Abstrakt
Pětiletý pes labradora byl předveden na Výukovou veterinární kliniku GADVASU s primárními stížnostmi na nafouklé břicho, horečku a nechutenství. U psa byla zjištěna tupost se zvýšenou rektální teplotou (104°F), srdeční frekvencí (148 za minutu) a dechovou frekvencí (58 za minutu). Vyšetření krevního nátěru a PCR analýza ukázaly, že pes byl pozitivní na Babesia gibsoni. Hematobiochemickými změnami byly zvýšený bilirubin, alaninaminotransferáza (ALT), alkalická fosfatáza (ALP), kreatinin, dusík močoviny v krvi (BUN), celkový počet leukocytů, hypoalbuminémie a hypoproteinémie. Rentgenové a ultrazvukové vyšetření ukázalo vzhled broušeného skla a anechogenní oblast břicha.
1. Úvod
Babezióza psů je jedno z nejvýznamnějších život ohrožujících hemoprotozoárních onemocnění psů přenášených klíšťaty, způsobené intraerytrocytárními protozoárními parazity rodu Babesia, které jsou hlášeny po celém světě a v různých částech Indie včetně státu Paňdžáb . V Indii byla pozorována různá prevalence jak B. canis, tak B. gibsoni (0,66 až 21,7 %) a ve městě Ludhiana byla zaznamenána prevalence 5,26 % . Patogeneze babeziózy psů se v různých oblastech liší , pravděpodobně v důsledku rozdílné patogenity různých kmenů druhu Babesia v různých ekologických podmínkách . Závažnost babeziózy souvisí s rozsahem replikace parazita v červených krvinkách hostitele s následnou lýzou buněk. Byla pozorována široká škála klinických příznaků, jako je anorexie, letargie, ikterus, zvracení a výrazná ztráta tělesné kondice, spolu s různými klinicko-patologickými abnormalitami, včetně hemoglobinurie, hypoglykémie, poruch acidobazické rovnováhy, azotémie a zvýšení hladin jaterních enzymů . Dále B. gibsoni způsobuje regenerativní hemolytickou anémii a trombocytopenii . Sférocytóza a pozitivní výsledky přímého Coombsova testu naznačují imunitní složku. Častým nálezem je trombocytopenie. V tomto sdělení popisujeme klinicko-hematobiochemická, radiografická a ultrasonografická pozorování u velmi vzácného případu peritoneálního výpotku způsobeného patogenetickým účinkem infekce Babesia gibsoni.
2. Popis případu
Pětiletý pes plemene labrador byl v červenci 2013 předveden do veterinární výukové nemocnice Guru Angad Dev Veterinary and Animal Sciences University, Ludhiana, s distenzí břicha a přetrvávající anorexií v posledních dvou dnech. Pes vykazoval špatnou tělesnou kondici. Při fyzikálním vyšetření byl pes pyretický (104 °C), se srdeční frekvencí 148 tepů za minutu a dechovou frekvencí 58 dechů za minutu. Sliznice byly bledé. Ze psa byla odstraněna klíšťata, která byla identifikována jako Rhipicephalus sanguineus.
Vzorky krve byly předloženy k hematologickému a biochemickému vyšetření séra.
2.1. Hematologická a biochemická analýza
Hematologická a biochemická analýza prokázala středně těžkou až těžkou anémii se zvýšeným bilirubinem, alaninaminotransferázou (ALT), alkalickou fosfatázou (ALP), kreatininem, dusíkem močoviny v krvi (BUN), celkovým počtem leukocytů, hypoalbuminémií a hypoproteinémií byly hematobiochemické změny (tabulka 1). Chronická jaterní insuficience by v případě babeziózy mohla vést k hypoalbuminémii . Hematologické parametry naznačovaly, že pes může mít krevní parazity nebo jiná příslušná infekční onemocnění. Zdá se, že patogeneze anémie zahrnuje nehemolytické a hemolytické mechanismy. Hemolýza může zahrnovat proteázy produkované napadajícím parazitem, imunitní reakci na parazitované buňky a/nebo oxidační poškození erytrocytů. Hodnoty MCV, MCH a MCHC byly jen na hranici normálního rozmezí (tabulka 1), což naznačuje, že anémie nebyla způsobena nedostatkem železa, ale MCV a MCHC často nedokážou správně rozlišit různé vzorce anémie . Nejčastější abnormalitou byla trombocytopenie. Příčinou trombocytopenie u babeziózy mohla být sekvestrace trombocytů ve slezině nebo imunitně zprostředkovaná destrukce trombocytů a rozvoj diseminované intravaskulární koagulace .
