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Abstract

La polyarthrite rhumatoïde (PR) est une maladie auto-immune. Le venin de guêpe (WV), qui est considéré comme une médecine populaire traditionnelle dans la nationalité Jingpo au Yunnan, en Chine, soulage la polyarthrite rhumatoïde. L’étude actuelle visait à examiner l’effet du venin de guêpe sur l’amélioration des symptômes de la polyarthrite rhumatoïde chez les rats expérimentaux. Nous avons établi un modèle d’arthrite induite par le collagène de type II (CII) chez des rats SD et examiné l’inhibition de l’inflammation et de la réponse auto-immune. Les effets anti-arthritiques de WV ont été évalués par le gonflement de la patte, et le score histopathologique et les changements histopathologiques de la patte affectée ont été évalués. Les effets anti-inflammatoires ont été évalués par le niveau d’IL-6, TNF-α, IL-1β, et le nombre de cellules inflammatoires dans le sang périphérique. L’altération du rapport des sous-ensembles de cellules T dans la rate des rats a été détectée par cytométrie de flux, et en même temps, l’indice des viscères et les niveaux d’immunoglobulines sériques ont été évalués. Les résultats suggèrent que diverses doses de WV (0,125, 0,25 et 0,5 mg/kg) atténuent significativement le gonflement des pattes et le score d’arthrite chez les rats de l’ICA par rapport au contrôle non traité (). WV (0,25 et 0,5 mg/kg) a soulagé les lésions du tissu synovial des articulations de la cheville et les scores histopathologiques d’hyperplasie des synoviocytes et d’infiltration des cellules inflammatoires par rapport au groupe véhicule (). En ce qui concerne la régulation immunologique, 0,5 mg/kg de WV a abaissé les niveaux de globuline sérique immunitaire (), et nous avons également constaté que WV (0,5 mg/kg) a supprimé la réponse immunitaire des cellules Th, tout en améliorant les fonctions des cellules Tc et des cellules Treg dans les cellules de la rate de façon marquée (). L’action immunosuppressive du WV affichée était analogue à son effet inhibiteur sur les niveaux d’IL-1β, TNF-α, IL-8, IL-6, COX-2 et PGE2 dans le sérum de rat. En conclusion, ces résultats ont démontré que les WV présentaient une activité anti-arthritique, qui pourrait être associée à leurs effets inhibiteurs sur l’immunorégulation et l’action anti-inflammatoire.

1. Introduction

La polyarthrite rhumatoïde (PR) est une maladie auto-immune chronique qui peut évoluer vers des complications systémiques, des handicaps physiques et même une mort précoce . L’hyperplasie des cellules synoviales, l’inflammation chronique de la synovie et la destruction des cartilages et des os sont les principales caractéristiques de la PR. En outre, les effets synergiques des cellules T, des cellules B et des cytokines pro-inflammatoires jouent également un rôle clé dans le processus physiopathologique. Lorsque les cellules T CD4+ sont activées, elles produisent des cytokines proinflammatoires qui renforcent la réponse immunitaire en stimulant d’autres cellules mononucléaires, les fibroblastes synoviaux, les chondrocytes et les ostéoclastes. La libération de ces cytokines pro-inflammatoires, notamment le TNF-α, l’IL-6 et l’IL-1β, peut contribuer à la synovite .

Actuellement, les médicaments de traitement clinique utilisés pour traiter la PR se concentrent principalement sur la réduction des médiateurs inflammatoires, tels que les anti-inflammatoires non stéroïdiens (AINS), les antirhumatismaux modificateurs de la maladie (DMARD) et les agents biologiques. Par exemple, le méthotrexate (MTX), un analogue des folates, en tant qu’AINS, a été approuvé par la FDA pour la PR en 1988. En outre, il est devenu le plus largement utilisé dans le traitement de la PR en raison de son activité immunosuppressive, de son effet anti-inflammatoire et de son faible coût. Cependant, le MTX n’est pas un agent thérapeutique idéal en raison de ses effets secondaires indésirables sur les systèmes neuronal, gastro-intestinal et immunitaire, tout comme d’autres médicaments. C’est pourquoi un nombre croissant de personnes cherchent de nouvelles alternatives pour remédier à l’inefficacité et à la sécurité de ces médicaments. Selon la théorie de la médecine traditionnelle chinoise (MTC), la PR est considérée comme un syndrome d’arthralgie (« Bi Zheng » en MTC), probablement causé par des agents pathogènes exogènes (vent, humidité, chaleur ou froid). L’application de la MTC dans la prévention et le traitement des maladies a une histoire de plusieurs siècles, une importance croissante dans le traitement de la PR attribuée à son efficacité remarquable, mais moins d’effets secondaires et de coûts .

