Efecto de Digibind™ y DigiFab™ en la medición de la digoxina en suero
Digibind y DigiFab son fragmentos Fab del anticuerpo contra la digoxina que se utilizan en el tratamiento de una sobredosis aguda de digoxina que pone en peligro la vida. Digibind, el primer antídoto disponible para el tratamiento de la sobredosis de digoxina, está disponible en los Estados Unidos desde 1986 (Glaxo Wellcome Inc.), y más recientemente, en 2001, la Administración de Alimentos y Medicamentos de los Estados Unidos (FDA) aprobó DigiFab para el tratamiento de las sobredosis de digoxina. Digibind se produce mediante la inmunización de ovejas con un conjugado de digoxina y albúmina humana, seguida del aislamiento del anticuerpo específico contra la digoxina a partir de la sangre y la digestión con papaína para generar el fragmento Fab del anticuerpo. El fragmento Fab del anticuerpo antidigoxina se purifica a continuación. El DigiFab se prepara inyectando a ovejas con digoxina-dicarboximetilamina, un análogo de la digoxina, seguido del aislamiento del anticuerpo antidigoxina de la sangre, la digestión con papaína y la posterior purificación del fragmento Fab mediante cromatografía de afinidad. El peso molecular de DigiFab (46 000 Da) es similar al de Digibind (46 200 Da). Por lo general, la dosis de Digibind es 80 veces la carga corporal de digoxina; si no se conoce ni la dosis ingerida ni la concentración plasmática de digoxina, se suelen inyectar 380 mg de Digibind al paciente. La vida media del fragmento Fab en humanos es de 12 a 20 horas, pero puede prolongarse en pacientes con insuficiencia renal. Digibind y DigiFab son equivalentes en su capacidad de unión a la digoxina. Además, ambos compuestos son capaces de unirse a la DLIS endógena.
Además de la digoxina, Digibind demuestra la capacidad de neutralizar la cardenolida que está glicosilada en la posición 3 (digitoxina y ouabain) con una potencia similar, independientemente de las sustituciones en la parte esteroidea de la molécula. Por lo tanto, Digibind es eficaz en el tratamiento de la intoxicación por plantas con dedalera, que contiene varios glucósidos cardíacos. Rich et al. demostraron el éxito del tratamiento con Digibind de un hombre de 22 años que sufrió una sobredosis intencionada con un extracto casero de dedalera. Además, Digibind es capaz de neutralizar tanto los glucósidos cardíacos como los respectivos aglicones -por ejemplo, la oleandrina, el componente activo del extracto de adelfa- y es eficaz en el tratamiento de la toxicidad de la adelfa que pone en peligro la vida. Además, el Digibind puede ser eficaz en el tratamiento de la sobredosis de Chan Su -que es un medicamento chino que contiene bufalina y otros esteroides cardioactivos de la clase de los bufadienólidos-, pero la eficacia del Digibind en el tratamiento de la intoxicación por Chan Su es escasa en comparación con su eficacia en el tratamiento de la sobredosis de digoxina. Esto se debe a la escasa especificidad de Digibind para neutralizar la cinobufagina y la cinobufatolina, que también son componentes del Chan Su, al igual que el veneno de sapo.
Tanto Digibind como DigiFab interfieren en la medición de la digoxina en suero mediante inmunoensayos. La magnitud de la interferencia depende del diseño del ensayo y de la especificidad del anticuerpo antidigoxina. El inmunoensayo enzimático de digoxina con micropartículas (MEIA en el analizador AxSYM, Abbott Laboratories, Abbott Park, IL), así como el ensayo de digoxina Stratus, demostraron valores de digoxina superiores a la concentración de digoxina libre medida en presencia de Digibind . McMillin et al. estudiaron el efecto de Digibind y DigiFab en 13 inmunoensayos diferentes de digoxina. Se observó una interferencia positiva en presencia y ausencia de digoxina con Digibind y DigiFab, aunque la magnitud de la interferencia fue algo menor con DigiFab. La magnitud de la interferencia varió significativamente con cada método, mientras que los métodos de digoxina IMMULITE®, Vitros®, Dimension® y Access® mostraron la mayor interferencia. Se observaron interferencias mínimas con los métodos FPIA, MEIA, SYNCHRON y CEDIA. Los autores también comentaron que el control de la digoxina libre (en el ultrafiltrado sin proteínas) elimina esta interferencia porque tanto Digibind como DigiFab, debido a su peso molecular aproximado de 46 000 Da, están ausentes en el ultrafiltrado sin proteínas . Digibind y DigiFab no interfieren con la medición de digoxina en suero utilizando un método cromatográfico, como la cromatografía líquida combinada con la espectrometría de masas. Kanno et al. describieron un método para el análisis simultáneo de digoxina, digitoxina y compuestos relacionados utilizando cromatografía líquida combinada con espectrometría de masas en tándem . Oiestad et al. también describieron un método de cromatografía líquida-espectrometría de masas en tándem (LC-MS/MS) para la digoxina y la digitoxina en sangre total para casos de autopsia. Las muestras se prepararon mediante extracción líquido-líquido utilizando acetato de etilo/heptano/diclorometano (3 : 1 : 1 en volumen), y las separaciones cromatográficas se lograron utilizando una columna de fase inversa C-18. La detección de masas se realizó mediante electrospray en modo de iones positivos sobre aductos de amonio, y se utilizó digoxina deuterada (digoxina-d3) como patrón interno. Sin embargo, los métodos cromatográficos rara vez se utilizan en los laboratorios clínicos, aunque los laboratorios de toxicología forense y los laboratorios de criminalística que participan en la investigación de muertes están equipados con este tipo de analizadores.