4.2.1.2 Näköspektrometriset menetelmät
CBZ ja PHT ovat kaksi AED-lääkettä, joita käytetään samanaikaisesti. Tässä artikkelissa kuvataan PLS-kalibrointimenetelmä CBZ:n ja PHT:n samanaikaiseen spektrofotometriseen määrittämiseen plasmasta. CBZ:n ja PHT:n binääriset standardiseokset on erotettu soveltamalla PLS-1:tä niiden UV-spektreihin. Tämän jälkeen valmistettiin plasmaan piikitetyt binääriset standardiliuokset, ja lääkkeiden uuttamisen jälkeen niiden vastaava UV-spektri analysoitiin PLS-regressiolla lääkkeiden pitoisuuden laskemiseksi tuntemattomassa plasmassa. Optimaalisten latenttien muuttujien lukumäärän löytämiseksi käytettiin ristiinvalidointimenetelmää (leave-one-out cross-validation) PRESS:n avulla. HPLC-menetelmää sovellettiin myös kahden lääkkeen samanaikaiseen määritykseen plasmasta ja metanolista. PLS:llä saadut keskimääräiset saantokertymät olivat 98,4 ja 98,2 CBZ:lle ja PHT:lle, ja HPLC:llä saadut saantokertymät olivat 100,1 ja 101,7. Vaikka HPLC-menetelmä toimi paremmin kuin PLS-menetelmä, havaittiin, että PLS-menetelmällä saadut tulokset olivat vertailukelpoisia HPLC-menetelmällä saatujen tulosten kanssa.
Kahta spektrofotometristä menetelmää ehdotetaan OXC:n määritykseen irtotavarana ja annosmuodoissa käyttäen reagensseina Folin-Ciocalteun fenolireagenssia (FCP) ja 3-metyyli-2-bentsotiatsolinonihydratsiinihydrokloridia (MBTH). Ensimmäisessä menetelmässä FCP-reagenssi lisätään OXC:hen emäksisessä väliaineessa ja sen jälkeen mitataan absorbanssi 760 nm:ssä (menetelmä A), ja toisessa menetelmässä lisätään kiinteä määrä MBTH:ta sen jälkeen, kun OXC on käsitelty rautakloridilla, ja mitataan absorbanssi 456 nm:ssä (menetelmä B). Molemmissa menetelmissä muodostuvan kromogeenin määrä vastaa OXC:n määrää, ja mitatun absorbanssin havaittiin kasvavan lineaarisesti OXC:n konsentraation myötä, mitä vahvistavat menetelmien A ja B korrelaatiokertoimet 0,9985 ja 0,9984. Tämä on todettu menetelmien A ja B osalta. Järjestelmät noudattavat Beerin lakia 5-30 μg/ml:n osalta menetelmissä A ja 10-50 μg/ml:n osalta menetelmissä B. Näennäisen molaarisen absorptiokyvyn laskettiin olevan 8,06 × 103 ja 3,126 × 103 L/mol/cm menetelmille A ja B. LOD- ja LOQ-arvojen laskettiin olevan 1,6 ja 5 μg/ml menetelmässä A ja 3 ja 10 μg/ml menetelmässä B. Menetelmien päivien välisen ja päivänsisäisen epätarkkuuden todettiin olevan välillä 1,1-1,7 % ja 0,9-1,1 % menetelmässä A ja 1,1-1,9 % ja 0,6-0,9 % menetelmässä B. Tarkkuus vaihteli välillä 98,9-99,7 % ja 99,3-100,1 % menetelmissä A ja B. Tarkkuus vaihteli välillä 99,3-100,1 %. Yleisten farmaseuttisten apuaineiden ei havaittu häiritsevän menetelmää. Menetelmiä sovellettiin menestyksekkäästi OXC:n määritykseen tablettivalmisteissa.