La thérapie par le venin, comme une approche de médecine complémentaire et alternative, a été utilisée pendant plusieurs siècles pour traiter la douleur, l’inflammation et l’arthrite dans la médecine populaire . Dès la période des États en guerre, le Canon intérieur de l’empereur jaune (« Huangdi Neijing » en chinois) comporte la mention « la piqûre d’abeille est thérapeutique malgré le risque toxique encouru ». Selon la recherche médicale moderne, le venin d’abeille (BV) présente des effets antiarthritiques, anti-inflammatoires et analgésiques attribuables à l’activation de l’inhibition centrale et à la modulation du système immunitaire par de multiples mécanismes . Plusieurs essais cliniques ont également montré que le BV pouvait améliorer les symptômes liés à l’arthrite .

Le venin de guêpe contient une variété de constituants biologiquement actifs, notamment des amines biogènes, des substances de masse moléculaire élevée (telles que des enzymes, des allergènes et des peptides bioactifs) et des toxines polyamines. Le venin de guêpe présente divers effets pharmacologiques dans le traitement de la douleur, des maladies inflammatoires et des maladies neurodégénératives. Vespa magnifica (Smith) est une espèce de guêpe sociale que l’on trouve dans le Yunnan, en Chine. Ces dernières années, de nombreux composés ayant des activités anticoagulantes, antiplaquettaires, anti-inflammatoires et immunosuppressives ont été extraits de son venin. Sur la base de son effet remarquable sur la polyarthrite rhumatoïde, il est devenu une habitude d’être largement utilisé à Jingpo, une minorité nationale chinoise . Néanmoins, à notre connaissance, il n’y a eu que peu de rapports sur les actions antirhumatismales du venin de guêpe.

Dans le travail actuel, le modèle d’arthrite induite par le collagène (CIA) a été adopté pour reproduire étroitement la pathogenèse de la PR. Les changements dans le volume de la patte ont été classiquement utilisés pour évaluer les effets anti-inflammatoires sur la PR comme d’habitude . En outre, nous avons évalué l’effet du WV (venin de guêpe de Vespa magnifica) dans le même modèle. Enfin, l’efficacité du WV sur l’anti-inflammatoire et l’immunomodulation a été observée par la coloration H&E du tissu articulaire, la cytométrie en flux des sous-ensembles de cellules T dans la rate, ainsi que l’ELISA des sérums IL-1β, IL-6, TNF-α, IL-8, COX-2, PGE2 et des facteurs rhumatoïdes (IgG, IgA et IgM).

2. matériaux et méthodes

2.1. Animaux expérimentaux

Des rats mâles SD (60 rats, 180-220 g) ont été obtenus auprès de Hunan Slake Jingda Laboratory Animal Co, Ltd. Les animaux ont été logés dans des cages standard en polypropylène tapissées de cosses brutes (renouvelées après 48 h). L’animalerie a été maintenue selon un cycle lumière/obscurité de 12 heures, à une température d’environ 22 ± 2°C et une humidité relative de 60-70 %, et les animaux ont eu un accès libre à l’eau et à la nourriture standard. Les rats ont été répartis au hasard entre 8 témoins et 52 modèles, puis une période minimale de 7 jours a été accordée pour l’adaptation à chaque expérience. Toutes les procédures expérimentales ont été menées conformément au Guide pour le soin et l’utilisation des animaux de laboratoire (National Institutes of Health) et approuvées par le comité d’éthique de l’Université de Dali.

