4.2.1.2 Sichtbare spektrometrische Methoden
CBZ und PHT sind zwei AEDs, die gleichzeitig verwendet werden. In dieser Arbeit wird eine PLS-Kalibrierungsmethode für die gleichzeitige spektrophotometrische Bestimmung von CBZ und PHT im Plasma beschrieben. Binäre Standardmischungen von CBZ und PHT wurden durch Anwendung von PLS-1 auf ihre UV-Spektren aufgelöst. Nach der Extraktion der Drogen wurde das entsprechende UV-Spektrum mittels PLS-Regression analysiert, um die Konzentration der Drogen im unbekannten Plasma zu berechnen. Ein Leave-One-Out-Kreuzvalidierungsverfahren wurde eingesetzt, um mit PRESS die optimale Anzahl latenter Variablen zu ermitteln. Eine HPLC-Methode wurde auch für die gleichzeitige Bestimmung von zwei Drogen im Plasma und in Methanol angewendet. Die mit PLS erzielten mittleren Wiederfindungsraten betrugen 98,4 und 98,2 für CBZ und PHT, die mit HPLC erzielten 100,1 bzw. 101,7. Obwohl die HPLC-Methode eine bessere Leistung als die PLS-Methode zeigte, wurde festgestellt, dass die mit der PLS-Methode erzielten Ergebnisse mit denen der HPLC-Methode vergleichbar waren.
Zwei spektrophotometrische Methoden werden für die Bestimmung von OXC in Bulk- und Dosierungsformen unter Verwendung von Folin-Ciocalteus Phenolreagenz (FCP) und 3-Methyl-2-benzothiazolinonhydrazinhydrochlorid (MBTH) als Reagenzien vorgeschlagen. Bei der ersten Methode wird das FCP-Reagenz zu OXC in alkalischem Medium gegeben und die Absorption bei 760 nm gemessen (Methode A), bei der anderen Methode wird ein festes Volumen MBTH nach Behandlung von OXC mit Eisenchlorid zugegeben und die Absorption bei 456 nm gemessen (Methode B). Bei beiden Methoden entspricht die Menge des gebildeten Chromogens der Menge an OXC, und es wurde festgestellt, dass die gemessene Absorption linear mit der Konzentration von OXC ansteigt, was durch die Korrelationskoeffizienten von 0,9985 bzw. 0,9984 für die Methoden A und B bestätigt wird. Die Systeme gehorchen dem Beer’schen Gesetz für 5-30 bzw. 10-50 μg/ml für Methode A bzw. B. Das scheinbare molare Absorptionsvermögen wurde für die Methoden A und B mit 8,06 × 103 bzw. 3,126 × 103 L/mol/cm berechnet. Die LOD und LOQ wurden für Methode A mit 1,6 und 5 μg/ml und für Methode B mit 3 und 10 μg/ml berechnet. Die Ungenauigkeiten der Methoden zwischen und innerhalb eines Tages lagen im Bereich von 1,1-1,7 % und 0,9-1,1 % für Methode A und 1,1-1,9 % und 0,6-0,9 % für Methode B. Die Genauigkeit lag zwischen 98,9-99,7 % und 99,3-100,1 % für Methode A bzw. B. Es wurden keine Interferenzen durch gängige pharmazeutische Hilfsstoffe beobachtet. Die Methoden wurden erfolgreich auf die Bestimmung von OXC in Tablettenzubereitungen angewandt.
