Abstract
A GADVASU Állatorvosi Klinika ötéves kan labrador kutyáját elsődleges panaszként felfúvódott has, láz és étvágytalanság jelentkezett. A kutyát tompának találták, emelkedett rektális hőmérséklettel (104°F), szívfrekvenciával (148/perc) és légzésszámmal (58/perc). A vérkenetvizsgálat és a PCR-vizsgálat kimutatta, hogy a kutya pozitív Babesia gibsoni-ra. Emelkedett bilirubin, alanin-aminotranszferáz (ALT), alkalikus foszfatáz (ALP), kreatinin, vér karbamid nitrogén (BUN), teljes leukocitaszám, hypoalbuminaemia és hypoproteinaemia voltak a hematobiokémiai elváltozások. A radiográfia és az ultrahangvizsgálat a hasüregben földüveges megjelenést, illetve anechoikus területet mutatott.
1. Bevezetés
A kutyák babéziózisa a kutyák egyik legfontosabb életveszélyes, kullancsok által terjesztett hemoprotozoás betegsége, amelyet a Babesia nemzetséghez tartozó intraeritrocitikus protozoás paraziták okoznak, amelyekről világszerte és India különböző részein, köztük Punjab államban is beszámoltak . A B. canis és a B. gibsoni változó prevalenciáját figyelték meg Indiában (0,66-21,7%), Ludhianában pedig 5,26 százalékos prevalenciát regisztráltak. A kutyák babesiosisának patogenezise a különböző régiókban eltérő, valószínűleg a Babesia fajok különböző törzseinek különböző ökológiai körülmények közötti eltérő patogenitása miatt. A babesiosis súlyossága a parazita szaporodásának mértékével függ össze a gazda vörösvérsejtjeiben, az azt követő sejtlízissel. A klinikai tünetek széles skáláját figyelték meg, mint például étvágytalanság, letargia, ikterusz, hányás és a testállapot jelentős romlása, valamint változó klinikopatológiai eltéréseket, beleértve a hemoglobinuriát, hipoglikémiát, sav-bázis zavarokat, azotémiát és a májenzimek szintjének emelkedését . Továbbá a B. gibsoni regeneratív hemolitikus anémiát és trombocitopéniát okoz . A szferocitózis és a pozitív közvetlen Coombs-teszt eredményei immunrendszeri komponensre utalnak. A trombocitopénia gyakori lelet. Jelen közleményben a Babesia gibsoni fertőzés patogén hatására kialakult peritoneális folyadékgyülem klinikai-haematobiokémiai, röntgen- és ultrahangvizsgálati megfigyeléseit ismertetjük egy nagyon ritka esetben.
2. Az eset leírása
A Guru Angad Dev Állatorvosi és Állattudományi Egyetem Állatorvosi Oktatókórházában, Ludhiana, 2013 júliusában egy ötéves labrador kan kutyát mutattak be haspuffadással és két napja tartó tartós étvágytalansággal. A kutya rossz fizikai állapotot mutatott. A fizikális vizsgálat során a kutya lázas volt (104°F), a szívfrekvencia 148 ütés/perc, a légzési frekvencia 58 légzés/perc volt. A nyálkahártyák sápadtak voltak. A kutyából eltávolították a kullancsot, amelyet Rhipicephalus sanguineus-ként azonosítottak.
Vérmintákat küldtek be hematológiai és szérum biokémiai elemzésre.
2.1. Vérminták. Hematológiai és biokémiai elemzés
A hematológiai és biokémiai elemzés mérsékelt vagy súlyos vérszegénységet mutatott, emelkedett bilirubin, alanin-aminotranszferáz (ALT), alkalikus foszfatáz (ALP), kreatinin, vér karbamid nitrogén (BUN), teljes leukocitaszám, hypoalbuminaemia és hypoproteinaemia voltak a hematobiokémiai változások (1. táblázat). A krónikus májelégtelenség babesiosis esetén hypoalbuminaemiához vezethet. A hematológiai paraméterek arra utaltak, hogy a kutyának vérparazitái vagy más releváns fertőző betegségei lehetnek. Úgy tűnik, hogy a vérszegénység patogenezise nem hemolitikus és hemolitikus mechanizmusokat foglal magában. A hemolízishez hozzájárulhatnak a behatoló parazita által termelt proteázok, a parazitált sejtekkel szembeni immunreakció és/vagy az eritrociták oxidatív károsodása. Az MCV-, MCH- és MCHC-értékek éppen a normál tartomány határán voltak (1. táblázat), ami azt jelzi, hogy a vérszegénység nem vashiány miatt alakult ki, de az MCV- és MCHC-értékek gyakran nem képesek helyesen megkülönböztetni a vérszegénység különböző mintáit . A leggyakoribb rendellenesség a trombocitopénia volt. A trombocitopénia oka babesiosisban a vérlemezkék lépben történő szekvesztrációja vagy immunmediált vérlemezkék pusztulása és a disszeminált intravaszkuláris koaguláció kialakulása lehet .
