Wirkung von Digibind™ und DigiFab™ auf die Digoxinmessung im Serum
Digibind und DigiFab sind Fab-Fragmente von Antidigoxin-Antikörpern, die zur Behandlung einer lebensbedrohlichen akuten Digoxin-Überdosierung eingesetzt werden. Digibind, das erste Antidot zur Behandlung einer Digoxin-Überdosis, ist seit 1986 in den Vereinigten Staaten erhältlich (Glaxo Wellcome Inc.), und vor kurzem, im Jahr 2001, hat die Food and Drug Administration der Vereinigten Staaten (FDA) DigiFab für die Behandlung von Digoxin-Überdosen zugelassen. Digibind wird hergestellt, indem Schafe mit einem Digoxin-Human-Albumin-Konjugat immunisiert werden, gefolgt von der Isolierung des Digoxin-spezifischen Antikörpers aus dem Blut und einem Papain-Verdau, um das Fab-Fragment des Antikörpers zu erzeugen. Das Fab-Fragment des Antidigoxin-Antikörpers wird dann weiter gereinigt. DigiFab wird hergestellt, indem Schafen Digoxin-Dicarboxymethylamin, ein Digoxin-Analogon, injiziert wird, gefolgt von der Isolierung des Antidigoxin-Antikörpers aus dem Blut, dem Papain-Verdau und der anschließenden Reinigung des Fab-Fragments durch Affinitätschromatographie. Das Molekulargewicht von DigiFab (46 000 Da) ist dem Molekulargewicht von Digibind (46 200 Da) ähnlich. In der Regel beträgt die Digibind-Dosis das 80-fache der Digoxin-Körperbelastung; ist weder die eingenommene Dosis noch die Digoxin-Plasmakonzentration bekannt, werden dem Patienten in der Regel 380 mg Digibind injiziert. Die Halbwertszeit des Fab-Fragments beim Menschen beträgt 12-20 Stunden, kann sich aber bei Patienten mit Nierenversagen verlängern. Digibind und DigiFab sind in ihrer Digoxin-Bindungskapazität gleichwertig. Darüber hinaus sind beide Verbindungen in der Lage, endogenes DLIS zu binden.
Zusätzlich zu Digoxin zeigt Digibind die Fähigkeit, Cardenolid, das in Position 3 glykosyliert ist (Digitoxin und Ouabain), mit einer ähnlichen Potenz zu neutralisieren, unabhängig von Substitutionen im Steroidteil des Moleküls. Daher ist Digibind bei der Behandlung von Pflanzenvergiftungen mit Fingerhut, der verschiedene Herzglykoside enthält, wirksam. Rich et al. wiesen die erfolgreiche Behandlung eines 22-jährigen Mannes mit Digibind nach, der absichtlich eine Überdosis eines selbst hergestellten Fingerhut-Extrakts eingenommen hatte. Darüber hinaus ist Digibind in der Lage, sowohl Herzglykoside als auch die entsprechenden Aglykone zu neutralisieren – zum Beispiel Oleandrin, den aktiven Bestandteil von Oleanderextrakt – und ist bei der Behandlung einer lebensbedrohlichen Oleandertoxizität wirksam. Darüber hinaus kann Digibind bei der Behandlung von Chan Su-Überdosierungen wirksam sein – Chan Su ist ein chinesisches Arzneimittel, das Bufalin und andere kardioaktive Steroide aus der Klasse der Bufadienolide enthält -, aber die Wirksamkeit von Digibind bei der Behandlung von Chan Su-Vergiftungen ist im Vergleich zu seiner Wirksamkeit bei der Behandlung von Digoxin-Überdosierungen gering. Dies ist auf die geringe Spezifität von Digibind bei der Neutralisierung von Cinobufagin und Cinobufatolin zurückzuführen, die ebenso wie Krötengift Bestandteile von Chan Su sind.
Sowohl Digibind als auch DigiFab stören die Serum-Digoxin-Messung mittels Immunoassays. Das Ausmaß der Interferenz hängt vom Assay-Design und der Spezifität des Antidigoxin-Antikörpers ab. Der Mikropartikel-Enzym-Immunoassay für Digoxin (MEIA auf dem AxSYM-Analysegerät, Abbott Laboratories, Abbott Park, IL) sowie der Stratus-Digoxin-Assay zeigten Digoxin-Werte, die höher waren als die gemessene freie Digoxin-Konzentration in Gegenwart von Digibind. McMillin et al. untersuchten die Auswirkungen von Digibind und DigiFab auf 13 verschiedene Digoxin-Immunoassays. Bei Digibind und DigiFab wurden positive Interferenzen in Gegenwart und Abwesenheit von Digoxin beobachtet, wobei das Ausmaß der Interferenz bei DigiFab etwas geringer war. Das Ausmaß der Interferenz variierte bei den einzelnen Methoden erheblich, wobei die Digoxin-Methoden IMMULITE®, Vitros®, Dimension® und Access® die höchste Interferenz aufwiesen. Minimale Interferenzen wurden bei den FPIA-, MEIA-, SYNCHRON- und CEDIA-Methoden beobachtet. Die Autoren merkten außerdem an, dass die Überwachung von freiem Digoxin (im proteinfreien Ultrafiltrat) diese Interferenz eliminiert, da sowohl Digibind als auch DigiFab aufgrund ihres ungefähren Molekulargewichts von 46 000 Da im proteinfreien Ultrafiltrat nicht vorhanden sind. Digibind und DigiFab stören die Digoxinmessung im Serum nicht, wenn ein chromatographisches Verfahren wie die Flüssigkeitschromatographie in Kombination mit der Massenspektrometrie verwendet wird. Kanno et al. beschrieben eine Methode zur gleichzeitigen Analyse von Digoxin, Digitoxin und verwandten Verbindungen mittels Flüssigchromatographie in Kombination mit Tandem-Massenspektrometrie. Oiestad et al. beschrieben ebenfalls eine Flüssigchromatographie-Tandem-Massenspektrometrie-Methode (LC-MS/MS) für Digoxin und Digitoxin in Vollblut bei Autopsiefällen. Die Proben wurden durch Flüssig-Flüssig-Extraktion mit Ethylacetat/Heptan/Dichlormethan (3 : 1 : 1 nach Volumen) aufbereitet, und die chromatographische Trennung erfolgte mit einer C-18-Umkehrphasensäule. Die Massendetektion erfolgte durch Elektrospray im positiven Ionenmodus an Ammoniumaddukten, und als interner Standard wurde deuteriertes Digoxin (Digoxin-d3) verwendet. Chromatographische Methoden werden in klinischen Laboratorien jedoch nur selten angewandt, obwohl forensische Toxikologielaboratorien und kriminaltechnische Laboratorien, die mit der Untersuchung von Todesfällen befasst sind, mit solchen Analysegeräten ausgestattet sind.