4.2.1.2 Méthodes spectrométriques visibles
La CBZ et la PHT sont deux AED qui sont utilisés simultanément. Dans cet article, une méthode d’étalonnage PLS est décrite pour la détermination spectrophotométrique simultanée de CBZ et de PHT dans le plasma. Des mélanges binaires standard de CBZ et de PHT ont été résolus par application de la méthode PLS-1 à leurs spectres UV. Ensuite, les solutions binaires standard, dopées au plasma, ont été préparées, et après l’extraction des médicaments, leur spectre UV correspondant a été analysé par régression PLS pour calculer la concentration des médicaments dans le plasma inconnu. Une procédure de validation croisée » leave-one-out » a été utilisée pour trouver le nombre optimal de variables latentes à l’aide de PRESS. Une méthode HPLC a également été appliquée pour la détermination simultanée de deux médicaments dans le plasma et dans le méthanol. Les récupérations moyennes obtenues par PLS étaient de 98,4 et 98,2 pour CBZ et PHT et celles obtenues par HPLC étaient de 100,1 et 101,7, respectivement. Bien que la méthode HPLC ait montré de meilleures performances que la PLS, il a été constaté que les résultats obtenus par PLS étaient comparables à ceux obtenus par la méthode HPLC .
Deux méthodes spectrophotométriques sont proposées pour le dosage de l’OXC en vrac et dans les formes de dosage en utilisant le réactif phénolique de Folin-Ciocalteu (FCP) et le chlorhydrate de 3-méthyl-2-benzothiazolinone hydrazine (MBTH) comme réactifs. La première méthode consiste à ajouter le réactif FCP à l’OXC en milieu alcalin, puis à mesurer l’absorbance à 760 nm (méthode A), et l’autre méthode consiste à ajouter un volume fixe de MBTH après traitement de l’OXC par le chlorure ferrique et à mesurer l’absorbance à 456 nm (méthode B). Dans les deux méthodes, la quantité de chromogène formé correspond à la quantité d’OXC et l’absorbance mesurée augmente linéairement avec la concentration d’OXC, ce qui est corroboré par les coefficients de corrélation de 0,9985 et 0,9984 pour les méthodes A et B, respectivement. Les systèmes obéissent à la loi de Beer pour 5-30 et 10-50 μg/mL pour les méthodes A et B, respectivement. L’absorptivité molaire apparente a été calculée à 8,06 × 103 et 3,126 × 103 L/mol/cm pour les méthodes A et B, respectivement. La limite de détection (LOD) et la limite de quantification (LOQ) ont été calculées à 1,6 et 5 μg/mL pour la méthode A et à 3 et 10 μg/mL pour la méthode B. Les imprécisions inter- et intra-journalières des méthodes ont été trouvées dans la gamme de 1,1-1,7 % et 0,9-1,1 % pour la méthode A, et 1,1-1,9 % et 0,6-0,9 % pour la méthode B. La précision était comprise entre 98,9-99,7 % et 99,3-100,1 % pour les méthodes A et B, respectivement. Aucune interférence des excipients pharmaceutiques courants n’a été observée. Les méthodes ont été appliquées avec succès au dosage de l’OXC dans les préparations de comprimés .
La CBZ subit une biotransformation enzymatique par époxydation avec la formation de son métabolite, la CBZ-E. Une méthode spectrophotométrique simple assistée par chimiométrie a été proposée pour la détermination simultanée de la CBZ et de la CBZ-E dans le plasma. Une procédure d’extraction liquide a été utilisée pour séparer les analytes du plasma, et les spectres d’absorption UV des solutions résultantes ont été soumis à une régression PLS. Le nombre optimal de variables latentes PLS a été sélectionné en fonction des valeurs PRESS de la validation croisée « leave-one-out ». Une méthode HPLC a également été utilisée pour la comparaison. Les taux de récupération moyens respectifs pour l’analyse de la CBZ et de la CBZ-E dans les mélanges synthétiques étaient de 102,57 (± 0,25) % et 103,00 (± 0,09) % pour la PLS et de 99,40 (± 0,15) % et 102,20 (± 0,02) %. Les concentrations de CBZ et de CBZ-E ont également été déterminées chez cinq patients à l’aide des méthodes PLS et HPLC. Les résultats ont montré que les données obtenues par PLS étaient comparables à celles obtenues par la méthode HPLC .