2.2. Modèle animal de CIA et protocole de traitement

Les rats ont été désinfectés avec de l’alcool et injectés par voie sous-cutanée au niveau de la vola pedis droite, du dos et de la queue avec 1 mg/ml d’émulsifiant CCII (Collagène de type II de poulet) pour la première immunisation, qui est composé de CCII (C9301, Sigma) émulsifié 1 : 1 avec de l’adjuvant de Freund incomplet (F5506, Sigma). Le jour de l’induction a été désigné comme le jour 0. La dose de rappel a été injectée à nouveau au niveau de l’abdomen, du dos et de la queue avec 1 ml d’émulsifiant CCII le jour 8. Le pied injecté a été défini comme le pied inflammatoire, tandis que l’autre pied sans injection a été noté comme le pied secondaire. Ensuite, les rats atteints d’arthrite induite par le collagène (AIC) ont été traités le 14e jour et leur traitement a pris fin le 28e jour. Après l’apparition de l’arthrite induite par le collagène, les rats modèles ont été répartis au hasard en cinq groupes en fonction des scores cliniques. Groupe I : groupe modèle ayant reçu une injection hypodermique (1 ml/kg) de solution saline normale comme véhicule. Groupes II-IV : les rats de l’ICA ont reçu une injection hypodermique de 0,125, 0,25 et 0,5 mg/kg de WV (venin de guêpe, provenant de Vespa magnifica (Smith) au Yunnan, Chine, poudre lyophilisée fabriquée à partir de l’exsudat des glandes de la queue des guêpes, diluée dans du sérum physiologique), respectivement, comme groupes de traitement. Groupe V : le groupe témoin positif a reçu du TwHF (Tripterygium wilfordii Hook F, n° 20181001, Huangshi Feiyun Pharmaceutical Co., Ltd.) à raison de 9 mg/kg de la même manière. Simultanément, le même volume de solution saline normale seule a été administré aux rats normaux du groupe témoin. Les rats ci-dessus ont tous eu une administration quotidienne pendant 14 jours.

2.3. Évaluation de base de l’arthrite expérimentale

La sévérité de l’ICA a été évaluée périodiquement en fonction du gonflement des pattes et des scores d’arthrite. Les rats ont été pesés aux jours 0-28 de l’étude, et l’épaisseur et le périmètre des chevilles du pied inflammatoire (le pied droit) et du pied secondaire (le pied gauche) ont été mesurés séparément par un pied à coulisse et un ruban adhésif aux jours 0, 14 et 28. Le score d’arthrite a été évalué sur la base des observations indépendantes de trois chercheurs. Chaque patte a été notée sur une échelle de 0 à 4, ce qui signifie que le score total maximum pour les deux articulations de la patte arrière était de 8. Les critères d’évaluation étaient les suivants : 0 = aucun œdème ni aucun changement visuel ; 1 = œdème léger et érythème limité ; 2 = œdème et érythème légers ; 3 = œdème évident et érythème significatif ; et 4 = œdème sévère et érythème étendu . Au jour 28, les animaux ont été sacrifiés, puis le sérum et les articulations secondaires de la cheville ont été collectés et traités pour des analyses ultérieures.

2.4. Histopathologie des articulations de la cheville

Les membres postérieurs gauches sans abattre les tissus voisins ont été immédiatement lavés avec du PBS pendant 2 à 3 fois, fixés avec du formol à 10% pendant 48 h, et décalcifiés avec de l’acide nitrique à 5% pendant 24 h jusqu’à ce que le cortex osseux soit facilement parcouru avec une pointe d’aiguille. Les échantillons ont été inclus dans des sections de paraffine et coupés en tranches (5 μm) pour la coloration de routine à l’hématoxyline-éosine (H&E). Les changements pathologiques des articulations ont été détectés à l’aide d’un microscope optique (Olympus, Japon) et photographiés. Les photos ont été prises à des grossissements de 200x. Les modifications de l’hyperplasie des synoviocytes et de l’infiltration des cellules inflammatoires ont également été détectées. Les changements histopathologiques ont été notés, respectivement, selon les critères suivants : 0 = aucun changement détectable ; 1 = léger ; 2 = modéré ; 3 = sévère .

2,5. Analyse de l’indice des viscères

Les rats ont été sacrifiés et le foie complet, la rate et le thymus ont été réséqués avec le tissu adipeux environnant et le fascia soigneusement séparés. La masse humide du foie, de la rate et du thymus a été mesurée par une balance électronique, et l’indice des viscères (comprenant l’indice du foie, de la rate et du thymus) a été calculé selon la formule suivante. Indice des viscères = masse de l’organe (mg)/masse corporelle (g) × 100%.