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Kahn et al. . | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
2.2. Jaké jsou výsledky vyšetření? Parazitologické vyšetření
Pro rozlišení těchto možností bylo provedeno mikroskopické vyšetření tenkých krevních nátěrů barvených Giemsou, připravených z okraje ucha, pod objektivem s olejovou imerzí (100x). Vyšetření odhalilo přítomnost prstencovitých, oválných, padáčkovitých a čárkovitých organismů o průměru asi 1-3 μm v erytrocytech (obr. 1). Na základě velikosti intracelulárních parazitů se v tomto případě zvažovala možnost, že pes byl infikován malými Babesia spp. zejména B. gibsoni. Stupeň parazitémie, vypočtený jako procento infikovaných červených krvinek spočítáním 1000 červených krvinek, byl 10,5 %. Klíšťata přítomná na psovi byla identifikována jako Rhipicephalus sanguineus. Skutečnost, že B. gibsoni nelze mikroskopicky odlišit od ostatních izolátů malých psích babezií, nás přiměla provést PCR pro konečnou diagnózu s použitím specifického primeru pro B. gibsoni .
2.3. Extrakce DNA
DNA z plné krve (300 μl) byla extrahována pomocí soupravy pro purifikaci DNA (QIAGEN, GmbH, Německo) podle pokynů výrobce.
Sada primerů obsahující přední primer (Gib599 F): 5′CTCGGCTACTTGCCTTGTC3′ a reverzní primer (Gib1270R): 5′GCCGAAACTGAAATAACGGC 3′ byla použita k amplifikaci 671 bp fragmentu oblasti genu 18 S rRNA specifického pro B. gibsoni . PCR směs se skládala z 1X molární koncentrace 12,5 µl master mixu (1X QIAGEN PCR pufr, 2,5 jednotky Taq DNA polymerázy, 200 µM každého dNTP a 1,5 mM MgCl2), 1,5 µl 10 pmol každého z příslušných primerů a 5 µl templátu jako zdroje DNA.
Po počáteční denaturaci při 95 °C po dobu 5 min bylo provedeno 30 cyklů denaturace (94 °C po dobu 45 s), žíhání (57 °C po dobu 1 min) a extenze (72 °C po dobu 1 min) a závěrečná extenze byla provedena při 72 °C po dobu 8 min. Do PCR reakce byla zahrnuta negativní kontrola vzorku (pouze DNA psí krve) a negativní kontrola DNA (voda Milli-Q v náhradě DNA). Produkty PCR byly zpracovány na 1,5% agarózovém gelu a obarveny ethidium bromidem. Velikost amplifikovaného produktu PCR byla 671 bp (Obrázek 2).
2.4. Průměrný vzorek. Analýza peritoneální tekutiny
Na základě distenze břicha bylo vysloveno podezření na ascites. Byla provedena peritoneální karta a odebrány 2 ml čiré peritoneální tekutiny. Peritoneální tekutina byla obvykle vyšetřena na barvu, zákal, celkovou bílkovinu a koncentraci albuminu. Tekutina byla průhledná a čirá. Celková bílkovina měla hodnotu 0,4 g/dl a albumin 0,2 g/dl, což svědčí o hypoproteinémii (0,4 g/dl) a hypoalbuminémii (0,2 g/dl).
2.5. Radiografie a ultrasonografie
Radiografie a ultrasonografie prokázaly vzhled broušeného skla a anechogenní oblast břicha (obr. 3 a 4). Případ byl tedy potvrzen jako ascites. Ačkoli mezi nejčastější klinické příznaky babeziózy patří anorexie, letargie, opakující se horečka, bledá sliznice a emeze , naše nálezy ukázaly, že je důležité nezanedbávat babeziózu v diferenciální diagnostice ascitu. Psi s ascitem by měli být podrobeni klasické parazitologické nebo molekulární diagnostice, aby se vyloučila babesióza. Organismy babesie infikují erytrocyty psů, což vede k hemolytické anémii. Je známo, že infekce B. gibsoni způsobuje závažnější klinické příznaky než infekce velkými Babesia spp. a může vést k syndromům dysfunkce více orgánů . Vzhledem k tomu, že pes byl těžce anemický s dalšími závažnými abnormalitami parametrů týkajících se životně důležitých orgánů, uhynul do dvou dnů po léčbě.
3. Závěr
Podle našich znalostí se jedná o první kazuistiku peritoneálního výpotku u psa v souvislosti s B. gibsoni diagnostikovanou mikroskopickým vyšetřením a polymerázovou řetězovou reakcí (PCR) v kombinaci s analýzou peritoneální tekutiny, radiografií a ultrasonografií.
Konflikt zájmů
Autoři prohlašují, že v souvislosti s publikací tohoto článku nedošlo ke konfliktu zájmů.