Alai

Kíváncsi a kemilumineszcens ELISA-kra, de nem tudja pontosan, hogy mik azok, vagy hogyan kell használni őket? Videónk A kolorimetrikus és kemilumineszcens ELISA-k összehasonlítása bemutatja, hogy mennyire hasonló ez a kétféle vizsgálat, és hogyan javíthatják a laboratóriumi vizsgálatokat.

Nézze meg videónkat, hogy:

• Tanulja meg, hogyan mérik a kemilumineszcens és kolorimetrikus ELISA-k a biomarkereket
• Tudja meg az egyes vizsgálatok elvégzéséhez használt különböző típusú lemezolvasókat
• Hasonlítsa össze az egyes vizsgálatok összetevőit

A kolorimetrikus és kemilumineszcens ELISA-k összehasonlítása

Video Transcript

Hello, Christi Caillouette vagyok az ALPCO-tól! Ma a kolorimetrikus és kemilumineszcens enzimhez kapcsolt immunszorbiens tesztek, más néven ELISA-k összehasonlításán fogom végigvezetni Önöket.

A szendvics ELISA-k elve

Míg sokféle teszt létezik, az ELISA-k, amelyekre ma hivatkozni fogok, a szendvics tesztek. A szendvics ELISA-knál a lemezre egy antitestet visznek fel, amely specifikusan kötődik a kívánt analithez. A mosási lépést követően egy detektáló antitestet és egy enzimjelzőt adunk hozzá, amelyek az analithez kötődnek. Szubsztrátot adunk hozzá, hogy reakció alakuljon ki a lyukakban. A vizsgálat típusától függően szín vagy fény keletkezik. Ez a reakció lemezolvasóval mérhető. A színváltozás vagy a kibocsátott fény mértéke jelzi az analit mennyiségét a mintában.

A biomarkerek ismeretlen koncentrációjának mérése

A kolorimetrikus és a kemilumineszcens próbák egyaránt ismert standardokat használnak egy standardgörbe létrehozásához, hogy megmérjék az analit ismeretlen koncentrációját a mintákban. A kitektől függően ezt 4 vagy 5 paraméteres logisztikus görbeillesztési algoritmusokkal rendelkező szoftverprogramok segítségével végzik. Mindkét típusú kit nagyon hasonló módon adja meg a felhasználó számára az analit mérését.

Kolorimetriás ELISA-k kimenete

A kolorimetriás ELISA-k standard mikrolemez olvasót igényelnek az enzimjelölés és a szubsztrát közötti színváltozási reakció kimutatásához. Az olvasó egy hullámhosszt, jellemzően 450 nm-t küld át az egyes kutakon, hogy meghatározza a minták optikai sűrűségét vagy “OD” értékét. A lemezolvasótól függően az OD-értékek 0 és 4 között vannak, az ezredik tizedesjegy pontossággal. Az OD-értékeket a spektrofotométer kapacitása korlátozza.

A kemilumineszcens ELISA-k eredménye

A kemilumineszcens ELISA-khoz olyan mikrolemezolvasóra van szükség, amely képes a lumineszcencia mérésére az enzimjelző és a szubsztrát közötti fényreakció kimutatásához. A lyukakban lejátszódó reakció által kibocsátott fényt egy optikai kábel továbbítja az olvasóban lévő fotomultiplikátorhoz, amely relatív fényegységeket vagy “RLU-kat” ad ki. A lemezolvasótól függően az RLU-k száma több száz és több millió között lehet. Az egységeknek ez a szórása jobb analitikai érzékenységet és szélesebb dinamikai tartományt biztosít a felhasználók számára azáltal, hogy nagyobb elválasztást biztosít a pontok között, és csökkenti a szabványos mikrolemez-olvasóból származó optikai sűrűség leolvasásának korlátait.

Kolorimetrikus vs. kemilumineszcens ELISA-k

Most megmutatom, hogy általában mi van a kolorimetrikus és kemilumineszcens ELISA-készletek dobozaiban, és hogy ezek a készletek csak kis mértékben különböznek egymástól. Megmutatom az ALPCO kolorimetrikus humán inzulin ELISA-t és a STELLUX Chemi Active GLP-1 (7-36) amid ELISA-t.

Kolorimetrikus humán inzulin ELISA összetevők

Először az ALPCO kolorimetrikus humán inzulin ELISA-val kezdjük. Ebben a kolorimetrikus tesztben a következőket kapja:

• 96 lyukú mikrolemez – a lemez átlátszó, hogy lehetővé tegye a lemezben lévő szín OD-mérését
• Nulla standard
• Standardok, A-tól E-ig – minden inzulin injekciós üveg ismert értékeket tartalmaz a standard görbe létrehozásához
• Kontrollok – ismert inzulin értékeket tartalmaz a minőségellenőrzéshez.
• Enzimekkel jelölt detektáló antitest
• Mosópuffer-koncentrátum
• TMB-szubsztrát – amely az inkubáció során kékre változtatja a kutakat.
• Stop oldat – amelyet azért adunk hozzá, hogy a kutakban leállítsa a színváltozási reakciót, és sárgává változtassa a kutakat.
• És lemezzárók

STELLUX® kemilumineszcens aktív GLP-1 (7-36) amid ELISA komponensei

A következő az ALPCO STELLUX® Chemi Active GLP-1 (7-36) amid ELISA. Ebben a kemilumineszcens tesztben a következőket kapja:

• Active GLP-1 96 lyukú mikrolemez – Vegye észre, hogy a kemilumineszcens lemez átlátszó helyett fekete. A fekete lemez csökkenti a háttérfény interferenciáját a lemez leolvasásakor.
• Standardok
• Kontrollszintek
• Assay puffer
• Detektor antitest
• Detektor antitest puffer
• Mosópuffer koncentrátum
• Streptavidin-HRP – amely az enzim jelöléseként működik.
• Streptavidin-HRP puffer – amely a streptavidin-hrp munkaerősségre hígítására szolgál.
• Kémilumineszcens szubsztrát A
• Kémilumineszcens szubsztrát B – amelyeket kombinálva munkaerős kemilumineszcens szubsztrátot kapunk, amely az enzimjelölővel kölcsönhatásba lépve minden egyes mélyedésben létrehozza a kemilumineszcens reakciót.
• Lemezzárók

Következtetés

Amint látható, néhány reagens különbözik a kolorimetriás és a kemilumineszcens ELISA-k között, de az egyes próbák elve hasonló, és mindkettő lehetővé teszi az ismeretlen analitok koncentrációjának mérését a mintákban. Akár kolorimetrikus készleteket használ, akár kemilumineszcens tesztjeinket szeretné kipróbálni, nálunk van valami az Ön számára. Az ALPCO azért van itt, hogy segítsen Önnek felfedezni a laboratóriumában rejlő lehetőségeket. Teljes ELISA-kínálatunk megtekintéséhez kérjük, látogasson el weboldalunkra. Számos nagyszerű forrásunk van, hogy segítsünk Önnek a projektjeiben, ezért kérjük, nézzen körül.

Köszönjük, hogy megnézte!

Ha többet szeretne megtudni az ALPCO termékeiről, kérjük, lépjen kapcsolatba Somogyi Róberttel a [email protected] címen.