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Kahn et al. . | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
2.2. táblázat. Parazitológiai vizsgálat
A lehetőségek megkülönböztetése érdekében a fülszegélyből készített Giemsa-festésű vékony vérkenetek mikroszkópos vizsgálatát olajimmersziós (100x) lencse alatt végeztük. A vizsgálat gyűrű alakú, ovális, ejtőernyős és vesszőszerű, kb. 1-3 μm átmérőjű organizmusok jelenlétét mutatta ki az eritrocitákban (1. ábra). Az intracelluláris paraziták mérete alapján ebben az esetben felmerült annak lehetősége, hogy a kutya kisméretű Babesia spp.-vel, különösen B. gibsoni-val fertőződött. A parazitémia mértéke, amelyet 1000 vörösvértest megszámlálásával a fertőzött vörösvértestek százalékos arányaként számítottunk, 10,5% volt. A kutyán jelen lévő kullancsokat Rhipicephalus sanguineus-ként azonosították. Az a tény, hogy a B. gibsoni mikroszkópiával nem különböztethető meg más kutyák kis babesialis izolátumaitól, arra késztetett bennünket, hogy a végső diagnózis felállításához PCR-t végezzünk B. gibsoni specifikus primer felhasználásával.
2.3. DNS extrakció
A teljes vérből (300 μL) származó DNS-t a DNS-tisztító kit (QIAGEN, GmbH, Németország) segítségével extraháltuk a gyártó utasításainak megfelelően.
A B. gibsoni-ra specifikus 18 S rRNS gén régiójának 671 bp hosszúságú fragmentumának felerősítésére a B. gibsoni-ra specifikus 18 S rRNS gén régiójából egy 671 bp hosszúságú fragmentumot tartalmazó primer-készletet használtunk, amely tartalmazta a forward primert (Gib599 F): 5′CTCGGCTACTACTTGCCTTGTC3′ és a reverse primert (Gib1270R): 5′GCCGAAACTGAAATAACGGC 3′ . A PCR-keverék 12,5 µl master mix (1X QIAGEN PCR-puffer, 2,5 egység Taq DNS-polimeráz, 200 µM mindegyik dNTP és 1,5 mM MgCl2) 1,5 µl 10 pmol mindegyik megfelelő primerből és 5 µl templátból mint DNS-forrásból állt.
A 95°C-on 5 percig tartó kezdeti denaturálás után 30 ciklust végeztünk denaturálással (94°C 45 másodpercig), lágyítással (57°C 1 percig) és hosszabbítással (72°C 1 percig), majd a végső hosszabbítást 72°C-on 8 percig végeztük. A PCR-reakcióba egy negatív mintakontrollt (csak kutyavér DNS) és egy negatív DNS-kontrollt (Milli-Q víz a DNS helyettesítésére) is bevontunk. A PCR-termékeket 1,5%-os agarózgélen futtattuk és etídium-bromiddal festettük. Az amplifikált PCR-termék mérete 671 bp volt (2. ábra).
2.4. Peritoneális folyadék analízis
A haspuffadás alapján ascites gyanúja merült fel. Peritoneális lapot végeztek, és 2 ml tiszta peritoneális folyadékot gyűjtöttek. A peritoneális folyadékot jellemzően szín, zavarosság, összfehérje és albumin koncentráció szempontjából vizsgálták. A folyadék átlátszó és tiszta volt. Az összfehérje és az albumin 0,4 g/dl, illetve 0,2 g/dl volt, ami hypoproteinaemiára (0,4 g/dl) és hypoalbuminaemiára (0,2 g/dl) utalt.
2.5. Röntgen- és ultrahangvizsgálat
A radiográfia és az ultrahangvizsgálat a hasüregben őrleményes megjelenést, illetve anechoikus területet mutatott (3. és 4. ábra). Az esetet így megerősítették, hogy aszciteszről van szó. Bár a babesiosis leggyakoribb klinikai tünetei közé tartozik az anorexia, a letargia, a visszatérő láz, a sápadt nyálkahártya és a hányás , eredményeink rávilágítottak arra, hogy az ascites differenciáldiagnózisában nem szabad elhanyagolni a babesiosist. Az ascitesben szenvedő kutyákat klasszikus parazitológiai vagy molekuláris diagnosztikának kell alávetni a babesiosis kizárása érdekében. A babézia szervezetek megfertőzik a kutyák eritrocitáit, ami hemolitikus anémiához vezet. A B. gibsoni fertőzésről ismert, hogy súlyosabb klinikai tüneteket okoz, mint a nagy Babesia spp. fertőzése, és többszervi diszfunkciós szindrómát eredményezhet. Mivel a kutya súlyosan vérszegény volt, a létfontosságú szervekkel kapcsolatos paraméterek egyéb súlyos eltéréseivel együtt, a kezelést követő két napon belül elpusztult.
3. Következtetés
A legjobb tudomásunk szerint ez az első esetjelentés egy kutya peritoneális folyadékgyüleméről, amely a B. gibsoni fertőzésről, amelyet mikroszkópos vizsgálattal és polimeráz láncreakcióval (PCR), valamint peritoneális folyadék elemzésével, röntgenvizsgálattal és ultrahangvizsgálattal együtt diagnosztizáltak.
Érdekütközés
A szerzők kijelentik, hogy nincs érdekellentét e cikk publikálásával kapcsolatban.