Abstract
Viisivuotias uros labradorinnoutaja esiteltiin GADVASU:n eläinlääketieteellisille opetusklinikoille, ja hänellä oli ensisijaisesti turvonnut vatsa, kuumetta ja anoreksiaa. Koiran todettiin olevan tympeä, ja sillä todettiin kohonnut peräsuolen lämpötila (104°F), syke (148 minuutissa) ja hengitystaajuus (58 minuutissa). Verinäytetutkimus ja PCR-määritys osoittivat, että koira oli positiivinen Babesia gibsoni -bakteerille. Hematobiokemialliset muutokset olivat kohonnut bilirubiini, alaniiniaminotransferaasi (ALT), alkalinen fosfataasi (ALP), kreatiniini, veren ureatyppi (BUN), leukosyyttien kokonaismäärä, hypoalbuminaemia ja hypoproteinaemia. Röntgenkuvaus ja ultraäänitutkimus osoittivat, että vatsa näytti maasälvän näköiseltä ja että vatsan alue oli kaiuton.
1. Johdanto
Koirien babesioosi on yksi tärkeimmistä henkeä uhkaavista punkkien aiheuttamista koirien hemoprototsooottisista sairauksista, joita aiheuttavat Babesia-suvun sisäiset prototsyyttiset alkueläinparasiitit, joita on raportoitu maailmanlaajuisesti ja Intian eri osissa, mukaan lukien Punjabin osavaltio . Sekä B. canis- että B. gibsoni -bakteerin vaihteleva esiintyvyys on havaittu Intiassa (0,66-21,7 %), ja Ludhianassa esiintyvyydeksi todettiin 5,26 prosenttia . Koirien babesioosin patogeneesi vaihtelee eri alueilla, mikä johtuu mahdollisesti Babesia-lajien eri kantojen patogeenisuuden vaihtelusta eri ekologisissa olosuhteissa. Babesioosin vakavuus liittyy loisen lisääntymisen laajuuteen isännän punasoluissa ja sitä seuraavaan solujen lyysiin. On havaittu monenlaisia kliinisiä oireita, kuten anoreksiaa, letargiaa, ikterusta, oksentelua ja merkittävää ruumiinkunnon heikkenemistä sekä vaihtelevia kliinis-patologisia poikkeavuuksia, kuten hemoglobinuriaa, hypoglykemiaa, happo-emästasapainohäiriöitä, atsotemiaa ja maksaentsyymiarvojen kohoamista . Lisäksi B. gibsoni aiheuttaa regeneratiivista hemolyyttistä anemiaa ja trombosytopeniaa . Sferosytoosi ja positiiviset suoran Coombsin testin tulokset viittaavat immunomediatiiviseen komponenttiin. Trombosytopenia on yleinen löydös. Tässä tiedonannossa kuvaamme kliinis-hematokemialliset, radiologiset ja ultraäänitutkimukselliset havainnot hyvin harvinaisessa tapauksessa, jossa vatsakalvonerite johtui Babesia gibsoni -infektion patogeenisestä vaikutuksesta.
2. Tapauksen kuvaus
Viisivuotias labradorinnoutaja-uros esiteltiin Guru Angad Devin eläinlääketieteellisen ja eläintieteellisen yliopiston eläinlääketieteelliseen opetussairaalaan Ludhianassa heinäkuussa 2013, ja hänellä oli ollut vatsan turvotusta ja jatkuvaa anoreksiaa kahden viime päivän ajan. Koiran ruumiin kunto oli huono. Fyysisessä tutkimuksessa koira oli pyreettinen (104°F), sen syke oli 148 lyöntiä minuutissa ja hengitystaajuus 58 hengitystä minuutissa. Limakalvot olivat kalpeat. Koirasta poistettiin punkit, jotka tunnistettiin Rhipicephalus sanguineukseksi.
Verinäytteet toimitettiin hematologisia ja seerumin biokemiallisia analyysejä varten.
2.1. Verinäytteet. Hematologinen ja biokemiallinen analyysi
Hematologinen ja biokemiallinen analyysi paljasti keskivaikean tai vaikean anemian, johon liittyi kohonnut bilirubiini, alaniini-aminotransferaasi (ALT), emäksinen fosfataasi (ALP), kreatiniini, veren virtsa-aineen typpi (BUN), leukosyyttien kokonaislukumäärän kohoaminen, hypoalbuminemian ja hypoproteinemian olleen hematobiobiologisia muutoksia (taulukko 1). Krooninen maksan vajaatoiminta voi babesioosin yhteydessä johtaa hypoalbuminaemiaan. Hematologiset parametrit viittasivat siihen, että koiralla saattoi olla veren loisia tai muita merkityksellisiä tartuntatauteja. Anemian patogeneesiin näyttää liittyvän ei-hemolyyttisiä ja hemolyyttisiä mekanismeja. Hemolyysiin voi liittyä tunkeutuvan loisen tuottamia proteaaseja, immuunireaktio loisen aiheuttamiin soluihin ja/tai erytrosyyttien oksidatiivinen vaurio. MCV-, MCH- ja MCHC-arvot olivat juuri ja juuri normaalialueen rajalla (taulukko 1), mikä osoittaa, että anemia ei johtunut raudanpuutteesta, mutta MCV- ja MCHC-arvojen avulla ei useinkaan pystytä oikein erottamaan anemian eri muotoja. Yleisin poikkeavuus oli trombosytopenia. Trombosytopenian syy babesioosissa voi johtua verihiutaleiden pakkautumisesta pernaan tai immuunivälitteisestä verihiutaleiden tuhoutumisesta ja disseminoituneen intravaskulaarisen hyytymisen kehittymisestä.
