4.2.1.2 Synlige spektrometriske metoder
CBZ og PHT er to AED’er, der anvendes samtidig. I denne artikel beskrives en PLS-kalibreringsmetode til samtidig spektrofotometrisk bestemmelse af CBZ og PHT i plasma. Binære standardblandinger af CBZ og PHT er blevet opløst ved anvendelse af PLS-1 på deres UV-spektre. Derefter blev de binære standardopløsninger, der var tilsat plasma, fremstillet, og efter ekstraktion af stofferne blev deres tilsvarende UV-spektrum analyseret ved PLS-regression for at beregne koncentrationen af stofferne i det ukendte plasma. Der blev anvendt en leave-one-out cross-valideringsprocedure for at finde det optimale antal latente variabler ved hjælp af PRESS. Der blev også anvendt en HPLC-metode til samtidig bestemmelse af to lægemidler i plasma og i methanol. De gennemsnitlige genfindingsværdier, der blev opnået ved hjælp af PLS, var henholdsvis 98,4 og 98,2 for CBZ og PHT, og de gennemsnitlige genfindingsværdier, der blev opnået ved hjælp af HPLC, var henholdsvis 100,1 og 101,7. Selv om HPLC-metoden viste bedre resultater end PLS, blev det konstateret, at de resultater, der blev opnået ved PLS, var sammenlignelige med dem, der blev opnået ved HPLC-metoden.
Der foreslås to spektrofotometriske metoder til bestemmelse af OXC i bulk og doseringsformer ved hjælp af Folin-Ciocalteus phenolreagens (FCP) og 3-methyl-2-benzothiazolinonhydrazinhydrazinhydrochlorid (MBTH) som reagenser. Den første metode indebærer tilsætning af FCP-reagens til OXC i alkalisk medium efterfulgt af måling af absorbansen ved 760 nm (metode A), og den anden metode indebærer tilsætning af en fast mængde MBTH efter behandling af OXC med jern(III)chlorid og måling af absorbansen ved 456 nm (metode B). Ved begge metoder svarer den dannede mængde kromogen til mængden af OXC, og den målte absorbans viser sig at stige lineært med koncentrationen af OXC, hvilket bekræftes af korrelationskoefficienterne på henholdsvis 0,9985 og 0,9984 for metode A og B. Systemerne adlyder Beers lov for henholdsvis 5-30 og 10-50 μg/mL for metode A og B. Den tilsyneladende molære absorptivitet blev beregnet til 8,06 × 103 og 3,126 × 103 L/mol/cm for henholdsvis metode A og B. LOD og LOQ blev beregnet til 1,6 og 5 μg/mL for metode A og 3 og 10 μg/mL for metode B. Metodernes inter- og intradaglige unøjagtigheder viste sig at ligge i intervallet 1,1-1,7 % og 0,9-1,1 % for metode A og 1,1-1,9 % og 0,6-0,9 % for metode B. Nøjagtigheden lå mellem 98,9-99,7 % og 99,3-100,1 % for henholdsvis metode A og B. Der blev ikke observeret nogen interferens fra almindelige lægemiddelhjælpestoffer. Metoderne blev med succes anvendt til bestemmelse af OXC i tabletpræparater.
CBZ undergår enzymatisk biotransformation gennem epoxidering med dannelse af metabolitten CBZ-E. Der er blevet foreslået en enkel kemometrisk spektrofotometrisk metode til samtidig bestemmelse af CBZ og CBZ-E i plasma. Der blev anvendt en væskeekstraktionsprocedure til at adskille analysanderne fra plasma, og UV-absorptionsspektre af de resulterende opløsninger blev underkastet PLS-regression. Det optimale antal latente PLS-variabler blev valgt i overensstemmelse med PRESS-værdierne ved leave-one-out cross-validering. Der blev også anvendt en HPLC-metode til sammenligning. De respektive gennemsnitlige genfindingsværdier for analyse af CBZ og CBZ-E i syntetiske blandinger var 102,57 (± 0,25)% og 103,00 (± 0,09)% for PLS og 99,40 (± 0,15)% og 102,20 (± 0,02)%. Koncentrationerne af CBZ og CBZ-E blev også bestemt hos fem patienter ved hjælp af PLS- og HPLC-metoderne. Resultaterne viste, at de data, der blev opnået ved PLS, var sammenlignelige med dem, der blev opnået ved HPLC-metoden.