2,6. ELISA des indices biochimiques sériques

Le sérum des rats expérimentaux a été collecté, et les concentrations de TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-8, COX-2 et PGE2 ont été détectées par des kits de dosage immuno-enzymatique (ELISA) (Nanjing JianCheng, Chine) en suivant les instructions du fabricant. Les kits ELISA permettant de détecter les niveaux d’expression des IgA (ERC015), des IgG (ERC016) et des IgM (ERC017) ont été achetés auprès de NeoBioscience Co, Ltd, Shenzhen, Chine.

2.7. Cytométrie en flux de la rate arthritique

Le nombre de sous-ensembles de cellules T a été détecté en utilisant la cytométrie en flux. Les lymphocytes ont été récoltés à partir de cellules de rate de rat, qui ont été homogénéisées en passant à travers un tamis en nylon de 200 mesh. Les cellules ont été filtrées dans un tampon PBS contenant 10% de sérum bovin fœtal. La concentration cellulaire a été ajustée à environ 2 × 106/ml, et 3 ml de tampon de lyse des globules rouges (Solarbio, Chine) ont été ajoutés pour dissoudre les globules rouges pendant moins de 5 minutes. Ensuite, les cellules ont été centrifugées à 1200 rpm pendant 5 min, lavées deux fois avec le tampon FBS-PBS qui contient 10% de sérum fœtal bovin, puis centrifugées à 1200 rpm pendant 5 min. Chaque 100 μL de suspension cellulaire a été placé dans des tubes de centrifugation. Les lymphocytes ont été suivis par une coloration avec l’anti-CD3-FITC (n° 557354 ; BD, USA), l’anti-CD4-APC (n° 565432 ; BD, USA), l’anti-CD8-PerCP (n° 558824 ; BD, USA) et l’anti-CD25-PE (n° 554866 ; BD, USA). Les anticorps monoclonaux ont été ajoutés à chaque tube, remélangés et laissés sur la glace pendant 30 minutes. Le tampon FBS-PBS (1 ml) a été ajouté à chaque tube d’échantillon et centrifugé à 1200 rpm pendant 5 min, et le surnageant a été abandonné. L’étape précédente a été répétée deux fois afin que les cellules ne se liant pas aux anticorps monoclonaux soient complètement éluées. Les cellules expérimentales ont été mélangées avec 500 μL de tampon FBS-PBS. Les ratios de cellules T CD25+/CD4+ et CD4+/CD8+ ont été déterminés à l’aide d’un cytomètre de flux FACS Canto (BD, USA) .

2,8. Analyses statistiques

Les données ont été analysées statistiquement en utilisant SPSS10.0. Les données ont été présentées sous forme de moyenne ± écart-type de la moyenne (S.D.M). La signification des différences entre chaque groupe a été analysée par une ANOVA à sens unique suivie d’un test de Tukey. En particulier, le score d’arthrite et le score histopathologique ont été analysés par le test de la somme des rangs de Wilcoxon. Les valeurs de ont été considérées comme statistiquement significatives.

3. Résultats

3.1. WV soulage le symptôme de l’arthrite chez les rats CIA

Les symptômes arthritiques ont été induits avec succès chez les rats en injectant du collagène de type II selon les instructions, ce qui s’est incarné dans des signes macroscopiques significatifs de rougeur et de gonflement sévères dans la patte secondaire et l’articulation de la cheville des rats CIA dans la Figure1(a), si on les compare au groupe témoin sain. L’épaisseur et le périmètre de l’articulation de la cheville étaient apparemment plus importants dans les véhicules au 14e jour (figure 1(b)) par rapport à ceux des témoins ; cependant, ils étaient remarquablement réduits après le traitement par TwHF et tous les WV au 28e jour par rapport à ceux du groupe modèle (tous) (figure 1(b)). Lorsque nous avons mesuré l’épaisseur et le périmètre des articulations de la cheville dans le pied inflammatoire et le pied secondaire, les données ont montré une diminution évidente du gonflement (Figure 1(b)). Les résultats du degré de gonflement ont indiqué que WV pouvait contrôler l’œdème de la patte et soulager l’inflammation secondaire sur la patte et l’articulation de la cheville correspondant à l’effet TwHF.

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Figure 1

Effet du WV sur les symptômes arthritiques de chaque groupe. (a) Degré de gonflement des pattes dans tous les groupes. (b) L’épaisseur et le périmètre des articulations de la cheville à la fois dans le pied inflammatoire et le pied secondaire parmi tous les groupes. (c) Comparaison du score d’arthrite parmi tous les groupes.

