By Leave a Comment on Kolorimetristen ja kemiluminesenssi-ELISA-testien vertailu

Oletko utelias kemiluminesenssi-ELISA-testien suhteen, mutta et ole aivan varma, mitä ne ovat tai miten niitä käytetään? Videollamme A Comparison of Colorimetric and Chemiluminescence ELISAs käsitellään sitä, kuinka samankaltaisia nämä kaksi määritystyyppiä ovat ja kuinka ne voivat tehostaa laboratoriotestejäsi.

Katso videomme:

  • Opi, miten kemiluminesenssi- ja kolorimetriset ELISAt mittaavat biomarkkereita
  • Tutustu erityyppisiin levylukijoihin, joita käytetään kummankin määrityksen suorittamiseen
  • Vertaile kummankin määrityksen komponentteja

Kolorimetristen ja kemiluminesenssi-ELISAjen vertailu

Videon transkriptio

Hello, Olen Christi Caillouette ALPCO:sta! Tänään käyn kanssanne läpi kolorimetristen ja kemiluminesenssi-entsyymiin sidottujen immunosorbenttimääritysten, joita kutsutaan myös ELISA-määrityksiksi, vertailun.

Sandwich-ELISA-määritysten periaate

Vaikka on olemassa monenlaisia määritystyyppejä, ne ELISA-määritykset, joihin viittaan tänään, ovat sandwich-määrityksiä. Sandwich-ELISA-menetelmissä levyyn on päällystetty vasta-aine, joka sitoutuu spesifisesti haluttuun analyyttiin. Pesuvaiheen jälkeen lisätään detektiovasta-aine ja entsyymileima, jotka sitoutuvat analyyttiin. Substraatti lisätään reaktion aikaansaamiseksi kuoppiin. Määritystyypistä riippuen tuotetaan joko väriä tai valoa. Tämä reaktio voidaan mitata levylukijalla. Värimuutoksen tai säteilevän valon määrä osoittaa näytteessä olevan analyytin määrän.

Kuva 1: Yleiskatsaus kolorimetristen ja kemiluminesenssisandwich-ELISA:iden periaatteesta.

Biomarkkereiden tuntemattomien pitoisuuksien mittaaminen

Kummassakin kolorimetrisessä ja kemiluminesenssisandwich-testissä käytetään tunnettuja standardeja, joiden avulla voidaan laatia vakiokäyrä, jonka avulla voidaan mitata näytteessä olevan analyytin tuntematon pitoisuus. Kitistä riippuen tämä tehdään käyttämällä ohjelmistoja, joissa on 4 tai 5 parametrin logistinen käyrän sovitusalgoritmi. Molemmat sarjat antavat käyttäjälle analyytin mittaustulokset hyvin samanlaisella tavalla.

Kuva 2: Esimerkkejä standardikäyristä, jotka on tuotettu ALPCO Human Insulin Colorimetric ELISA-testillä ja STELLUX® Chemi Active GLP-1 (7-36) amide ELISA -testillä.

Kolorimetristen ELISA-testien tulos

Kolorimetriset ELISA-testit edellyttävät tavanomaista mikrolevylukulaitetta entsyymimerkin ja substraatin välisen värimuutosreaktion havaitsemiseksi. Lukija lähettää aallonpituuden, tyypillisesti 450 nm, jokaisen kuopan läpi määrittääkseen näytteiden optisen tiheyden eli ”OD”-lukeman. Levylukijasta riippuen OD-lukemat ovat välillä 0-4 tuhannesosan desimaalin tarkkuudella. OD-lukemia rajoittaa spektrofotometrin kapasiteetti.

Kuva 3: Spektrofotometrejä käytetään kolorimetristen levyjen lukemiseen, jotta kullekin kuopalle saadaan optiset tiheydet, jotka muunnetaan biomarkkeripitoisuuksiksi.

Kemiluminesenssi-ELISA-testien tulos

Kemiluminesenssi-ELISA-testit edellyttävät mikrolevylukulaitetta, joka kykenee mittaamaan luminesenssia entsyymileiman ja substraatin välisen valoreaktion havaitsemiseksi. Kuopissa tapahtuvan reaktion synnyttämä valo siirretään kuituoptisen kaapelin kautta lukulaitteessa olevaan fotomonistinlaitteeseen, joka tuottaa suhteellisia valoyksiköitä eli ”RLU:ita”. Levylukijasta riippuen RLU:t voivat vaihdella sadoista miljooniin. Tämä yksikköjen hajonta tarjoaa käyttäjille paremman analyyttisen herkkyyden ja laajemman dynaamisen alueen, koska se antaa suuremman erottelun pisteiden välille, ja vähentää tavanomaisen mikrolevylukijan optisen tiheyden lukemien rajoituksia.