CBZ unterliegt einer enzymatischen Biotransformation durch Epoxidierung unter Bildung seines Metaboliten CBZ-E. Für die gleichzeitige Bestimmung von CBZ und CBZ-E im Plasma wurde eine einfache chemometrisch unterstützte spektrophotometrische Methode vorgeschlagen. Zur Abtrennung der Analyten aus dem Plasma wurde ein Flüssigextraktionsverfahren angewandt, und die UV-Absorptionsspektren der resultierenden Lösungen wurden einer PLS-Regression unterzogen. Die optimale Anzahl der latenten PLS-Variablen wurde anhand der PRESS-Werte der Leave-One-Out-Kreuzvalidierung ausgewählt. Eine HPLC-Methode wurde ebenfalls zum Vergleich herangezogen. Die jeweiligen mittleren Wiederfindungen für die Analyse von CBZ und CBZ-E in synthetischen Mischungen betrugen 102,57 (± 0,25)% und 103,00 (± 0,09)% für PLS und 99,40 (± 0,15)% und 102,20 (± 0,02)%. Die Konzentrationen von CBZ und CBZ-E wurden bei fünf Patienten ebenfalls mit der PLS- und der HPLC-Methode bestimmt. Die Ergebnisse zeigten, dass die mit PLS erhaltenen Daten mit denen der HPLC-Methode vergleichbar waren.
Eine selektive und empfindliche Methode wurde für die Bestimmung der Antikonvulsiva Vigabatrin (I) (CAS 60643-86-9) und Gabapentin (II) (CAS 60142-96-3) entwickelt. Die Methode basiert auf der Kondensation der Wirkstoffe über ihre Aminogruppen mit Acetylaceton und Formaldehyd nach der Hantzsch-Reaktion, wobei die stark fluoreszierenden Dihydropyridin-Derivate entstehen. Die gelblich-orange Farbe wurde für I und II auch spektrophotometrisch bei 410 bzw. 415 nm gemessen. Die Absorptions-Konzentrations-Diagramme waren geradlinig über die Bereiche 10-70 und 20-140 μg/mL für I bzw. II. Die Fluoreszenz-Konzentrationsdiagramme waren in den Bereichen 0,5-10 und 2,5-20 μg/mL linear mit minimalen Nachweisgrenzen (S/N = 2) von 0,05 μg/mL (~ 2,1 × 10- 8 mol/L) bzw. 0,1 μg/mL (~ 5,8 × 10- 7 mol/L) für I bzw. II. Die spektrophotometrische Methode wurde zur Bestimmung von I und II in den Tabletten angewandt. Die prozentualen Wiederfindungen ± SD (n = 6) betrugen 99,45 ± 0,13 bzw. 98,05 ± 0,53. Die spektrofluorimetrische Methode wurde erfolgreich auf die Bestimmung von I und II in aufgestocktem Humanurin und -plasma angewendet. Die prozentualen Wiederfindungen ± SD (n = 5) betrugen 98,77 ± 0,29 und 98,39 ± 0,53 für Urin und 99,32 ± 0,74 und 98,90 ± 0,96 für Plasma für I und II. Bei den gleichzeitig verabreichten Arzneimitteln Valproinsäure (CAS 99-66-1), Diphenylhydantoin (CAS 57-41-0), Phenobarbital (CAS 50-06-6), Carbamazepin (CAS 298-46-4), Clonazepam (CAS 1622-61-3), Clobazam (CAS 22316-47-8) und Cimetidin (CAS 51481-61-9) wurden keine Interferenzen festgestellt. Es wird ein Vorschlag für den Reaktionsweg unterbreitet. Die Vorteile der vorgeschlagenen Methode gegenüber der bestehenden Methode werden erörtert.
Ein Nah-Infrarot (IR)-Spektrophotometer, eine integrierende Optik und ein Parallel-Vektor-Supercomputer werden eingesetzt, um ein mathematisches Modell zu entwickeln, das die Auflösungsrate einzelner intakter Tabletten aus Nah-Infrarot-Spektren vorhersagt (r2 = 0,985). Jede Tablette kann mit dem Spektralphotometer in weniger als 1 Minute zerstörungsfrei analysiert werden. Das Modell ermöglicht die Verwendung von Hunderten von Nah-IR-Wellenlängen bei der Bestimmung der Auflösungsgeschwindigkeit, was zu einer erhöhten Genauigkeit führt.