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Kahn ym. . | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
2.2. Taulukko 1. Babesia gibsoni. Parasitologinen tutkimus
Tällaisten mahdollisuuksien erottamiseksi toisistaan korvan reunasta valmistettujen Giemsa-värjättyjen ohuiden veritahrojen mikroskooppinen tutkimus suoritettiin öljyimmersio-objektiivin (100x) alla. Tutkimus paljasti, että erytrosyyttien seassa oli rengasmaisia, soikeita, laskuvarjo- ja pilkkumaisia, halkaisijaltaan noin 1-3 μm:n kokoisia organismeja (kuva 1). Solunsisäisten loisten koon perusteella tässä tapauksessa pidettiin mahdollisena, että koira on saanut tartunnan pienistä Babesia spp. lajeista, erityisesti B. gibsonista. Parasitemia-aste, joka laskettiin infektoituneiden punasolujen prosenttiosuutena laskemalla 1000 punasolua, oli 10,5 %. Koirassa olleet punkit tunnistettiin Rhipicephalus sanguineukseksi. Koska B. gibsoni -bakteeria ei voida erottaa muista koirien pikkupunkki-isolaateista mikroskoopilla, teimme lopullisen diagnoosin PCR:llä käyttäen B. gibsoni -spesifistä aluketta. DNA:n uutto
Kokoverestä (300 μl) uutettiin DNA:ta DNA-puhdistussarjalla (QIAGEN, GmbH, Saksa) valmistajan ohjeiden mukaisesti.
Alukesarjaa, joka sisälsi eteenpäin suuntautuvan alukkeen (Gib599 F): 5′CTCGGCTACTACTTGCCTTGTC3′ ja taaksepäin suuntautuvan alukkeen (Gib1270R): 5′GCCGAAACTGAAATAACGGC 3′, käytettiin monistamaan 671 bp:n pituinen fragmentti 18 S rRNA-geenin 18 S rRNA-geenin alueesta spesifisesti B. gibsonille . PCR-sekoitus koostui 12,5 µl:n master mixin (1X QIAGEN PCR-puskuri, 2,5 yksikköä Taq DNA-polymeraasia, 200 µM kutakin dNTP:tä ja 1,5 mM MgCl2) 1,5 µl:stä 10 pmol:a kutakin vastaavaa aluketta ja 5 µl:stä templaattia DNA-lähteenä.
Kun aluksi denaturoitiin 95 °C:ssa 5 minuutin ajan, suoritettiin 30 sykliä denaturointia (94 °C 45 sekunnin ajan), anneaatiota (57 °C 1 minuutin ajan) ja pidennystä (72 °C 1 minuutin ajan), ja viimeinen pidennys tehtiin 72 °C:ssa 8 minuutin ajan. PCR-reaktiossa käytettiin negatiivista näytekontrollia (pelkkää koiran veren DNA:ta) ja negatiivista DNA-kontrollia (Milli-Q-vettä DNA:n korvikkeena). PCR-tuotteet ajettiin 1,5 prosentin agaroosigeelille ja värjättiin etidiumbromidilla. Monistetun PCR-tuotteen koko oli 671 bp (kuva 2).
2.4. Vatsakalvonesteen analyysi
Vatsan turvotuksen perusteella epäiltiin askitesta. Suoritettiin vatsakalvontähystys ja kerättiin 2 ml kirkasta vatsakalvonestettä. Peritoneaalinesteestä tutkittiin tyypillisesti väri, sameus, kokonaisproteiinipitoisuus ja albumiinipitoisuus. Neste oli läpinäkyvää ja kirkasta. Kokonaisproteiinipitoisuus oli 0,4 g/dl ja albumiinipitoisuus 0,2 g/dl, mikä osoitti hypoproteinaemiaa (0,4 g/dl) ja hypoalbuminaemiaa (0,2 g/dl).
2.5. Röntgenkuvaus ja ultraäänitutkimus
Röntgenkuvaus ja ultraäänitutkimus osoittivat, että vatsa näytti maasälpäiseltä ja vatsan alue ekoottiselta (kuvat 3 ja 4). Tapauksen todettiin näin ollen olevan askites. Vaikka babesioosin yleisimpiä kliinisiä oireita ovat anoreksia, letargia, toistuva kuume, kalpeat limakalvot ja oksentelu , löydöksemme osoittivat, että on tärkeää, ettei babesioosia laiminlyödä askitesin erotusdiagnostiikassa. Askitesta sairastaville koirille olisi tehtävä klassinen parasitologinen tai molekyylidiagnoosi babesioosin poissulkemiseksi. Babesian organismit infektoivat koirien erytrosyyttejä, mikä johtaa hemolyyttiseen anemiaan. B. gibsoni -bakteerin infektion tiedetään aiheuttavan vakavampia kliinisiä oireita kuin suurten Babesia-suvun lajien infektion, ja se voi johtaa useiden elinten toimintahäiriöoireyhtymiin . Koska koira oli vakavasti aneeminen ja sillä oli muita vakavia poikkeavuuksia elintärkeisiin elimiin liittyvissä parametreissa, se kuoli kahden päivän kuluessa hoidosta.
3. Johtopäätökset
Tietojemme mukaan tämä on ensimmäinen tapausraportti koiran vatsakalvonesteestä, joka liittyy B. gibsoni-infektioon, joka diagnosoitiin mikroskooppisella tutkimuksella ja polymeraasiketjureaktiolla (PCR) yhdistettynä vatsakalvonesteen analyysiin, röntgenkuvaukseen ja ultraäänitutkimukseen.
Interressiristiriita
Tekijät ilmoittavat, että tämän artikkelin julkaisemiseen ei liity eturistiriitoja.