Une méthode sélective et sensible a été développée pour la détermination des anticonvulsivants vigabatrin (I) (CAS 60643-86-9) et gabapentin (II) (CAS 60142-96-3). La méthode est basée sur la condensation des médicaments par leurs groupes amino avec l’acétylacétone et le formaldéhyde selon la réaction de Hantzsch, ce qui donne des dérivés de dihydropyridine hautement fluorescents. La couleur jaune-orange a également été mesurée par spectrophotométrie à 410 et 415 nm pour I et II, respectivement. Les courbes absorbance-concentration étaient rectilignes sur les gammes 10-70 et 20-140 μg/mL pour I et II, respectivement. Quant aux courbes de fluorescence-concentration, elles étaient linéaires sur les plages de 0,5 à 10 et de 2,5 à 20 μg/mL avec des limites de détection minimales (S/N = 2) de 0,05 μg/mL (~ 2,1 × 10- 8 mol/L) et de 0,1 μg/mL (~ 5,8 × 10- 7 mol/L) pour I et II, respectivement. La méthode spectrophotométrique a été appliquée à la détermination de I et II dans leurs comprimés. Les pourcentages de récupération ± SD (n = 6) étaient de 99,45 ± 0,13 et 98,05 ± 0,53, respectivement. La méthode spectrofluorimétrique a été appliquée avec succès à la détermination de I et II dans l’urine et le plasma humains enrichis. Les récupérations en % ± SD (n = 5) étaient de 98,77 ± 0,29 et 98,39 ± 0,53 pour l’urine et de 99,32 ± 0,74 et 98,90 ± 0,96 pour le plasma, pour I et II, respectivement. Aucune interférence n’a été rencontrée avec les médicaments coadministrés : acide valproïque (CAS 99-66-1), diphénylhydantoïne (CAS 57-41-0), phénobarbital (CAS 50-06-6), carbamazépine (CAS 298-46-4), clonazépam (CAS 1622-61-3), clobazam (CAS 22316-47-8) ou cimétidine (CAS 51481-61-9). Une proposition de la voie de réaction est suggérée. Les avantages des méthodes proposées par rapport à la méthode existante sont discutés .
Un spectrophotomètre proche infrarouge (IR), une optique d’intégration et un superordinateur à vecteurs parallèles sont employés pour développer un modèle mathématique qui prédit la vitesse de dissolution de comprimés individuels intacts à partir des spectres proche infrarouge (r2 = 0,985). Chaque comprimé peut être analysé de manière non destructive par le spectrophotomètre en moins d’une minute. Le modèle permet d’utiliser des centaines de longueurs d’onde dans le proche infrarouge pour déterminer la vitesse de dissolution, ce qui entraîne une précision accrue .
Un échantillon de 0,5 ml de sérum, contenant différents AED, seuls ou en combinaison, a été rendu alcalin, recouvert d’isooctane et cuit à la vapeur en présence de KMnO4. Les spectres des produits oxydés dans la couche organique ont été enregistrés dans le domaine UV. La phénobarbitone et la primidone oxydées ne présentent aucun pic d’absorption ; le diazépam un delta-max à 228 nm ; la phénytoïne à 247 nm ; et la carbamazépine à 247 et 372 nm. Par conséquent, la phénobarbitone et le diazépam n’interfèrent pas dans le dosage de la phénytoïne, mais la carbamazépine le fait. La contribution de la carbamazépine à 247 nm a été calculée à partir de l’absorption à 372 nm et du rapport de ses coefficients d’extinction molaire aux deux longueurs d’onde. Ce résultat a été soustrait des valeurs totales de l’A247 pour obtenir les valeurs réelles dues à la phénytoïne. Ainsi, une méthode d’analyse simultanée de la carbamazépine et de la phénytoïne dans un seul échantillon a été développée .
La carbamazépine et la 5,5-diphénylhydantoïne sont extraites simultanément de 100 à 200 μL de sang avec du 1,2-dichloroéthane. La 5,5-diphénylhydantoïne est éliminée par un lavage en une étape dans un alcali. Le dichloroéthane est ensuite lavé à l’acide, puis évaporé à sec. La 5,5-diphénylhydantoïne est déterminée dans le lavage alcalin par un procédé à la benzophénone ; la carbamazépine est déterminée dans le résidu sec par le procédé à la 9-méthylacridine décrit précédemment. La méthode combinée est rapide, fiable et présente un seuil de détection inférieur à 0,1 mg/100 ml pour chaque médicament .
On décrit une procédure spectrophotométrique UV pour la microdétermination de la carbamazépine dans le sang qui est basée sur la méthode originale de la 9-méthylacridine proposée par K.H. Beyer, K. Klinge, Arzneim. Forsch. 19 (1969) 1759-1760). La carbamazépine est extraite du sang avec du dichlorométhane, qui est ensuite lavé avec un alcali et un acide. Une aliquote de l’agent d’extraction est évaporée jusqu’à siccité et le résidu est chauffé brièvement avec de l’acide chlorhydrique à 150°C. Après élimination des interférences non spécifiques avec du n-heptane, l’absorbance du produit du réarrangement catalysé par l’acide (9-méthylacridine) est déterminée à 258 nm. La procédure qui en résulte est rapide, fiable, sensible et spécifique. Elle nécessite 100-200 μL d’échantillon pour une seule estimation et présente un seuil de détection inférieur à 0,1 mg/100 mL. Il est conclu que la méthode est adaptée à une utilisation clinique de routine .
Une méthode spécifique de chromatographie en phase gazeuse directe pour déterminer la carbamazépine et, de manière semi-quantitative, la 10,11-époxy carbamazépine dans le sérum est décrite. La récupération moyenne de la carbamazépine est de 98%, et l’erreur sur la détermination en double est de ± 4%. La méthode est comparée à la méthode spectrophotométrique classique de Herrmann. Sur le matériel de 103 patients, la concentration sérique moyenne de carbamazépine était de 25,5 ± 12,8 μmol/L avec la CGL et de 23,0 ± 12,6 μmol/L avec la spectrophotométrie. La différence était hautement significative. Le volume de l’échantillon sanguin est de 1/10e de celui nécessaire à la spectrophotométrie.