En outre, le score d’arthrite a été diminué avec des degrés variables par le traitement de WV en fonction de la quantité de la dose comme le montre la figure 1 (c). Le score d’arthrite du groupe véhicule était de 6,5 ± 1,0 au jour 14 (vs jour 0, ). L’indice était significativement diminué dans le groupe traité par TwHF au jour 28, montrant 2,8 ± 0,8 (vs jour 14, ). De même, la diminution des indices par le WV était significative et dépendante de la dose (3,2 ± 0,6 à 0,5 mg/kg, 4,3 ± 0,7 à 0,25 mg/kg et 5,6 ± 0,7 à 0,125 mg/kg) (sévèrement contre 14 jours, ). Cela indique que la puissance du WV à 0,5 mg/kg était proportionnelle à celle du groupe traité avec le TwHF.

3.2. Le WV a soulagé les changements pathologiques des articulations des rats CIA

H&E coloration (Figure 2(a)) a montré que la membrane synoviale des articulations de la cheville des rats témoins avait un arrangement cellulaire régulier, sans hyperplasie synoviocytaire, sans infiltration de cellules inflammatoires, et une surface cartilagineuse lisse. En comparaison, l’architecture histologique des articulations des rats du groupe véhicule était nettement anormale avec une infiltration de cellules immunitaires, une hyperplasie des synoviocytes, un nombre accru de vaisseaux et une érosion du cartilage et de l’os. Les articulations des groupes TwHF et WV étaient significativement atténuées par rapport à celles du groupe véhicule et se rapprochaient de celles du groupe témoin. Les scores histopathologiques (figure 2(b)) indiquaient (groupe véhicule) l’anomalie de la cellule de revêtement synovial et l’infiltration de cellules inflammatoires dans les articulations arthritiques ; les traitements par TwHF et WV ont significativement diminué le score histopathologique moyen et restauré le cartilage par rapport au groupe véhicule ().

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Figure 2

Effets du WV sur la progression de l’arthrite et l’histologie articulaire chez les rats CIA. (a) Histopathologie des sections de tissus articulaires de rats CIA traités avec différentes doses de WV et TwHF et de rats normaux par coloration H&E. Grossissement original ×200. a, destruction osseuse ; b, infiltration de cellules immunitaires ; c, synovie hypertrophique. (b) Scores histopathologiques de l’hyperplasie des synoviocytes et de l’infiltration des cellules inflammatoires dans tous les groupes. , par rapport au groupe témoin ; , par rapport au groupe véhicule.

3.3. Effets du WV sur l’indice des viscères et les niveaux d’immunoglobulines sériques chez les rats CIA

Par rapport au groupe témoin, l’indice du foie du groupe véhicule a diminué de manière significative () et le WV (0,25 et 0,5 mg/kg) a augmenté de manière marquée (). Par rapport au groupe témoin, l’indice de la rate et l’indice du thymus du groupe véhicule ont augmenté de façon marquée () ; le TwHF et le WV ont joué un effet inhibiteur sur ceux-ci qui s’est particulièrement reflété dans l’effet de la dose de 0,5 mg/kg de WV sur l’indice du thymus (Figure 3(a)).

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Figure 3

Effets du WV sur l’indice des viscères et les taux d’immunoglobulines sériques chez les rats CIA. (a) Changements de l’indice de la rate, du thymus et du foie dans tous les groupes. (b) L’expression des taux d’IgG, d’IgA et d’IgM dans le sérum de tous les groupes. , par rapport au groupe témoin ; , par rapport au groupe véhicule.

Les niveaux d’expression des IgG, IgA et IgM ont été améliorés de façon spectaculaire chez les rats CIA () par rapport au groupe témoin, tandis qu’ils sont devenus plus faibles après le traitement par TwHF (). Et les taux d’IgG sériques ont diminué dans le groupe WV (0,5 mg/kg) par rapport au groupe véhicule (). Cette inhibition a également été appliquée aux IgA et IgM dans les groupes WV (0,25 et 0,5 mg/kg) (Figure 3(b)).

