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Vous êtes curieux des tests ELISA de chimiluminescence, mais ne savez pas exactement ce qu’ils sont, ni comment les utiliser ? Notre vidéo Une comparaison des tests ELISA colorimétriques et de chimiluminescence aborde les similitudes entre ces deux types de tests et la façon dont ils peuvent améliorer vos tests en laboratoire.

Voyez notre vidéo pour :

• Apprendre comment les tests ELISA chimiluminescents et colorimétriques mesurent les biomarqueurs
• Explorer différents types de lecteurs de plaques utilisés pour effectuer chaque test
• Comparer les composants de chaque test

Une comparaison des tests ELISA colorimétriques et chimiluminescents

Transcription de la vidéo

Bonjour, Je suis Christi Caillouette de ALPCO ! Aujourd’hui, je vais vous présenter une comparaison des tests immuno-enzymatiques colorimétriques et chimioluminescents, aussi appelés ELISA.

Principe des ELISA sandwich

Bien qu’il existe de nombreux types de tests, les ELISA auxquels je vais faire référence aujourd’hui sont des tests sandwich. Les ELISAs sandwichs ont un anticorps enduit sur la plaque qui se lie spécifiquement à l’analyte désiré. Après une étape de lavage, on ajoute un anticorps de détection et un marqueur enzymatique qui se lient à l’analyte. Un substrat est ajouté pour générer une réaction dans les puits. Selon le type de test, une couleur ou une lumière est produite. Cette réaction peut être mesurée par un lecteur de plaques. Le degré de changement de couleur ou de lumière émise indique la quantité d’analyte dans l’échantillon.

Mesure des concentrations inconnues de biomarqueurs

Les tests colorimétriques et chimiluminescents utilisent tous deux des normes connues pour générer une courbe standard afin de mesurer la concentration inconnue d’un analyte dans les échantillons. Selon le kit, ceci est accompli en utilisant des programmes logiciels avec des algorithmes d’ajustement de courbe logistique à 4 ou 5 paramètres. Les deux types de kits donnent à l’utilisateur des mesures de l’analyte de manière très similaire.

Sortie des ELISA colorimétriques

Les ELISA colorimétriques nécessitent un lecteur de microplaques standard pour détecter la réaction de changement de couleur entre le marqueur enzymatique et le substrat. Le lecteur envoie une longueur d’onde, généralement 450 nm, à travers chaque puits pour déterminer la densité optique, ou lecture  » OD  » des échantillons. En fonction du lecteur de plaque, les lectures de DO fournies sont comprises entre 0 et 4 à la millième décimale près. Les lectures de DO sont limitées par la capacité du spectrophotomètre.

Sortie des ELISA de chimiluminescence

Les ELISA de chimiluminescence nécessitent un lecteur de microplaques capable de mesurer la luminescence pour détecter la réaction lumineuse entre le marqueur enzymatique et le substrat. La lumière émise par la réaction dans les puits est transmise par un câble à fibre optique à un photomultiplicateur dans le lecteur qui sort des unités de lumière relative ou « RLU ». Selon le lecteur de plaques, les RLU peuvent aller de quelques centaines à plusieurs millions. Cette dispersion des unités offre aux utilisateurs une meilleure sensibilité analytique et une gamme dynamique plus large en donnant plus de séparation entre les points et réduit les limitations des lectures de densité optique d’un lecteur de microplaques standard.

Colorimétrie vs chimiluminescence ELISAs

Je vais maintenant vous montrer ce qui se trouve généralement dans nos boîtes de kits ELISA colorimétriques et chimiluminescents et comment ces kits ne sont que légèrement différents. Je vais vous montrer le test ELISA colorimétrique de l’insuline humaine d’ALPCO et notre test ELISA Chemi Active GLP-1 (7-36) amide de STELLUX.

Composants du test ELISA colorimétrique de l’insuline humaine

D’abord, nous allons commencer par le test ELISA colorimétrique de l’insuline humaine d’ALPCO. Dans ce test colorimétrique, vous recevrez :

• Microplaque de 96 puits – la plaque est transparente pour permettre les mesures de DO de la couleur dans la plaque
• Standard zéro
• Standards, A à E – chaque flacon contient des valeurs connues d’insuline pour établir la courbe standard
• Contrôles – contenant des valeurs connues d’insuline pour le contrôle de qualité.
• Anticorps de détection marqué par une enzyme
• Concentré de tampon de lavage
• Substrat du TMB – qui, pendant l’incubation, change les puits en bleu.
• Solution d’arrêt – qui est ajoutée pour arrêter la réaction de changement de couleur dans les puits, faisant virer les puits au jaune.
• Et scelleurs de plaques

Composants du test ELISA STELLUX® Chemiluminescence Active GLP-1 (7-36) amide

Puis, nous avons le test ELISA STELLUX® Chemi Active GLP-1 (7-36) amide d’ALPCO. Dans ce test chimiluminescent, vous recevrez :

• Microplaque 96 puits de GLP-1 actif – Remarquez comment la plaque chemi est noire au lieu d’être transparente. Une plaque noire réduit les interférences lumineuses de fond lors de la lecture de la plaque.
• Standards
• Niveaux de contrôle
• Tampon d’essai
• Anticorps détecteur
• Tampon d’anticorps détecteur
• Tampon de lavage concentré
• Streptavidine-HRP – qui fonctionne comme le marqueur enzymatique.
• Tampon de streptavidine-HRP – qui est utilisé pour diluer la streptavidine-hrp à la force de travail.
• Substrat chimioluminescent A
• Substrat chimioluminescent B – qui sont combinés pour obtenir un substrat chimioluminescent de travail qui interagit avec le marqueur enzymatique pour générer la réaction chimioluminescente dans chaque puits.
• Scelleurs de plaques

Conclusion

Comme vous pouvez le constater, certains réactifs sont différents entre les tests ELISA colorimétriques et chimiluminescents, mais le principe de chaque test est similaire et tous deux vous permettent de mesurer la concentration d’analytes inconnus dans des échantillons. Que vous utilisiez des kits colorimétriques ou que vous souhaitiez essayer nos tests chimiluminescents, nous avons quelque chose pour vous. ALPCO est là pour vous aider à explorer les possibilités de votre laboratoire. Pour voir l’ensemble de nos offres ELISA, veuillez visiter notre site Web. Nous avons beaucoup d’excellentes ressources pour vous aider dans vos projets, alors jetez-y un coup d’œil.

Merci de regarder!

Pour en savoir plus sur les produits ALPCO, veuillez contacter Robert Somogyi à [email protected].