Er du nysgerrig på kemiluminescens-ELISA’er, men ikke helt sikker på, hvad de er, eller hvordan de skal bruges? Vores video A Comparison of Colorimetric and Chemiluminescence ELISAs diskuterer, hvor ens disse to typer assays er, og hvordan de kan forbedre dine laboratorieundersøgelser.
Se vores video for at:
- Lær hvordan kemiluminescens- og kolorimetriske ELISA’er måler biomarkører
- Udforsk forskellige typer pladelæsere, der bruges til at køre hver test
- Sammenlign komponenterne i hver test
- En sammenligning af kolorimetriske og kemiluminescens-ELISA’er
- Videotransskription
- Princip for Sandwich ELISA’er
- Måling af ukendte koncentrationer af biomarkører
- Output af kolorimetriske ELISA’er
- Output af kemiluminescens-ELISA’er
- Kolorimetriske vs. kemiluminescens-ELISA’er
- Kolorimetriske humane inuslin ELISA-komponenter
- STELLUX® Chemiluminescence Active GLP-1 (7-36) amide ELISA-komponenter
- Slutning
En sammenligning af kolorimetriske og kemiluminescens-ELISA’er
Videotransskription
Hej, Jeg er Christi Caillouette fra ALPCO! I dag vil jeg gennemgå en sammenligning af kolorimetriske og kemiluminescens enzyme linked immunosorbent assays, også kaldet ELISA’er.
Princip for Sandwich ELISA’er
Selv om der findes mange typer af assays, er de ELISA’er, som jeg vil henvise til i dag, sandwich assays. Sandwich-ELISA’er har et antistof belagt på pladen, som specifikt binder sig til den ønskede analysand. Efter et vasketrin tilsættes et detektionsantistof og et enzymmærke, som binder sig til analysanden. Der tilsættes et substrat for at skabe en reaktion i brøndene. Afhængigt af analysetypen produceres der enten farve eller lys. Denne reaktion kan måles med en pladelæser. Graden af farveændring eller det udsendte lys angiver mængden af analyt i prøven.
Måling af ukendte koncentrationer af biomarkører
Både kolorimetriske og kemiluminescente assays anvender kendte standarder til at generere en standardkurve til måling af den ukendte koncentration af en analyt i prøver. Afhængigt af kittet opnås dette ved hjælp af softwareprogrammer med logistiske algoritmer til tilpasning af logistiske kurver med 4 eller 5 parametre. Begge typer kits giver brugeren målinger af analytten på en meget lignende måde.
Output af kolorimetriske ELISA’er
Kolorimetriske ELISA’er kræver en standardmikropladelæser til at detektere farveskiftreaktionen mellem enzymmærket og substratet. Læseren sender en bølgelængde, typisk 450 nm, gennem hver brønd for at bestemme den optiske tæthed, eller “OD”-aflæsning af prøverne. Afhængigt af pladelæseren er de angivne OD-aflæsninger mellem 0 og 4 med en tusindedel decimalpoint. OD-aflæsningerne er begrænset af spektrofotometerets kapacitet.
Output af kemiluminescens-ELISA’er
Kemiluminescens-ELISA’er kræver en mikropladelæser, der er i stand til at måle luminescens for at detektere lysreaktionen mellem enzymmærket og substratet. Det lys, der afgives af reaktionen i brøndene, overføres via et fiberoptisk kabel til en fotomultiplikator i læseren, som udsender relative lysenheder eller “RLU’er”. Afhængigt af pladelæseren kan RLU’erne svinge fra flere hundrede til millioner. Denne spredning af enheder giver brugerne en bedre analytisk følsomhed og et bredere dynamisk område ved at give mere adskillelse mellem punkterne og reducerer begrænsningerne ved aflæsning af optisk tæthed fra en standard mikropladelæser.
Kolorimetriske vs. kemiluminescens-ELISA’er
Nu vil jeg vise dig, hvad der generelt følger med i vores kasser med kolorimetriske og kemiluminescens-ELISA-kits, og hvordan disse kits kun er lidt forskellige. Jeg vil vise dig ALPCO’s kolorimetriske humane insulin ELISA og vores STELLUX Chemi Active GLP-1 (7-36) amid ELISA.
Kolorimetriske humane inuslin ELISA-komponenter
Først starter vi med ALPCO’s kolorimetriske humane insulin ELISA. I dette kolorimetriske assay modtager du:
- 96 brønde mikroplade – pladen er klar for at muliggøre OD-målinger af farven i pladen
- Nulstandard
- Standarder, A til E – hver hætteglas har kendte værdier af insulin til at etablere standardkurven
- Kontroller – indeholder kendte værdier af insulin til kvalitetskontrol.
- Enzymmærket detektionsantistof
- Vaskbufferkoncentrat
- TMB-substrat – som under inkubation ændrer brøndene blå.
- Stopopopløsning – som tilsættes for at stoppe farveskiftreaktionen i brøndene, så brøndene bliver gule.
- Og pladetætningsmidler
STELLUX® Chemiluminescence Active GLP-1 (7-36) amide ELISA-komponenter
Næst har vi ALPCO’s STELLUX® Chemi Active GLP-1 (7-36) amide ELISA. I denne kemiluminescensassay modtager du:
- Active GLP-1 96 brøndmikroplade – Bemærk, hvordan chemi-pladen er sort i stedet for klar. En sort plade reducerer baggrundslysinterferens, når pladen aflæses.
- Standarder
- Kontrolniveauer
- Assaybuffer
- Detektorantistof
- Detektorantistofbuffer
- Vaskbufferkoncentrat
- Streptavidin-HRP – som fungerer som enzymmærke.
- Streptavidin-HRP-buffer – som bruges til at fortynde streptavidin-hrp til arbejdsstyrke.
- Kemiluminescenssubstrat A
- Kemiluminescenssubstrat B – som kombineres til kemiluminescenssubstrat med arbejdsstyrke, der interagerer med enzymmærket for at generere kemiluminescensreaktionen i hver brønd.
- Platteforsegler
Slutning
Som du kan se, er nogle af reagenserne forskellige mellem kolorimetriske og kemiluminescerende ELISA’er, men princippet i hver test er det samme, og begge giver dig mulighed for at måle koncentrationen af ukendte analytter i prøver. Uanset om du bruger kolorimetriske kits eller er interesseret i at prøve vores kemiluminescensassays, har vi noget til dig. ALPCO er her for at hjælpe dig med at udforske mulighederne for dit laboratorium. For at se vores komplette ELISA-udbud kan du besøge vores websted. Vi har mange gode ressourcer til at hjælpe dig med dine projekter, så tag et kig rundt.
Tak for at se med!
For at få mere at vide om ALPCO’s produkter kan du kontakte Robert Somogyi på [email protected].