CBZ:lle tapahtuu entsyymibiotransformaatio epoksidaation kautta, jolloin muodostuu sen metaboliitti CBZ-E. CBZ:n ja CBZ-E:n samanaikaiseen määritykseen plasmasta on ehdotettu yksinkertaista kemometriikka-avusteista spektrofotometristä menetelmää. Analyytit erotettiin plasmasta nesteuutolla, ja saatujen liuosten UV-absorptiospektreille tehtiin PLS-regressio. PLS:n latenttien muuttujien optimaalinen määrä valittiin ristiinvalidoinnin (leave-one-out cross-validation) PRESS-arvojen perusteella. Vertailussa käytettiin myös HPLC-menetelmää. Synteettisten seosten CBZ:n ja CBZ-E:n keskimääräiset saantokertymät olivat 102,57 (± 0,25) % ja 103,00 (± 0,09) % PLS:n osalta ja 99,40 (± 0,15) % ja 102,20 (± 0,02) %. CBZ:n ja CBZ-E:n pitoisuudet määritettiin myös viideltä potilaalta PLS- ja HPLC-menetelmillä. Tulokset osoittivat, että PLS:llä saadut tiedot olivat vertailukelpoisia HPLC-menetelmällä saatujen tietojen kanssa.
Selektiivinen ja herkkä menetelmä kehitettiin kouristuslääkkeiden vigabatriinin (I) (CAS 60643-86-9) ja gabapentiinin (II) (CAS 60142-96-3) määrittämiseksi. Menetelmä perustuu lääkkeiden kondensaatioon niiden aminoryhmien kautta asetyyliasetonin ja formaldehydin kanssa Hantzschin reaktion mukaisesti, jolloin saadaan voimakkaasti fluoresoivia dihydropyridiinijohdannaisia. Keltainen-oranssi väri mitattiin myös spektrofotometrisesti 410 ja 415 nm:ssä I:n ja II:n osalta. Absorbanssin ja konsentraation kuvaajat olivat suoraviivaisia välillä 10-70 ja 20-140 μg/ml I:n ja II:n osalta. Fluoresenssi-konsentraatio-käyrästöt olivat lineaarisia välillä 0,5-10 ja 2,5-20 μg/ml, ja niiden pienimmät havaitsemisrajat (S/N = 2) olivat 0,05 μg/ml (~ 2,1 × 10- 8 mol/l) ja 0,1 μg/ml (~ 5,8 × 10- 7 mol/l) I:lle ja II:lle. Spektrofotometristä menetelmää sovellettiin I:n ja II:n määrittämiseen niiden tableteista. Saantoprosentit ± SD (n = 6) olivat 99,45 ± 0,13 ja 98,05 ± 0,53. Spektrofluorimetristä menetelmää sovellettiin menestyksekkäästi I:n ja II:n määrittämiseen ihmisen virtsasta ja plasmasta. Saantumisprosentit ± SD (n = 5) olivat virtsan osalta 98,77 ± 0,29 ja 98,39 ± 0,53 sekä plasman osalta 99,32 ± 0,74 ja 98,90 ± 0,96 I:n ja II:n osalta. Samanaikaisesti annetut lääkkeet: valproiinihappo (CAS 99-66-1), difenyylihydantoiini (CAS 57-41-0), fenobarbitaali (CAS 50-06-6), karbamatsepiini (CAS 298-46-4), klonatsepaami (CAS 1622-61-3), klobatsaami (CAS 22316-47-8) tai simetidiini (CAS 51481-61-9) eivät häirinneet tuloksia. Ehdotetaan reaktiotietä.
Lähi-infrapunaspektrofotometriä, integroivaa optiikkaa ja rinnakkaisvektorin supertietokonetta käytetään matemaattisen mallin kehittämiseen, joka ennustaa yksittäisten ehjien tablettien liukenemisnopeuden lähi-IR-spektrien perusteella (r2 = 0,985). Jokainen tabletti voidaan analysoida spektrofotometrillä tuhoutumatta alle 1 minuutissa. Mallin avulla voidaan käyttää satoja lähi-IR-aallonpituuksia liukenemisnopeuden määrityksessä, mikä lisää tarkkuutta.
