Abstract
Ein fünf Jahre alter Labrador-Rüde wurde in der Veterinärmedizinischen Lehrklinik der GADVASU mit den Hauptbeschwerden eines aufgeblähten Abdomens, Fieber und Anorexie vorgestellt. Der Hund erwies sich als träge mit erhöhter Rektaltemperatur (104°F), Herzfrequenz (148 pro Minute) und Atemfrequenz (58 pro Minute). Die Untersuchung des Blutausstrichs und die PCR-Untersuchung ergaben, dass der Hund positiv auf Babesia gibsoni reagierte. Erhöhtes Bilirubin, Alanin-Aminotransferase (ALT), alkalische Phosphatase (ALP), Kreatinin, Blut-Harnstoff-Stickstoff (BUN), Gesamtleukozytenzahl, Hypoalbuminämie und Hypoproteinämie waren hämatobiochemische Veränderungen. Die Röntgenaufnahme und die Ultraschalluntersuchung zeigten ein glasiges Aussehen bzw. einen schalltoten Bereich des Abdomens.
1. Einleitung
Die Babesiose des Hundes ist eine der wichtigsten lebensbedrohlichen, durch Zecken übertragenen Hämoprotozoen-Erkrankungen des Hundes, die durch intraerythrozytäre Protozoen-Parasiten der Gattung Babesia verursacht wird, die weltweit und in verschiedenen Teilen Indiens einschließlich des Bundesstaates Punjab vorkommen. Die Prävalenz sowohl von B. canis als auch von B. gibsoni ist in Indien unterschiedlich (0,66 bis 21,7 %), und in Ludhiana wurde eine Prävalenz von 5,26 % festgestellt. Die Pathogenese der Babesiose bei Hunden variiert in verschiedenen Regionen, möglicherweise aufgrund der unterschiedlichen Pathogenität verschiedener Babesia-Stämme unter verschiedenen ökologischen Bedingungen. Der Schweregrad der Babesiose hängt mit dem Ausmaß der Parasitenvermehrung in den roten Blutkörperchen des Wirts und der anschließenden Zelllyse zusammen. Eine Vielzahl von klinischen Symptomen wie Anorexie, Lethargie, Ikterus, Erbrechen und ein deutlicher Verlust der Körperkondition wurden zusammen mit variablen klinisch-pathologischen Anomalien wie Hämoglobinurie, Hypoglykämie, Säure-Basen-Störungen, Azotämie und erhöhten Leberenzymwerten beobachtet. Außerdem verursacht B. gibsoni eine regenerative hämolytische Anämie und Thrombozytopenie. Sphärozytose und positive direkte Coombs-Testergebnisse deuten auf eine immunmediäre Komponente hin. Thrombozytopenie ist ein häufiger Befund. In der vorliegenden Mitteilung beschreiben wir die klinisch-hämatobiochemischen, röntgenologischen und ultrasonographischen Beobachtungen in einem sehr seltenen Fall von Peritonealerguß aufgrund der pathogenen Wirkung einer Babesia gibsoni-Infektion.
2. Fallbeschreibung
Ein fünfjähriger Labrador-Rüde wurde im Juli 2013 im Veterinary Teaching Hospital der Guru Angad Dev Veterinary and Animal Sciences University in Ludhiana mit abdominaler Distension und anhaltender Anorexie in den letzten zwei Tagen vorgestellt. Der Hund befand sich in einem schlechten körperlichen Zustand. Bei der körperlichen Untersuchung war der Hund fieberhaft (104°F), mit einer Herzfrequenz von 148 Schlägen pro Minute und einer Atemfrequenz von 58 Atemzügen pro Minute. Die Schleimhäute waren blass. Zecken wurden von dem Hund entfernt und als Rhipicephalus sanguineus identifiziert.
Blutproben wurden zur hämatologischen und serumbiochemischen Analyse eingereicht.
2.1. Hämatologische und biochemische Analyse
Die hämatologische und biochemische Analyse ergab eine mäßige bis schwere Anämie mit erhöhtem Bilirubin, Alanin-Aminotransferase (ALT), alkalischer Phosphatase (ALP), Kreatinin, Blut-Harnstoff-Stickstoff (BUN), Gesamtleukozytenzahl, Hypoalbuminämie und Hypoproteinämie als hämatobiochemische Veränderungen (Tabelle 1). Eine chronische Leberinsuffizienz bei Babesiose könnte zu einer Hypoalbuminämie führen. Die hämatologischen Parameter deuteten darauf hin, dass der Hund Blutparasiten oder andere relevante Infektionskrankheiten haben könnte. An der Pathogenese der Anämie scheinen nichthämolytische und hämolytische Mechanismen beteiligt zu sein. Bei der Hämolyse kann es sich um Proteasen handeln, die vom eindringenden Parasiten produziert werden, um eine Immunreaktion auf parasitierte Zellen und/oder um eine oxidative Schädigung der Erythrozyten. Die MCV-, MCH- und MCHC-Werte lagen gerade an der Grenze des Normalbereichs (Tabelle 1), was darauf hindeutet, dass die Anämie nicht auf Eisenmangel zurückzuführen ist, aber MCV und MCHC sind häufig nicht in der Lage, die verschiedenen Muster der Anämie korrekt zu unterscheiden. Die häufigste Abnormität war die Thrombozytopenie. Der Grund für die Thrombozytopenie bei Babesiose könnte auf eine Sequestrierung von Thrombozyten in der Milz oder eine immunvermittelte Thrombozytenzerstörung und die Entwicklung einer disseminierten intravasalen Gerinnung zurückzuführen sein.