Eine 0,5-mL-Serumprobe, die verschiedene AEDs einzeln oder in Kombination enthielt, wurde alkalisch gemacht, mit Isooktan überlagert und in Gegenwart von KMnO4 gedämpft. Die Spektren der oxidierten Produkte in der organischen Schicht wurden im UV-Bereich aufgezeichnet. Oxidiertes Phenobarbiton und Primidon zeigen keinen Absorptionspeak, Diazepam ein Delta-Max bei 228 nm, Phenytoin bei 247 nm und Carbamazepin bei 247 und 372 nm. Folglich stören Phenobarbiton und Diazepam die Quantifizierung von Phenytoin nicht, Carbamazepin hingegen schon. Der Beitrag von Carbamazepin bei 247 nm wurde aus der Absorption bei 372 nm und dem Verhältnis der molaren Extinktionskoeffizienten bei den beiden Wellenlängen berechnet. Dieser Wert wurde von den A247-Gesamtwerten subtrahiert, um die tatsächlichen, auf Phenytoin zurückzuführenden Werte zu erhalten. Auf diese Weise wurde eine Methode zur gleichzeitigen Analyse von Carbamazepin und Phenytoin in einer einzigen Probe entwickelt.
Carbamazepin und 5,5-Diphenylhydantoin werden gleichzeitig aus 100 bis 200 μl Blut mit 1,2-Dichlorethan extrahiert. 5,5-Diphenylhydantoin wird durch ein einstufiges Waschen in Alkali entfernt. Das Dichlorethan wird weiter mit Säure gewaschen und dann zur Trockne eingedampft. 5,5-Diphenylhydantoin wird in der Laugenwäsche durch ein Benzophenon-Verfahren bestimmt; Carbamazepin wird im getrockneten Rückstand durch das zuvor beschriebene 9-Methylacridin-Verfahren bestimmt. Die kombinierte Methode ist schnell, zuverlässig und hat eine Nachweisgrenze von weniger als 0,1 mg/100 mL für jeden Wirkstoff.
Ein UV-spektrophotometrisches Verfahren für die Mikrobestimmung von Carbamazepin in Blut wird beschrieben, das auf der ursprünglichen 9-Methylacridin-Methode basiert, die von K.H. Beyer, K. Klinge, Arzneim. Forsch. 19 (1969) 1759-1760). Carbamazepin wird mit Dichlormethan aus dem Blut extrahiert, das anschließend mit Lauge und Säure gewaschen wird. Ein Aliquot des Extraktionsmittels wird zur Trockne eingedampft und der Rückstand kurz mit Salzsäure bei 150°C erhitzt. Nach Entfernung unspezifischer Störungen mit n-Heptan wird die Extinktion des säurekatalysierten Umlagerungsprodukts (9-Methylacridin) bei 258 nm bestimmt. Das resultierende Verfahren ist schnell, zuverlässig, empfindlich und spezifisch. Es erfordert 100-200 μl Probe für eine einzige Schätzung und hat eine Nachweisgrenze von weniger als 0,1 mg/100 mL. Es wird der Schluss gezogen, dass die Methode für den routinemäßigen klinischen Einsatz geeignet ist.
Eine spezifische direkte gaschromatographische Methode zur Bestimmung von Carbamazepin und, semiquantitativ, 10,11-Epoxycarbamazepin in Serum wird beschrieben. Die durchschnittliche Wiederfindungsrate von Carbamazepin beträgt 98 %, und der Fehler bei der Doppelbestimmung liegt bei ± 4 %. Die Methode wird mit der klassischen spektrophotometrischen Methode von Herrmann verglichen. Im Material von 103 Patienten betrug die mittlere Serumkonzentration von Carbamazepin 25,5 ± 12,8 μmol/L mit GLC und 23,0 ± 12,6 μmol/L mit Spektralphotometrie. Der Unterschied war hoch signifikant. Das Blutprobenvolumen beträgt 1/10 des Volumens, das für die Spektralphotometrie benötigt wird.