanem. 5,5-difenylhydantoin se odstraní jednostupňovým promýváním v alkáliích. Dichlorethan se dále promyje kyselinou a poté se odpaří do sucha. 5,5-difenylhydantoin se stanoví v alkalickém výluhu benzofenonovým postupem; karbamazepin se stanoví ve vysušeném zbytku výše popsaným postupem s 9-methylakridinem. Kombinovaná metoda je rychlá, spolehlivá a má práh detekce menší než 0,1 mg/100 ml pro každé léčivo .
Popisuje se UV spektrofotometrický postup pro mikrostanovení karbamazepinu v krvi, který vychází z původní 9-methylakridinové metody navržené K. H. Beyerem, K. Klinge, Arzneim. Forsch. 19 (1969) 1759-1760). Karbamazepin se extrahuje z krve dichlormethanem, který se pak promyje zásadou a kyselinou. Alikvotní část extraktu se odpaří do sucha a zbytek se krátce zahřeje s kyselinou chlorovodíkovou při 150 °C. Po odstranění nespecifických interferencí n-heptanem se stanoví absorbance produktu přeskupení katalyzovaného kyselinou (9-methylakridin) při 258 nm. Výsledný postup je rychlý, spolehlivý, citlivý a specifický. Pro jedno stanovení je zapotřebí 100-200 μl vzorku a práh detekce je nižší než 0,1 mg/100 ml. Z toho vyplývá, že metoda je vhodná pro rutinní klinické použití .
Popisuje se specifická přímá plynová chromatografická metoda pro stanovení karbamazepinu a semikvantitativně 10,11-epoxykarbamazepinu v séru. Průměrná výtěžnost karbamazepinu je 98 % a chyba při dvojím stanovení je ± 4 %. Metoda je porovnána s klasickou Herrmannovou spektrofotometrickou metodou. V materiálu 103 pacientů byla průměrná koncentrace karbamazepinu v séru 25,5 ± 12,8 μmol/l pomocí GLC a 23,0 ± 12,6 μmol/l pomocí spektrofotometrie. Tento rozdíl byl vysoce signifikantní. Objem vzorku krve je 1/10 objemu potřebného při spektrofotometrii .
.