El requisito de vectores bicistrónicos o multicistrónicos fiables en los sistemas de administración de genes está a la vanguardia de la tecnología bio/biomédica. Un método que proporcione una coexpresión eficiente de múltiples proteínas heterólogas sería valioso para muchas aplicaciones, especialmente en la ciencia médica para tratar varios tipos de enfermedades. En este estudio, diseñamos y construimos un vector de expresión bicistrónico utilizando un péptido 2A de autocorte derivado de un virus del insecto Thosea asigna (T2A). Este péptido mostró la escisión más eficiente de la secuencia 2A. Se construyeron dos versiones del vector basado en T2A, cambiando las secuencias de ADN que codifican las proteínas de interés, la proteína N-mirosilada y la proteína de atracción nuclear, aguas arriba y aguas abajo del enlazador 2A, respectivamente. Nuestros resultados mostraron que se encontraron niveles similares de expresión de ARNm y se observó un 100% de eficiencia de escisión de T2A. Sin embargo, también informamos de la evidencia clara de que la proteína N-mirosilada no puede situarse aguas abajo de la secuencia 2A. Dado que el producto proteico no se transloca a la membrana plasmática debido al proceso de miristoilación alterado, la posición del gen del vector basado en T2A es significativa para la localización subcelular de la proteína N-mirosilada. Por lo tanto, la observación fue marcada como una precaución para el uso del péptido 2A. Para adoptar la tecnología del péptido 2A para generar la expresión bicistrónica o multicistrónica, el diseño del vector debe considerarse cuidadosamente para la posición del transgén, las secuencias de señal y las modificaciones postraduccionales de cada proteína individual.
By adminLeave a Comment on Deterioro de una proteína dirigida a la membrana traducida a partir de un gen corriente abajo de una conjunción de péptidos T2A «autolimpiables»