Abstract
En femårig Labrador-han blev indleveret til Teaching Veterinary Clinics of GADVASU med en primær klage over udspilet mave, feber og anoreksi. Hunden blev fundet sløv med forhøjet rektal temperatur (104°F), hjertefrekvens (148 pr. minut) og respirationsfrekvens (58 pr. minut). Blodprøveundersøgelse og PCR-undersøgelse viste, at hunden var positiv for Babesia gibsoni. Forhøjet bilirubin, alaninaminotransferase (ALT), alkalisk fosfatase (ALP), kreatinin, blodurinstofnitrogen (BUN), samlet leukocytantal, hypoalbuminæmi og hypoproteinæmi var de hæmatobiokemiske ændringer. Radiografi og ultralydsundersøgelse viste hhv. et glasagtigt udseende og et anekkoisk område i abdomen.
1. Indledning
Canin babesiose er en af de vigtigste livstruende flåtbårne hæmoprotozoesygdomme hos hunde forårsaget af intraerytrocytære protozoiske parasitter af slægten Babesia, som er rapporteret i hele verden og i forskellige dele af Indien, herunder staten Punjab . Den varierende prævalens af både B. canis og B. gibsoni er blevet observeret i Indien (0,66 til 21,7 %), og i Ludhiana blev prævalensen registreret som 5,26 % . Patogenesen af babesiose hos hunde varierer i forskellige regioner, hvilket muligvis skyldes variation i patogeniciteten af forskellige stammer af Babesia-arter under forskellige økologiske forhold . Sværhedsgraden af babesiose er relateret til omfanget af parasitreplikation i værtens røde blodlegemer med efterfølgende cellelysis. Der er observeret en lang række kliniske tegn som anoreksi, sløvhed, ikterus, opkastning og markant tab af kropstilstand sammen med forskellige klinisk-patologiske abnormiteter, herunder hæmoglobinuri, hypoglykæmi, syre-baseforstyrrelser, azotæmi og forhøjelser af leverenzymer . Endvidere forårsager B. gibsoni regenerativ hæmolytisk anæmi og trombocytopeni . Spherocytose og positive resultater af den direkte Coombs-test tyder på en immunomediatkomponent. Trombocytopeni er et hyppigt fund. I denne meddelelse beskriver vi de klinisk-hæmatobiokemiske, radiografiske og ultralydsundersøgelser i et meget sjældent tilfælde af peritoneal effusion som følge af den patogene virkning af Babesia gibsoni-infektion.
2. Casebeskrivelse
En femårig han-Labradorhund blev præsenteret på Veterinary Teaching Hospital of Guru Angad Dev Veterinary and Animal Sciences University, Ludhiana, juli, 2013, med abdominal distension og vedvarende anoreksi i de sidste to dage. Hunden havde vist dårlig kropskondition. Ved den fysiske undersøgelse var hunden pyretisk (104°F), med en hjertefrekvens på 148 slag pr. minut og en respirationsfrekvens på 58 vejrtrækninger pr. minut. Slimhinderne var blege. Flåter blev fjernet fra hunden og blev identificeret som Rhipicephalus sanguineus.
Blodprøver blev indsendt til hæmatologisk og serumbiokemisk analyse.
2.1. Hæmatologisk og biokemisk analyse
Hæmatologisk og biokemisk analyse afslørede moderat til svær anæmi med forhøjet bilirubin, alaninaminotransferase (ALT), alkalisk fosfatase (ALP), kreatinin, blodurinstofnitrogen (BUN), samlet leukocyttal, hypoalbuminæmi og hypoproteinæmi var hæmatobiokemiske forandringer (tabel 1). Kronisk leverinsufficiens i tilfælde af babesiose kan føre til hypoalbuminæmi . De hæmatologiske parametre tydede på, at hunden kunne have blodparasitter eller andre relevante infektionssygdomme. Patogenese af anæmi synes at involvere ikke-hæmolytiske og hæmolytiske mekanismer. Hæmolyse kan involvere proteaser produceret af den invaderende parasit, en immunreaktion på parasiterede celler og/eller oxidativ skade på erytrocytterne. MCV-, MCH- og MCHC-værdierne var lige på grænsen af normalområdet (tabel 1), hvilket indikerer, at anæmien ikke skyldtes jernmangel, men MCV- og MCHC-værdierne kan ofte ikke skelne korrekt mellem de forskellige anæmimønstre. Den mest almindelige abnormitet var trombocytopeni. Årsagen til trombocytopeni ved babesiose kan skyldes trombocytternes sekventering i milten eller immunmedieret trombocytdestruktion og udvikling af dissemineret intravaskulær koagulation .
