Alai

Požadavek na spolehlivé bicistronní nebo multicistronní vektory v systémech pro přenos genů je v popředí zájmu bio/biomedicínských technologií. Metoda, která poskytuje účinnou koexpresi více heterologních proteinů, by byla cenná pro mnoho aplikací, zejména v lékařské vědě pro léčbu různých typů onemocnění. V této studii jsme navrhli a zkonstruovali bicistronní expresní vektor s použitím samočinného peptidu 2A odvozeného z viru hmyzu Thosea asigna (T2A). Ten vykazoval nejúčinnější štěpení sekvence 2A. Byly zkonstruovány dvě verze vektoru na bázi T2A prohozením sekvencí DNA kódujících zájmové proteiny, N-myristoylovaný protein a protein s jaderným návratem, před a za linkerem 2A. Naše výsledky ukázaly, že byly zjištěny podobné úrovně exprese mRNA a byla pozorována 100% účinnost štěpení T2A. Nicméně jsme také uvedli objasněný důkaz, že N-myristoylovaný protein nelze umístit za sekvenci 2A. Vzhledem k tomu, že se proteinový produkt nedokáže přemístit do plazmatické membrány v důsledku změněného procesu myristoylace, má pozice genu vektoru založeného na T2A význam pro subcelulární lokalizaci N-myristoylovaného proteinu. Proto bylo toto pozorování označeno jako bezpečnostní opatření pro použití peptidu 2A. Pro přijetí technologie peptidu 2A pro generování bicistronní nebo multicistronní exprese je třeba při návrhu vektoru pečlivě zvážit polohu transgenu, signální sekvence a posttranslační modifikace každého jednotlivého proteinu.