Vaatimus luotettavista bikistronisista tai multikistronisista vektoreista geeninsiirtojärjestelmiä käytettäessä on biolääketieteellisen tekniikan eturintamassa. Menetelmä, joka mahdollistaa useiden heterologisten proteiinien tehokkaan yhteisekspression, olisi arvokas monissa sovelluksissa, erityisesti lääketieteessä erilaisten sairauksien hoidossa. Tässä tutkimuksessa suunnittelimme ja rakensimme bikistronisen ekspressiovektorin, jossa käytimme itsestään pilkkoutuvaa 2A-peptidiä, joka on peräisin Thosea asigna -hyönteisviruksesta (T2A). Tämä osoitti 2A-sekvenssin tehokkainta pilkkoutumista. T2A-pohjaisesta vektorista rakennettiin kaksi versiota vaihtamalla kiinnostavia proteiineja, N-myristoyloidun proteiinin ja ydinkeskustaan saapuvan proteiinin, koodaavat DNA-sekvenssit 2A-linkkerin ylävirtaan ja alavirtaan. Tuloksemme osoittivat, että mRNA-ekspression tasot olivat samankaltaisia ja T2A:n pilkkomistehokkuus oli 100 %. Raportoimme kuitenkin myös selvät todisteet siitä, että N-myristoyloidun proteiinin ei voida sijoittaa 2A-sekvenssin alavirtaan. Koska proteiinituote ei siirry plasmamembraaniin muuttuneen myristoylaatioprosessin vuoksi, T2A-pohjaisen vektorin geenin sijainti on merkityksellinen N-myristoyloidun proteiinin subcellulaarisen lokalisoinnin kannalta. Siksi havainto merkittiin varovaisuuteen 2A-peptidin käyttöä varten. Jotta 2A-peptiditekniikka voitaisiin ottaa käyttöön bikistronisen tai multikistronisen ilmentymisen tuottamiseksi, vektorin suunnittelussa olisi harkittava huolellisesti kunkin yksittäisen proteiinin siirtogeenin sijaintia, signaalisekvenssejä ja posttranslationaalisia modifikaatioita.
By adminLeave a Comment on Membraaniin kohdistuvan proteiinin heikentyminen, joka on käännetty ”itsestään pilkkoutuvan” T2A-peptidikonjunktion myöhemmästä geenistä