3.4. Effets du WV sur les sous-ensembles de cellules T dans la rate des rats CIA

Le nombre de cellules T CD4+ a significativement augmenté dans les groupes véhicules par rapport au groupe témoin (), tandis que ceux des groupes TwHF et WV (0,5 mg/kg) étaient significativement plus faibles que le groupe véhicule (Figure 4(a)). Par rapport au groupe témoin, le nombre de cellules T CD4+CD25+ dans le groupe véhicule a diminué de manière significative (), alors qu’il a augmenté de manière significative dans les groupes TwHF et WV (0,5 mg/kg) () mais pas de manière évidente dans les autres groupes (Figure 4(a)). Par rapport au groupe témoin, la réduction dans le groupe véhicule du nombre de cellules T CD8+ était remarquable, mais seul le WV (0,125 et 0,25 mg/kg) a fait augmenter les chiffres (, ) dans la figure 4(b).

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Figure 4

Le nombre de sous-ensembles de cellules T dans les cellules de la rate par cytométrie de flux. (a) Les résultats de la CMF sur le nombre de cellules Th et de cellules Tc (à gauche) ; les résultats de la CMF sur le nombre de cellules Treg (à droite). (b) Le diagramme à barres indique l’effet négatif du WV et du TwHF sur les cellules Th et l’effet positif sur les cellules Tc et les cellules Treg. , par rapport au groupe témoin ; , par rapport au groupe véhicule.

3.5. WV a régulé les cytokines et les médiateurs sériques chez les rats CIA

Les kits ELISA (Figure 5) ont montré que, par rapport au groupe témoin, les niveaux sériques de IL-1β, TNF-α, IL-6, PGE2, COX-2 et IL-8 ont été significativement augmentés dans le groupe véhicule et ont été nettement restaurés par TwHF (9 mg/kg) et WV (0,5 mg/kg) (). Parallèlement, les expressions de IL-6 et de PGE2 ont été supprimées par des doses de 0,125 et 0,25 mg/kg de WV (). Le WV (0,125 et 0,25 mg/kg) a également réduit l’expression de COX-2 et IL-8 par rapport au véhicule (, ). Cela indique que l’inflammation induite par le CCII a probablement médié les changements pathologiques observés chez les rats arthritiques, et que le WV pourrait atténuer la réponse inflammatoire.

Figure 5

Effets du WV sur les niveaux de IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, PGE2, et COX-2 dans le sérum des rats CCII. Les effets de la WV sur les niveaux d’IL-1β, de TNFα, d’IL-6, d’IL-8, de PGE2 et de COX-2 dans le sérum de rat CIA sont les suivants : , par rapport au groupe témoin ; , par rapport au groupe véhicule.

4. Discussion

La polyarthrite rhumatoïde est une maladie auto-immune chronique caractérisée par la douleur, l’enflure et la destruction progressive des articulations, entraînant une perte de fonction . cBien que les comprimés de méthotrexate (MTX) soient officiellement considérés comme un médicament de traitement de la polyarthrite rhumatoïde , ils sont généralement associés à des effets indésirables des médicaments (ADR) . Par conséquent, nous avons cherché à évaluer si le venin de guêpe (WV) pourrait représenter un médicament alternatif potentiel pour la PR.

L’étude actuelle est la première, à notre connaissance, à examiner le rôle thérapeutique du WV (de Vespa magnifica) dans l’arthrite induite par le collagène (CIA) induite chez les rats SD et comparée à l’effet cliniquement prouvé du TwHF. Tripterygium wilfordii Hook F (TwHF), également connu sous le nom de Lei Gong Teng dans la MTC, a été utilisé pour traiter la PR pendant de nombreuses années en Chine, et les extraits de TwHF ont montré des activités anti-inflammatoires et immunosuppressives à la fois in vivo et in vitro. Nous avons établi le modèle de rats CIA pendant 14 jours et retiré 12 incompétents apparents qui auraient pu être dus à un échec d’injection sur 52 rats, c’est-à-dire que les rats CIA avaient un taux d’arthrite de 77 %. Le groupe témoin n’a pas montré de signes d’œdème ou d’inflammation (Figures 1 et 5), et nos résultats sont en accord avec des études antérieures sur la PR et la CIA, qui ont rapporté que l’émulsifiant CCII a induit la gravité de l’œdème et des dommages inflammatoires dans les articulations . Ensuite, l’amélioration des symptômes dans le groupe WV (0,5 mg/kg) était similaire à celle du médicament positif TwHF, qui a été signalé pour inhiber la réponse inflammatoire de la PR , mais l’effet de la faible dose n’était pas significatif sur la réduction de l’œdème et l’inhibition de l’IL-1β et du TNF-α (Figures 1 et 5). De plus, nous avons remarqué que les rats du groupe véhicule avaient un pelage plus rugueux et un état mental plus mauvais que ceux du groupe contrôle ; ces conditions s’étaient transformées d’autant mieux dans le groupe traitement.