Kuva 4: Luminometrejä käytetään kemiluminesenssilevyjen lukemiseen suhteellisten valoyksiköiden saamiseksi, jotka muunnetaan biomarkkerien pitoisuuksiksi.

Kolorimetriset vs. kemiluminesenssi-ELISA:t

Nyt esittelen, mitä kolorimetristen ja kemiluminesenssi-ELISA-käyttösarjojen laatikoissa yleensä on, ja näytän, miten nämä sarjat eroavat toisistaan vain vähän. Näytän teille ALPCO:n kolorimetrisen ihmisen insuliinin ELISA-testin ja STELLUX Chemi Active GLP-1 (7-36)-amidin ELISA-testin.

Kolorimetrisen ihmisen insuliinin ELISA-testin komponentit

Aluksi aloitamme ALPCO:n kolorimetrisestä ihmisen insuliinin ELISA-testistä. Tässä kolorimetrisessä määrityksessä saat:

  • 96 kuoppamikrolevyn – levy on kirkas, jotta levyn värin OD-mittaukset voidaan tehdä
  • Nollastandardi
  • Standardit, A-E – jokaisessa injektiopullossa on tunnetut insuliiniarvot standardikäyrän laatimista varten
  • Kontrollit – sisältää tunnetut insuliiniarvot laadunvalvontaa varten.
  • entsyymileimattu detektiovasta-aine
  • Pesupuskurikonsentraatti
  • TMB-substraatti – joka inkuboinnin aikana muuttaa kuopat sinisiksi.
  • Stop-liuos – joka lisätään pysäyttämään kuoppien värinmuutosreaktio, jolloin kuopat muuttuvat keltaisiksi.
  • Ja levyntiivistimet
Kuva 5: Ihmisen insuliinin ELISA-kitin komponentit.

STELLUX® Chemiluminescence Active GLP-1 (7-36) amide ELISA Components

Jatkossa on ALPCOn STELLUX® Chemi Active GLP-1 (7-36) amide ELISA. Tässä kemiluminesenssimäärityksessä saat:

  • Aktiivinen GLP-1 96-kuoppainen mikrolevy – Huomaa, että kemilevy on kirkkaan sijasta musta. Musta levy vähentää taustavalon häiriöitä, kun levyä luetaan.
  • Standardit
  • Kontrollipitoisuudet
  • Assay-puskuri
  • Detektorivasta-aine
  • Detektorivasta-ainepuskuri
  • Huuhtelupuskurikonsentraatti
  • Streptavidiini-HRP – joka toimii entsyymimerkkinä.
  • Streptavidin-HRP-puskuri – jota käytetään streptavidin-hrp:n laimentamiseen käyttövahvuuteen.
  • Kemiluminesenssisubstraatti A
  • Kemiluminesenssisubstraatti B – jotka yhdistetään käyttövahvuudeksi kemiluminesenssisubstraatti, joka vuorovaikuttaa entsyymimerkin kanssa kemiluminesenssireaktion synnyttämiseksi kussakin kuopassa.
  • Levyjen sinetöintilaitteet
Kuvio 6: STELLUX® Chemi Active GLP-1-(7-36)-amidi-ELISA-pakkauksen komponentit.

Johtopäätös

Kuten näet, jotkin reagenssit eroavat toisistaan kolorimetristen ja kemiluminesenssi-ELISA-testien välillä, mutta kummankin määrityksen periaate on samanlainen, ja molempien avulla voidaan mitata tuntemattomien analyyttien pitoisuuksia näytteistä. Käytitpä sitten kolorimetrisiä sarjoja tai oletko kiinnostunut kokeilemaan kemiluminesenssimäärityksiämme, meillä on jotain sinulle. ALPCO auttaa sinua tutkimaan laboratoriosi mahdollisuuksia. Jos haluat tutustua täydelliseen ELISA-tarjontaamme, käy verkkosivuillamme. Meillä on monia loistavia resursseja, jotka auttavat sinua projekteissasi, joten tutustu niihin.

Kiitos, että katsoit!

Jos haluat lisätietoja ALPCO:n tuotteista, ota yhteyttä Robert Somogyiin osoitteessa [email protected].

Vastaa

Sähköpostiosoitettasi ei julkaista.