Alai

L’exigence de vecteurs bicistroniques ou multicistroniques fiables dans les systèmes d’administration de gènes est à la pointe de la technologie bio/biomédicale. Une méthode qui permet une co-expression efficace de plusieurs protéines hétérologues serait précieuse pour de nombreuses applications, notamment dans le domaine médical pour le traitement de divers types de maladies. Dans cette étude, nous avons conçu et construit un vecteur d’expression bicistronique utilisant un peptide 2A auto-cleaving dérivé d’un virus de l’insecte Thosea asigna (T2A). Ce peptide présente le clivage le plus efficace de la séquence 2A. Deux versions du vecteur basé sur la T2A ont été construites en intervertissant les séquences d’ADN codant pour les protéines d’intérêt, la protéine N-myristoylée et la protéine de localisation nucléaire, en amont et en aval du lieur 2A, respectivement. Nos résultats ont montré que les niveaux d’expression de l’ARNm étaient similaires et que l’efficacité de clivage de la T2A était de 100%. Néanmoins, nous avons également rapporté la preuve évidente que la protéine N-myristoylée ne peut pas être placée en aval de la séquence 2A. Puisque le produit protéique ne parvient pas à se déplacer vers la membrane plasmique en raison d’un processus de myristoylation altéré, la position du gène du vecteur à base de T2A est significative de la localisation subcellulaire de la protéine N-myristoylée. Par conséquent, cette observation a été marquée comme une précaution pour l’utilisation du peptide 2A. Pour adopter la technologie du peptide 2A pour générer l’expression bicistronique ou multicistronique, la conception du vecteur doit être soigneusement considérée pour la position du transgène, les séquences de signal et les modifications post-traductionnelles de chaque protéine individuelle.