Pour évaluer davantage l’efficacité thérapeutique de WV, la coloration H&E a été effectuée dans les échantillons de tissus des articulations de la cheville arrière gauche pour analyser la caractéristique pathologique, et nous avons constaté que les cellules synoviales provoquent une inflammation, une prolifération et une invasion du cartilage et de l’os localisés dans le groupe véhicule (Figure 2), et ces changements macroscopiques sont conformes aux rapports précédents . De plus, le traitement par TwHF et WV pendant 14 jours a réduit de manière significative l’hyperplasie des cellules synoviales et l’infiltration des cellules inflammatoires par rapport au groupe non traité (Figure 2). La synovite chronique est la base pathologique de la PR. L’inflammation synoviale est due à une interaction complexe entre les synoviocytes et les cellules infiltrantes des systèmes immunitaires inné et adaptatif. Par conséquent, l’indice viscéral des organes immunitaires tels que la rate et le thymus a été calculé dans cette expérience. Il convient de mentionner que nous n’avons pas trouvé de différence significative de poids entre le groupe véhicule et le groupe traitement ; nous avons donc utilisé l’indice viscéral représentatif pour refléter la santé globale des rats. Nous avons constaté que le TwHF et le WV pouvaient diminuer l’augmentation de l’indice viscéral de la rate et du thymus chez les rats de l’ICA (Figure 3(a)) ; cela pourrait refléter leur rôle dans l’atténuation de l’amélioration immunitaire causée par la PR. Nous avons également remarqué le changement de l’indice hépatique au cours de ce processus ; nos résultats ont montré que le TwHF n’a pas relancé l’indice hépatique bien que son traitement ait été efficace, ce qui nous a rappelé sa toxicité pour le foie dans un rapport précédent . Heureusement, cela n’a pas été constaté dans le groupe WV (Figure 3(a)). À l’exception de la diminution de l’indice hépatique dans le groupe véhicule et TwHF, aucun effet secondaire n’a été observé chez ces rats, ce qui pourrait être dû à la faible dose utilisée. En outre, nous avons également détecté les facteurs rhumatoïdes (FR), en tant que marqueur diagnostique de la PR, comprenant principalement les isotypes IgG, IgA et IgM ; ils ont un taux de détection élevé chez les patients atteints de PR . Cette étude a révélé que les rats CIA non traités présentaient des taux d’anticorps IgG, IgA et IgM significativement plus élevés dans le sérum que ceux des groupes TwHF et WV (figure 3(b)) ; ces résultats concordent bien avec les données cliniques rapportées. Ainsi, on a pu constater que le TwHF et le WV (0,5 mg/kg) pouvaient réguler la réponse auto-immune excessive des rats CIA à un niveau proche de la normale. En revanche, l’effet de WV (0,125 et 0,25 mg/kg) n’était pas évident, tandis qu’il reste à voir si une dose plus élevée améliorera l’effet plutôt que d’agir comme un poison, donc nous nous sommes toujours concentrés sur ces trois doses pour explorer l’effet de WV sur la PR dans cette expérience.