Der blev udviklet en selektiv og følsom metode til bestemmelse af de antikonvulsive midler vigabatrin (I) (CAS 60643-86-9) og gabapentin (II) (CAS 60142-96-3). Metoden er baseret på kondensation af stofferne gennem deres aminogrupper med acetylacetone og formaldehyd i henhold til Hantzsch-reaktionen, hvorved de stærkt fluorescerende dihydropyridin-derivater fremkommer. Den gullig-orange farve blev også målt spektrofotometrisk ved 410 og 415 nm for henholdsvis I og II. Absorbans-koncentrationsdiagrammerne var retlinede i intervallerne 10-70 og 20-140 μg/mL for henholdsvis I og II. Hvad angår fluorescens-koncentrationsdiagrammerne, var de lineære i intervallerne 0,5-10 og 2,5-20 μg/mL med minimale detektionsgrænser (S/N = 2) på 0,05 μg/mL (~ 2,1 × 10- 8 mol/L) og 0,1 μg/mL (~ 5,8 × 10- 7 mol/L) for henholdsvis I og II. Den spektrofotometriske metode blev anvendt til bestemmelse af I og II i deres tabletter. De procentvise genfindingsværdier ± SD (n = 6) var henholdsvis 99,45 ± 0,13 og 98,05 ± 0,53. Den spektrofluorimetriske metode blev med succes anvendt til bestemmelse af I og II i spiked human urin og plasma. Genfindelsesprocenten ± SD (n = 5) var 98,77 ± 0,29 og 98,39 ± 0,53 for urinen og 99,32 ± 0,74 og 98,90 ± 0,96 for plasma for henholdsvis I og II. Der blev ikke konstateret nogen interferens med de samtidig indgivne lægemidler: valproinsyre (CAS 99-66-1), diphenylhydantoin (CAS 57-41-0), phenobarbital (CAS 50-06-6), carbamazepin (CAS 298-46-4), clonazepam (CAS 1622-61-3), clobazam (CAS 22316-47-8) eller cimetidin (CAS 51481-61-9). Der foreslås et forslag til reaktionsvejen. Fordelene ved de foreslåede metoder i forhold til eksisterende metoder diskuteres .
Et nær-infrarødt (IR) spektrofotometer, integrerende optik og parallel-vektor supercomputer anvendes til at udvikle en matematisk model, der forudsiger opløsningshastigheden for individuelle intakte tabletter ud fra nær-IR spektrer (r2 = 0,985). Hver tablet kan analyseres ikke-destruktivt af spektrofotometeret på mindre end 1 minut. Modellen gør det muligt at anvende hundredvis af nær-IR-bølgelængder til bestemmelse af opløsningshastigheden, hvilket fører til øget nøjagtighed .
En 0,5 ml serumprøve, der indeholdt forskellige AED’er, enkeltvis eller i kombination, blev gjort alkalisk, overlejret med isooktan og dampet i nærvær af KMnO4. Spektre af oxiderede produkter i det organiske lag blev optaget i UV-området. Oxideret phenobarbiton og primidon viser ingen absorptionstop; diazepam en delta-max ved 228 nm; phenytoin ved 247 nm; og carbamazepin ved 247 og 372 nm. Følgelig forstyrrer phenobarbiton og diazepam ikke ved kvantificering af phenytoin, men det gør carbamazepin. Carbamazepinets bidrag ved 247 nm blev beregnet ud fra absorptionen ved 372 nm og forholdet mellem dets molære ekstinktionskoefficienter ved de to bølgelængder. Dette blev fratrukket fra de samlede A247-værdier for at få de faktiske værdier, der skyldes phenytoin. Der er således udviklet en metode til samtidig analyse af carbamazepin og phenytoin i en enkelt prøve.
Carbamazepin og 5,5-diphenylhydantoin ekstraheres samtidig fra 100 til 200 μl blod med 1,2-dichlorethan. 5,5-diphenylhydantoin fjernes ved en et-trins vask i alkali. Dichlorethanen vaskes yderligere med syre og inddampes derefter til tørhed. 5,5-diphenylhydantoin bestemmes i alkalivaskningen ved hjælp af en benzophenonprocedure; carbamazepin bestemmes i den tørrede rest ved hjælp af den tidligere beskrevne 9-methylacridinprocedure. Den kombinerede metode er hurtig og pålidelig og har en detektionstærskel på under 0,1 mg/100 mL for hvert stof.
Der beskrives en UV-spektrofotometrisk metode til mikrobestemmelse af carbamazepin i blod, som er baseret på den oprindelige 9-methylacridin-metode, der er foreslået af K.H. Beyer, K. Klinge, Arzneim. Forsch. 19 (1969) 1759-1760). Carbamazepin ekstraheres fra blodet med dichlormethan, som derefter vaskes med alkali og syre. En alikvot del af ekstraktionsmidlet inddampes til tørhed, og restproduktet opvarmes kortvarigt med saltsyre ved 150 °C. Efter fjernelse af uspecifik interferens med n-heptan bestemmes absorbansen af det syre-katalyserede omlejringsprodukt (9-methylacridin) ved 258 nm. Den resulterende procedure er hurtig, pålidelig, følsom og specifik. Den kræver 100-200 μL prøve til en enkelt vurdering og har en detektionstærskel på mindre end 0,1 mg/100 mL. Det konkluderes, at metoden er egnet til rutinemæssig klinisk brug.
Der er beskrevet en specifik direkte gaskromatografisk metode til bestemmelse af carbamazepin og semi-kvalitativt 10,11-epoxycarbamazepin i serum. Den gennemsnitlige genfinding af carbamazepin er 98%, og fejlen ved dobbeltbestemmelse er ± 4%. Metoden sammenlignes med Herrmanns klassiske spektrofotometriske metode. I materiale fra 103 patienter var den gennemsnitlige serumkoncentration af carbamazepin 25,5 ± 12,8 μmol/L med GLC og 23,0 ± 12,6 μmol/L med spektrofotometri. Forskellen var meget signifikant. Blodprøvemængden er 1/10 af den mængde, der er nødvendig ved spektrofotometri .