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Kahn et al. . | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
2.2. Parasitologisk undersøgelse
For at skelne mellem disse muligheder blev der foretaget en mikroskopisk undersøgelse af Giemsa-farvede tynde blodudstrygninger fremstillet fra ørekanten under olieimmersionslinse (100x). Undersøgelsen afslørede tilstedeværelsen af ringformede, ovale, faldskærms- og kommalignende organismer, ca. 1-3 μm i diameter i erytrocytterne (figur 1). På grundlag af størrelsen af de intracellulære parasitter i dette tilfælde blev det overvejet, om hunden var blevet inficeret med små Babesia spp. og især med B. gibsoni. Graden af parasitæmi, beregnet som procentdelen af inficerede røde blodlegemer ved tælling af 1000 røde blodlegemer, var 10,5 %. De flåter, der var til stede på hunden, blev identificeret som Rhipicephalus sanguineus. Det forhold, at B. gibsoni ikke kan skelnes fra andre isolater af små babesials hos hunde ved mikroskopi, fik os til at foretage PCR til endelig diagnose ved hjælp af B. gibsoni-specifik primer .
2.3. DNA-ekstraktion
DNA fra fuldblod (300 μL) blev ekstraheret ved hjælp af DNA-rensningssættet (QIAGEN, GmbH, Tyskland) i henhold til producentens anvisninger.
Et primersæt med fremadrettet primer (Gib599 F): 5′CTCGGCTACTCTTGCCTTTTGTC3′ og omvendt primer (Gib1270R): 5′GCCGAAACTGAAATAACGGC 3′ blev anvendt til at amplificere et 671 bp-fragment af 18 S rRNA-genregionen, der er specifik for B. gibsoni . PCR-blandingen bestod af 1X molær koncentration af 12,5 µL mastermix (1X QIAGEN PCR-buffer, 2,5 enheder Taq DNA-polymerase, 200 µM af hver dNTP og 1,5 mM MgCl2), 1,5 µL af 10 pmol af hver af de respektive primere og 5 µL af template som DNA-kilde.
Efter en indledende denaturering ved 95 °C i 5 minutter blev der udført 30 cyklusser med denaturering (94 °C i 45 sek.), annealing (57 °C i 1 minut) og forlængelse (72 °C i 1 minut), og den endelige forlængelse blev udført ved 72 °C i 8 minutter. En negativ prøvekontrol (kun DNA fra hundeblod) og en negativ DNA-kontrol (Milli-Q-vand i stedet for DNA) blev inkluderet i PCR-reaktionen. PCR-produkterne blev kørt på 1,5 % agarosegel og farvet med ethidiumbromid. Størrelsen af det amplificerede PCR-produkt var 671 bp (figur 2).
2.4. Peritonealvæskeanalyse
Baseret på abdominal distension blev ascites mistænkt. Der blev foretaget en peritoneal tab, og der blev opsamlet 2 mL klar peritonealvæske. Peritonealvæske blev typisk undersøgt for farve, turbiditet, total protein- og albuminkoncentration. Væsken var gennemsigtig og klar. Totalprotein og albumin var henholdsvis 0,4 g/dL og 0,2 g/dL, hvilket indikerer hypoproteinæmi (0,4 g/dL) og hypoalbuminæmi (0,2 g/dL).
2.5. Radiografi og ultralydsundersøgelse
Radiografi og ultralydsundersøgelse viste hhv. et glasagtigt udseende og et anekkoisk område i abdomen (figur 3 og 4). Det blev således bekræftet, at der var tale om ascites. Selv om de mest almindelige kliniske tegn på babesiose omfatter anoreksi, sløvhed, tilbagevendende feber, blege slimhinder og emesis , viste vores resultater, at det er vigtigt ikke at negligere babesiose i differentialdiagnosen af ascites. Hunde med ascites bør underkastes en klassisk parasitologisk eller molekylær diagnose for at udelukke babesiose. Babesia-organismer inficerer erytrocytterne hos hunde, hvilket fører til hæmolytisk anæmi. Infektion med B. gibsoni er kendt for at forårsage mere alvorlige kliniske tegn end infektion med store Babesia spp. og kan resultere i syndromer med dysfunktion af flere organer . Da hunden var alvorligt anæmisk med andre alvorlige abnormiteter i parametre relateret til vitale organer, døde den inden for to dage efter behandlingen.
3. Konklusion
Så vidt vi ved, er dette den første case report om peritoneal effusion hos en hund associeret med B. gibsoni-infektion diagnosticeret ved mikroskopisk undersøgelse og polymerasekædereaktion (PCR) i kombination med analyse af peritonealvæske, radiografi og ultralyd.
Interessekonflikter
Forfatterne erklærer, at der ikke er nogen interessekonflikter i forbindelse med offentliggørelsen af denne artikel.