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Sind Sie neugierig auf Chemilumineszenz-ELISAs, wissen aber nicht genau, was sie sind oder wie sie zu verwenden sind? In unserem Video Ein Vergleich zwischen kolorimetrischen und Chemilumineszenz-ELISAs wird erläutert, wie ähnlich diese beiden Testarten sind und wie sie Ihre Labortests verbessern können.

Sehen Sie sich unser Video an:

• Erfahren Sie, wie Chemilumineszenz- und kolorimetrische ELISAs Biomarker messen
• Erkunden Sie die verschiedenen Arten von Plattenlesegeräten, die für die Durchführung jedes Assays verwendet werden
• Vergleichen Sie die Komponenten jedes Assays

Ein Vergleich zwischen kolorimetrischen und Chemilumineszenz-ELISAs

Video Transcript

Hallo, Ich bin Christi Caillouette von ALPCO! Heute werde ich Ihnen einen Vergleich zwischen kolorimetrischen und chemilumineszenten Enzymimmunoassays, auch ELISAs genannt, vorstellen.

Prinzip der Sandwich-ELISAs

Es gibt zwar viele Arten von Assays, aber die ELISAs, auf die ich mich heute beziehen werde, sind Sandwich-Assays. Bei Sandwich-ELISAs ist die Platte mit einem Antikörper beschichtet, der sich spezifisch an den gewünschten Analyten bindet. Nach einem Waschschritt werden ein Nachweisantikörper und eine Enzymmarkierung hinzugefügt, die an den Analyten binden. Ein Substrat wird zugegeben, um eine Reaktion in den Vertiefungen zu erzeugen. Je nach Art des Assays wird entweder Farbe oder Licht erzeugt. Diese Reaktion kann mit einem Plattenlesegerät gemessen werden. Das Ausmaß der Farbveränderung oder des emittierten Lichts zeigt die Menge des Analyten in der Probe an.

Messung unbekannter Konzentrationen von Biomarkern

Bei kolorimetrischen und chemilumineszenten Assays werden bekannte Standards verwendet, um eine Standardkurve zur Messung der unbekannten Konzentration eines Analyten in Proben zu erstellen. Je nach Kit wird dies mit Hilfe von Softwareprogrammen mit 4- oder 5-Parameter-Algorithmen zur logistischen Kurvenanpassung erreicht. Beide Arten von Kits liefern dem Benutzer Messungen des Analyten auf sehr ähnliche Weise.

Kolorimetrische ELISAs

Kolorimetrische ELISAs erfordern ein Standard-Mikroplattenlesegerät, um die Farbwechselreaktion zwischen der Enzymmarkierung und dem Substrat zu erkennen. Das Lesegerät sendet eine Wellenlänge, in der Regel 450 nm, durch jede Vertiefung, um die optische Dichte oder „OD“ der Proben zu bestimmen. Je nach Plattenlesegerät liegen die OD-Werte zwischen 0 und 4 auf die tausendste Dezimalstelle genau. Die OD-Werte sind durch die Kapazität des Spektralphotometers begrenzt.

Durchsatz von Chemilumineszenz-ELISAs

Chemilumineszenz-ELISAs erfordern ein Mikroplatten-Lesegerät, das in der Lage ist, die Lumineszenz zu messen, um die Lichtreaktion zwischen dem Enzymmarker und dem Substrat nachzuweisen. Das von der Reaktion in den Vertiefungen abgegebene Licht wird über ein Glasfaserkabel an einen Photomultiplier im Lesegerät weitergeleitet, der relative Lichteinheiten (RLUs) ausgibt. Je nach Plattenlesegerät können die RLUs von Hunderten bis Millionen reichen. Diese Spanne von Einheiten bietet den Benutzern eine bessere analytische Empfindlichkeit und einen breiteren dynamischen Bereich, da sie eine größere Trennung zwischen den Punkten ermöglicht und die Beschränkungen der optischen Dichtemessungen eines Standard-Mikroplattenlesegeräts verringert.

Kolorimetrische vs. Chemilumineszenz-ELISAs

Nun werde ich Ihnen zeigen, was im Allgemeinen in unseren kolorimetrischen und chemilumineszenten ELISA-Kits enthalten ist und wie sich diese Kits nur geringfügig unterscheiden. Ich zeige Ihnen den kolorimetrischen Humaninsulin-ELISA von ALPCO und unseren STELLUX Chemi Active GLP-1 (7-36) amide ELISA.

Kolorimetrische Humaninuslin-ELISA-Komponenten

Zunächst beginnen wir mit dem kolorimetrischen Humaninsulin-ELISA von ALPCO. In diesem kolorimetrischen Assay erhalten Sie:

• 96 Mikrotiterplatte – die Platte ist durchsichtig, um OD-Messungen der Farbe in der Platte zu ermöglichen
• Nullstandard
• Standards, A bis E – jedes Fläschchen enthält bekannte Werte von Insulin, um die Standardkurve zu erstellen
• Kontrollen – enthalten bekannte Werte von Insulin zur Qualitätskontrolle.
• Enzymmarkierter Nachweisantikörper
• Waschpufferkonzentrat
• TMB-Substrat – färbt die Vertiefungen während der Inkubation blau.
• Stopplösung – wird zugegeben, um die Farbänderungsreaktion in den Vertiefungen zu stoppen und die Vertiefungen gelb zu färben.
• und Plattenversiegler

STELLUX® Chemilumineszenz Aktives GLP-1 (7-36) amid ELISA Komponenten

Als nächstes haben wir den STELLUX® Chemi Aktives GLP-1 (7-36) amid ELISA von ALPCO. In diesem Chemilumineszenz-Assay erhalten Sie:

• Active GLP-1 96-Well-Mikroplatte – Beachten Sie, dass die Chemi-Platte schwarz und nicht durchsichtig ist. Eine schwarze Platte reduziert die Hintergrundlichtinterferenz beim Ablesen der Platte.
• Standards
• Kontrollwerte
• Assay-Puffer
• Detektor-Antikörper
• Detektor-Antikörper-Puffer
• Waschpuffer-Konzentrat
• Streptavidin-HRP – das als Enzym-Markierung dient.
• Streptavidin-HRP-Puffer – der verwendet wird, um das Streptavidin-HRP auf Arbeitsstärke zu verdünnen.
• Chemilumineszenz-Substrat A
• Chemilumineszenz-Substrat B – die kombiniert werden, um ein Chemilumineszenz-Substrat in Arbeitsstärke herzustellen, das mit der Enzymmarkierung interagiert, um die Chemilumineszenz-Reaktion in jeder Vertiefung zu erzeugen.
• Plattenversiegler

Schlussfolgerung

Wie Sie sehen, unterscheiden sich einige der Reagenzien zwischen kolorimetrischen und chemilumineszenten ELISAs, aber das Prinzip jedes Assays ist ähnlich und beide ermöglichen es Ihnen, die Konzentration unbekannter Analyten in Proben zu messen. Ob Sie nun kolorimetrische Kits verwenden oder unsere Chemilumineszenz-Assays ausprobieren möchten, wir haben etwas für Sie. ALPCO hilft Ihnen, die Möglichkeiten für Ihr Labor zu erkunden. Besuchen Sie unsere Website, um unser komplettes ELISA-Angebot zu sehen. Wir haben viele großartige Ressourcen, die Ihnen bei Ihren Projekten helfen können, also schauen Sie sich bitte um.

Danke fürs Zuschauen!

Um mehr über die Produkte von ALPCO zu erfahren, kontaktieren Sie bitte Robert Somogyi unter [email protected].