Des recherches antérieures ont montré que l’inflammation synoviale recrute et active les cellules immunitaires en produisant des médiateurs, et les cellules T jouent des rôles vitaux dans la régulation de la PR . En ce qui concerne les rôles des cytokines pro-inflammatoires dans l’auto-immunité, il est essentiel de considérer l’équilibre entre les différents sous-ensembles de cellules T, principalement divisés en deux hypotypes selon leur fonction et leur phénotype : les cellules T auxiliaires (Th) CD4+ et les cellules T cytotoxiques (Tc) CD8+. Les cellules Th et les cellules Tc, caractérisées par la production de diverses cytokines spécifiques, facilitent la réponse immunitaire adaptative. En revanche, les cellules T (Treg) CD4+CD25+ jouent un rôle essentiel dans le maintien de la tolérance immunitaire en contrôlant les réponses inflammatoires et en supprimant l’activité des cellules immunitaires susmentionnées. Dans cette étude, nous avons constaté une forte concentration de cellules Th et Tc dans les cellules spléniques et avons également remarqué une altération de la fonction des cellules Treg chez les rats CIA. Heureusement, l’équilibre entre les sous-ensembles de cellules T a été protégé par le traitement par TwHF et WV (figure 4). Il convient de noter que l’accumulation de cellules immunitaires est le promoteur de l’inflammation articulaire locale, et que les cellules immunitaires activées libèrent une grande quantité de cytokines pro-inflammatoires, qui induisent ensuite l’activation et la prolifération des cellules synoviales et aggravent encore la progression de l’inflammation articulaire. Des études antérieures ont montré que l’IL-6 est la cytokine la plus dominante dans la pathogenèse de la PR, et des quantités excessives d’IL-1β, ainsi que de TNF-α et d’IL-8, ont été trouvées dans le liquide synovial des patients atteints de PR. La production de COX-2 et de PGE2 à la suite d’une stimulation par l’IL-1β a également augmenté, et leur blocage a permis d’atténuer considérablement les symptômes de la PR. Des constatations similaires ont été observées dans nos résultats expérimentaux, et nous avons confirmé que le TwHF et le WV (0,5 mg/kg) pouvaient réduire efficacement les niveaux d’IL-6, d’IL-8, de PGE2 et de COX-2 ; de même, les concentrations accrues d’IL-1β et de TNF-α induites par la PR ont été supprimées sauf pour les groupes WV (0,125 et 0.25 mg/kg) (Figure 5).

Ces résultats suggèrent que le WV a les fonctions de soulager le gonflement des articulations, d’inhiber l’inflammation synoviale, de supprimer la réponse immunitaire excessive et de protéger l’homéostasie immunitaire, ce qui peut améliorer les symptômes et devenir des remèdes efficaces pour la PR. Il a été signalé que le venin de guêpe contient un certain nombre de molécules bioactives, notamment des amines, des petits peptides et même des enzymes, des allergènes et des toxines de masse moléculaire élevée. Ce qui différencie le WV du BV, c’est que le BV a principalement des effets anti-inflammatoires, antioxydants et analgésiques sur la PR et qu’il contient une variété de peptides différents, dont la mélittine, la phospholipase A2, l’apamine, etc. Les mécanismes de traitement de la PR par ces deux venins peuvent être différents et méritent d’être étudiés plus avant. Bien qu’aucun effet secondaire n’ait été observé dans la gamme de 0,125 à 0,5 mg/kg de WV, une évaluation plus approfondie des principes actifs et de la sécurité de l’extrait de WV est nécessaire.

5. Conclusions

Le venin de guêpe a atténué l’hyperplasie synoviale et la destruction du cartilage causées par la CIA, probablement en raison de la réduction du facteur pro-inflammatoire et de l’effet d’immunorégulation. Cette étude a démontré que le venin de guêpe pouvait être une alternative thérapeutique potentielle pour la PR. En plus d’être une prescription populaire depuis de nombreuses années, le WV mérite d’être étudié davantage pour être découvert, exploré et reconnu.

Data Availability

Les données utilisées pour soutenir les résultats de cette étude sont incluses dans l’article et peuvent être mises à disposition gratuitement.

Approbation éthique

L’étude a été approuvée par le Comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux (IACUC) de l’Université de Dali.

Conflits d’intérêts

Les auteurs déclarent qu’il n’y a pas de conflits d’intérêts concernant la publication de cet article.

Contributions des auteurs

YG a rédigé le manuscrit et a aidé à la construction et au regroupement des modèles animaux. WXY et HL ont réalisé la coloration H&E et la cytométrie de flux. XMD et LLN ont été responsables des kits ELISA. ZBY, HRZ et HX ont largement contribué à la rédaction du manuscrit. ZBY et CGZ ont administré et supervisé le projet. Tous les auteurs ont lu et approuvé le manuscrit final.

Remerciements

Une partie de ce travail a été soutenue par le Centre d’innovation collaborative 2011 de la province du Yunnan pour l’entomocéutique. La présente étude a été financée par la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (subventions n° 81360679 et 81703742), la recherche fondamentale appliquée du Yunnan pour les jeunes chercheurs (subvention n° 2016FD074), la Fondation des sciences naturelles de la province du Yunnan (subvention n°. 2017FA050), et l’équipe d’innovation de l’Université de Dali en matière de pharmacie avancée de la bio-pharmacie entomologique R&D (subvention n° ZKLX2019101).