Digibind™:n ja DigiFab™:n vaikutus seerumin digoksiinin mittaukseen
Digibind ja DigiFab ovat digoksiinivasta-aineen Fab-fragmentteja, joita käytetään hengenvaarallisen akuutin digoksiinin yliannostuksen hoitoon. Digibind, ensimmäinen digoksiinin yliannostuksen hoitoon saatavilla ollut vastalääke, on ollut saatavilla Yhdysvalloissa vuodesta 1986 (Glaxo Wellcome Inc.), ja hiljattain, vuonna 2001, Yhdysvaltain elintarvike- ja lääkevirasto (FDA) hyväksyi DigiFabin digoksiinin yliannostuksen hoitoon. Digibind valmistetaan immunisoimalla lampaita digoksiini-ihmisen albumiinikonjugaatilla, minkä jälkeen verestä eristetään digoksiinispesifinen vasta-aine ja vasta-aineen Fab-fragmentti tuotetaan papaiinin pilkkomisella. Digoksiinivasta-aineen Fab-fragmentti puhdistetaan edelleen. DigiFab valmistetaan ruiskuttamalla lampaille digoksiinidikarboksimetyyliamiinia, joka on digoksiinianalogi, ja sen jälkeen eristetään antidigoksiinivasta-aine verestä, pilkotaan papaiinilla ja puhdistetaan Fab-fragmentti affiniteettikromatografialla. DigiFabin molekyylipaino (46 000 Da) on samanlainen kuin Digibindin molekyylipaino (46 200 Da). Yleensä Digibind-annos on 80-kertainen digoksiinirasitukseen nähden; jos nautittua annosta tai plasman digoksiinipitoisuutta ei tunneta, potilaalle ruiskutetaan yleensä 380 mg Digibindiä. Fab-fragmentin puoliintumisaika ihmisellä on 12-20 tuntia, mutta se voi pidentyä potilailla, joilla on munuaisten vajaatoiminta . Digibindin ja DigiFabin digoksiinisitomiskyky on vastaava. Lisäksi molemmat yhdisteet kykenevät sitomaan endogeenista DLIS:ää .
Digibind osoittaa digoksiinin lisäksi kykyä neutralisoida molekyylin 3. positiossa glykosyloitunut kardenolidi (digitoksiini ja ouabaiini) samankaltaisella teholla riippumatta molekyylin steroidiosan substituutioista. Siksi Digibind on tehokas hoidettaessa kasvimyrkytyksiä, joissa käytetään ketunhierakkaa, joka sisältää erilaisia sydänglykosideja. Rich et al. osoittivat onnistuneen hoidon 22-vuotiaalle miehelle Digibind-valmisteella, joka oli saanut yliannostuksen tarkoituksellisesti kotitekoisella ketohanhikkiuutteella . Lisäksi Digibind pystyy neutraloimaan sekä sydänglykosideja että niiden aglykoneita – esimerkiksi oleandriiniä, joka on oleanteriuutteen aktiivinen komponentti – ja se on tehokas hengenvaarallisen oleanderimyrkytyksen hoidossa. Lisäksi Digibind voi olla tehokas Chan Su -yliannostuksen hoidossa – Chan Su on kiinalainen lääke, joka sisältää bufaliinia ja muita bufadienolidi-luokkaan kuuluvia sydänaktiivisia steroideja – mutta Digibindin teho Chan Su -myrkytyksen hoidossa on heikko verrattuna sen tehoon digoksiinin yliannostuksen hoidossa. Tämä johtuu Digibindin heikosta spesifisyydestä neutraloida kinobufagiinia ja kinobufatoliinia, jotka ovat myös Chan Su:n ainesosia, samoin kuin rupikonnan myrkky .
Kumpikin Digibind ja DigiFab häiritsevät seerumin digoksiinin mittausta immunomäärityksillä. Häiriön suuruus riippuu määrityksen suunnittelusta ja antidigoksiinivasta-aineen spesifisyydestä. Digoksiinin mikropartikkeli-entsyymi-immunomääritys (MEIA AxSYM-analysaattorilla, Abbott Laboratories, Abbott Park, IL) sekä Stratus-digoksiinimääritys osoittivat digoksiiniarvoja, jotka olivat suurempia kuin mitattu vapaan digoksiinin pitoisuus Digibindin läsnä ollessa. McMillin et al. tutkivat Digibindin ja DigiFabin vaikutusta 13 eri digoksiinin immunomääritykseen. Digibindillä ja DigiFabilla havaittiin positiivista interferenssiä digoksiinin läsnä ollessa ja sen puuttuessa, vaikkakin interferenssin suuruus oli hieman pienempi DigiFabilla. Interferenssin suuruus vaihteli merkittävästi kullakin menetelmällä, kun taas IMMULITE®-, Vitros®-, Dimension®- ja Access®-digoksiinimenetelmissä interferenssi oli suurinta. FPIA-, MEIA-, SYNCHRON- ja CEDIA-menetelmillä havaittiin vain vähän häiriöitä. Kirjoittajat huomauttivat myös, että vapaan digoksiinin seuranta (proteiinittomassa ultrasuodatuksessa) poistaa tämän interferenssin, koska sekä Digibind että DigiFab eivät ole proteiinittomassa ultrasuodatuksessa, koska niiden molekyylipaino on noin 46 000 Da . Digibind ja DigiFab eivät häiritse seerumin digoksiinin mittausta kromatografisella menetelmällä, kuten nestekromatografialla yhdistettynä massaspektrometriaan. Kanno et al. kuvasivat menetelmän digoksiinin, digitoksiinin ja niihin liittyvien yhdisteiden samanaikaista analysointia varten käyttäen nestekromatografiaa yhdistettynä tandem-massaspektrometriaan . Oiestad et al. kuvasivat myös nestekromatografia-tandemmassaspektrometriamenetelmän (LC-MS/MS) digoksiinin ja digitoksiinin määrittämiseksi kokoverestä ruumiinavaustapauksissa. Näytteet valmistettiin neste-nesteuutolla etyyliasetaatti/heptaani/dikloorimetaani (3 : 1 : 1 tilavuusprosentteina), ja kromatografiset erotukset tehtiin C-18-käänteisfaasikolonnilla. Massan havaitseminen suoritettiin positiivisen ionimoodin sähkösumutuksen avulla ammoniumaddukteilla, ja sisäisenä standardina käytettiin deuteroitua digoksiinia (digoksiini-d3). Kromatografisia menetelmiä käytetään kuitenkin harvoin kliinisissä laboratorioissa, vaikka oikeuslääketieteellisissä toksikologian laboratorioissa ja kuolemansyyntutkintaan osallistuvissa rikoslaboratorioissa on tällaisia analysaattoreita.