0,5 ml:n seeruminäyte, joka sisälsi erilaisia AED-lääkkeitä yksinään tai yhdistelmänä, tehtiin emäksiseksi, päällystettiin iso-oktaanilla ja höyrystettiin KMnO4:n läsnäollessa. Orgaanisessa kerroksessa olevien hapettuneiden tuotteiden spektrit rekisteröitiin UV-alueella. Hapettuneilla fenobarbitonilla ja primidonilla ei ole absorptiohuippua, diatsepaamilla delta-max 228 nm:ssä, fenytoiinilla 247 nm:ssä ja karbamatsepiinilla 247 ja 372 nm:ssä. Näin ollen fenobarbitoni ja diatsepaami eivät häiritse fenytoiinin määritystä, mutta karbamatsepiini häiritsee. Karbamatsepiinin osuus 247 nm:ssä laskettiin 372 nm:ssä tapahtuvasta absorptiosta ja sen molaaristen ekstinktiokertoimien suhteesta näillä kahdella aallonpituudella. Tämä vähennettiin A247-kokonaisarvoista, jotta saatiin fenytoiinin aiheuttamat todelliset arvot. Näin on kehitetty menetelmä karbamatsepiinin ja fenytoiinin samanaikaiseen analysointiin yhdestä näytteestä .
Karbamatsepiini ja 5,5-difenyylihydantoiini uutetaan samanaikaisesti 100-200 μl:sta verta 1,2-dikloorietaanilla. 5,5-difenyylihydantoiini poistetaan yksivaiheisella pesulla emäksellä. Dikloorietaani pestään edelleen hapolla ja haihdutetaan kuiviin. 5,5-difenyylihydantoiini määritetään alkalihuuhtelusta bentsofenonimenetelmällä; karbamatsepiini määritetään kuivatusta jäännöksestä aiemmin kuvatulla 9-metyyliakridiinimenetelmällä. Yhdistetty menetelmä on nopea ja luotettava, ja sen havaitsemisraja on kummallekin lääkeaineelle alle 0,1 mg/100 ml.
Kuvataan UV-spektrofotometrinen menetelmä karbamatsepiinin mikromäärittämiseksi verestä, joka perustuu alkuperäiseen 9-metyyliakridiinimenetelmään, jonka ovat ehdottaneet K.H. Beyer, K. Klinge, Arzneim. Forsch. 19 (1969) 1759-1760). Karbamatsepiini uutetaan verestä dikloorimetaanilla, joka sitten pestään emäksellä ja hapolla. Alikvootti uuttoaineesta haihdutetaan kuivaksi ja jäännös kuumennetaan lyhyesti suolahapolla 150 °C:ssa. Kun epäspesifiset häiriöt on poistettu n-heptaanilla, hapon katalysoiman uudelleenjärjestelytuotteen (9-metyyliakridiini) absorbanssi määritetään 258 nm:ssä. Menetelmä on nopea, luotettava, herkkä ja spesifinen. Se vaatii 100-200 μl näytettä yhtä arviointia varten, ja sen toteamiskynnys on alle 0,1 mg/100 ml. Johtopäätöksenä on, että menetelmä soveltuu kliiniseen rutiinikäyttöön.
Kuvaillaan spesifinen suora kaasukromatografinen menetelmä karbamatsepiinin ja semikvantitatiivisesti 10,11-epoksi-karbamatsepiinin määrittämiseksi seerumista. Karbamatsepiinin keskimääräinen saanto on 98 %, ja kaksoismäärityksen virhe on ± 4 %. Menetelmää verrataan Herrmannin klassiseen spektrofotometriseen menetelmään. Karbamatsepiinin keskimääräinen seerumipitoisuus oli 103 potilaan aineistossa 25,5 ± 12,8 μmol/l GLC:llä ja 23,0 ± 12,6 μmol/l spektrofotometrialla. Ero oli erittäin merkittävä. Verinäytemäärä on 1/10 spektrofotometriassa tarvittavasta verinäytemäärästä.