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| Kahn et al. . | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
2.2. Parasitologische Untersuchung
Um zwischen diesen Möglichkeiten zu unterscheiden, wurde die mikroskopische Untersuchung von Giemsa-gefärbten dünnen Blutausstrichen, die vom Ohrrand präpariert worden waren, unter einer Ölimmersionslinse (100x) durchgeführt. Die Untersuchung ergab das Vorhandensein von ringförmigen, ovalen, fallschirm- und kommaähnlichen Organismen mit einem Durchmesser von etwa 1-3 μm in den Erythrozyten (Abbildung 1). Aufgrund der Größe der intrazellulären Parasiten wurde in diesem Fall die Möglichkeit in Betracht gezogen, dass der Hund mit kleinen Babesia spp. infiziert war, insbesondere mit B. gibsoni. Der Grad der Parasitämie, berechnet als Prozentsatz der infizierten roten Blutkörperchen durch Zählung von 1000 roten Blutkörperchen, betrug 10,5 %. Die auf dem Hund vorhandenen Zecken wurden als Rhipicephalus sanguineus identifiziert. Da B. gibsoni mikroskopisch nicht von anderen kleinen Hundebazillen-Isolaten unterschieden werden kann, führten wir für die endgültige Diagnose eine PCR mit einem B. gibsoni-spezifischen Primer durch.
2.3. DNA-Extraktion
DNA aus Vollblut (300 μL) wurde mit dem DNA-Reinigungskit (QIAGEN, GmbH, Deutschland) gemäß den Anweisungen des Herstellers extrahiert.
Ein Primer-Set, das einen Vorwärtsprimer (Gib599 F): 5′CTCGGCTACTTGCCTTGTC3′ und einen Rückwärtsprimer (Gib1270R): 5′GCCGAAACTGAAATAACGGC 3′ enthielt, wurde verwendet, um ein 671 bp-Fragment der für B. gibsoni spezifischen 18 S rRNA-Genregion zu amplifizieren. Die PCR-Mischung bestand aus einer 1X molaren Konzentration von 12,5 µL Mastermix (1X QIAGEN PCR-Puffer, 2,5 Einheiten Taq-DNA-Polymerase, 200 µM jedes dNTP und 1,5 mM MgCl2), 1,5 µL von je 10 pmol der jeweiligen Primer und 5 µL Template als DNA-Quelle.
Nach einer anfänglichen Denaturierung bei 95°C für 5 Minuten wurden 30 Zyklen mit Denaturierung (94°C für 45 Sekunden), Annealing (57°C für 1 Minute) und Extension (72°C für 1 Minute) durchgeführt und die abschließende Extension erfolgte bei 72°C für 8 Minuten. Eine negative Probenkontrolle (nur Hundeblut-DNA) und eine negative DNA-Kontrolle (Milli-Q-Wasser als DNA-Ersatz) wurden in die PCR-Reaktion einbezogen. Die PCR-Produkte wurden auf einem 1,5%igen Agarosegel aufgetragen und mit Ethidiumbromid angefärbt. Die Größe des amplifizierten PCR-Produkts betrug 671 bp (Abbildung 2).
2.4. Peritonealflüssigkeitsanalyse
Auf Grund der abdominalen Distension wurde Aszites vermutet. Es wurde ein Peritonealtab durchgeführt und 2 mL klare Peritonealflüssigkeit entnommen. Die Peritonealflüssigkeit wurde typischerweise auf Farbe, Trübung, Gesamtprotein- und Albumin-Konzentration untersucht. Die Flüssigkeit war transparent und klar. Gesamtprotein und Albumin lagen bei 0,4 g/dL bzw. 0,2 g/dL, was auf eine Hypoproteinämie (0,4 g/dL) und eine Hypoalbuminämie (0,2 g/dL) hinweist.
2.5. Röntgen und Ultraschall
Röntgen und Ultraschall zeigten ein glasiges Aussehen bzw. einen schalltoten Bereich des Abdomens (Abbildungen 3 und 4). Der Fall wurde somit als Aszites bestätigt. Obwohl zu den häufigsten klinischen Anzeichen einer Babesiose Anorexie, Lethargie, rezidivierendes Fieber, blasse Schleimhäute und Erbrechen gehören, zeigten unsere Ergebnisse, dass die Babesiose bei der Differentialdiagnose von Aszites nicht vernachlässigt werden darf. Hunde mit Aszites sollten einer klassischen parasitologischen oder molekularen Diagnose unterzogen werden, um eine Babesiose auszuschließen. Babesia-Organismen infizieren die Erythrozyten von Hunden und führen zu hämolytischer Anämie. Eine Infektion mit B. gibsoni verursacht bekanntermaßen schwerwiegendere klinische Symptome als eine Infektion mit großen Babesia spp. und kann zu Syndromen multipler Organdysfunktion führen. Da der Hund stark anämisch war und weitere schwere Anomalien bei den Parametern der lebenswichtigen Organe aufwies, starb er innerhalb von zwei Tagen nach der Behandlung.
3. Schlussfolgerung
Unseres Wissens nach ist dies der erste Fallbericht über einen Peritonealerguss bei einem Hund in Verbindung mit einer B. gibsoni-Infektion bei einem Hund, der durch mikroskopische Untersuchung und Polymerase-Kettenreaktion (PCR) in Kombination mit Peritonealflüssigkeitsanalyse, Röntgen und Ultraschall diagnostiziert wurde.
Interessenkonflikt
Die Autoren erklären, dass es keinen Interessenkonflikt im Zusammenhang mit der Veröffentlichung dieser Arbeit gibt.