Alai

Trypsin spaltet spezifisch Peptidbindungen an der C-terminalen Seite von Lysin- und Arginin-Resten, mit Ausnahme von -Arg-Pro- und -Lys-Pro-Bindungen, die normalerweise resistent gegen Proteolyse sind. Hier berichten wir über den Nachweis einer tryptischen -Lys-Pro-Spaltung in modifizierten Oligotuftsin-Derivaten, Ac-4-NH2) (1), unter Verwendung von hochauflösender Massenspektrometrie und HPLC als primäre Methoden zur Analyse von proteolytischen Reaktionen. Die proteolytische Anfälligkeit von -Lys-Pro-Bindungen war stark von den flankierenden Resten abhängig, und die Flexibilität des Peptidrückgrats könnte eine Voraussetzung für diese ungewöhnliche Spaltung sein. Während -Lys-Gly- Bindungen in 1 schnell gespalten wurden, verhinderte die Modifikation dieser Lys-Reste durch Anhängen eines ß-Amyloid(4-10)-Epitops zur Bildung von -Lys(X)-Gly-Derivaten die Spaltung dieser Bindung und ermöglichte die Trypsin-Spaltung von -Lys-Pro- Bindungen, wobei der Weg dieses Abbaus unabhängig von der Art der Lys-Nε-Seitenketten (Acetylgruppe, Aminosäure, Peptid) war. Die Substitution der Lys-Reste durch Ala an den P′2-Positionen verringerte die tryptische Spaltung, während der Ersatz der sperrigen Seitenkette von Thr an den P2-Positionen die Spaltung von -Lys-Pro-Bindungen stark erhöhte. Die zirkulardichroistischen Daten der modifizierten Oligotuftsin-Derivate deuten auf eine erhöhte Flexibilität des Peptidrückgrats hin, die eine Voraussetzung für eine erhöhte Anfälligkeit für die Spaltung von -Lys-Pro-Bindungen ist. Diese Ergebnisse der Oligotuftsin-Derivate könnten Auswirkungen auf den proteolytischen Abbau von Zielpeptiden haben, die spezifische Konformationsvoraussetzungen erfordern. Copyright © 2007 Europäische Peptidgesellschaft und John Wiley & Sons, Ltd.