4.2.1.2 Látható spektrometriai módszerek
ACBZ és a PHT két AED, amelyeket egyszerre alkalmaznak. Ebben a dolgozatban egy PLS kalibrációs módszert írunk le a CBZ és a PHT egyidejű spektrofotometriás meghatározására plazmában. A CBZ és a PHT standard bináris keverékeit a PLS-1 alkalmazásával oldottuk fel UV spektrumukra. Ezután elkészítettük a plazmába spiccelt bináris standard oldatokat, majd a gyógyszerek extrakciója után a megfelelő UV spektrumukat PLS regresszióval elemeztük, hogy kiszámítsuk a gyógyszerek koncentrációját az ismeretlen plazmában. A látens változók optimális számának megtalálására egy leave-one-out keresztvalidálási eljárást alkalmaztunk a PRESS segítségével. HPLC-módszert is alkalmaztunk két gyógyszer egyidejű meghatározására a plazmában és metanolban. A PLS-sel kapott átlagos visszanyerés 98,4 és 98,2 volt a CBZ és a PHT esetében, a HPLC-vel kapott pedig 100,1 és 101,7 volt. Bár a HPLC-módszer jobb teljesítményt mutatott, mint a PLS, azt találták, hogy a PLS-sel kapott eredmények összehasonlíthatóak a HPLC-módszerrel kapott eredményekkel .
Két spektrofotometriás módszert javasoltak az OXC vizsgálatára ömlesztett és adagolási formákban, Folin-Ciocalteu fenolreagens (FCP) és 3-metil-2-benzotiazolinon-hidrazin-hidroklorid (MBTH) mint reagensek használatával. Az első módszer az FCP reagens hozzáadását jelenti az OXC-hez lúgos közegben, majd az abszorbancia mérését 760 nm-en (A módszer), a másik módszer pedig az OXC vas-kloriddal történő kezelését követően egy meghatározott mennyiségű MBTH hozzáadását és az abszorbancia mérését 456 nm-en (B módszer). Mindkét módszer esetében a képződött kromogén mennyisége megfelel az OXC mennyiségének, és a mért abszorbancia lineárisan növekszik az OXC koncentrációjával, amit az A és B módszer esetében a 0,9985 és 0,9984 korrelációs együtthatók is alátámasztanak. A rendszerek a Beer-törvénynek engedelmeskednek 5-30 és 10-50 μg/ml esetén az A és B módszer esetében. A látszólagos moláris abszorpciós képesség 8,06 × 103 és 3,126 × 103 L/mol/cm volt az A és B módszer esetében. Az LOD és LOQ számítások szerint az A módszer esetében 1,6 és 5 μg/ml, a B módszer esetében pedig 3 és 10 μg/ml. A módszerek napközi és napon belüli pontatlanságát az A módszer esetében 1,1-1,7% és 0,9-1,1%, a B módszer esetében pedig 1,1-1,9% és 0,6-0,9% közötti értéknek találták. A szokásos gyógyszeripari segédanyagok nem okoztak interferenciát. A módszereket sikeresen alkalmazták az OXC meghatározására tablettás készítményekben .
A CBZ enzimes biotranszformáción megy keresztül epoxidációval, melynek során metabolitja, a CBZ-E keletkezik. Egy egyszerű, kemometriával segített spektrofotometriás módszert javasoltunk a CBZ és a CBZ-E egyidejű meghatározására plazmában. Folyadék extrakciós eljárást alkalmaztunk az analitok plazmából történő elválasztására, és az így kapott oldatok UV abszorbancia spektrumát PLS regressziónak vetettük alá. A PLS látens változók optimális számát a leave-one-out keresztvalidálás PRESS értékei alapján választottuk ki. Az összehasonlításhoz egy HPLC-módszert is alkalmaztunk. A szintetikus keverékek CBZ és CBZ-E analízisének átlagos visszanyerése 102,57 (± 0,25)% és 103,00 (± 0,09)% volt a PLS esetében, és 99,40 (± 0,15)% és 102,20 (± 0,02)%. A CBZ és a CBZ-E koncentrációját szintén öt betegnél határozták meg a PLS és a HPLC módszerrel. Az eredmények azt mutatták, hogy a PLS módszerrel kapott adatok összehasonlíthatóak voltak a HPLC módszerrel kapott adatokkal .
Egy szelektív és érzékeny módszert fejlesztettek ki a vigabatrin (I) (CAS 60643-86-9) és a gabapentin (II) (CAS 60142-96-3) görcsoldók meghatározására. A módszer a gyógyszereknek az aminocsoportjaikon keresztül acetilacetonnal és formaldehiddel történő, a Hantzsch-reakciónak megfelelő kondenzációján alapul, amelynek eredményeként erősen fluoreszcens dihidropiridin-származékok keletkeznek. A sárgás-narancsos színt spektrofotometriásan 410 és 415 nm-en mértük az I és II esetében is. Az abszorbancia-koncentráció grafikonok egyenes vonalúak voltak a 10-70 és 20-140 μg/ml tartományban az I és II esetében. A fluoreszcencia-koncentráció ábrák a 0,5-10 és 2,5-20 μg/ml tartományban lineárisak voltak, a minimális kimutatási határ (S/N = 2) 0,05 μg/ml (~ 2,1 × 10- 8 mol/l) és 0,1 μg/ml (~ 5,8 × 10- 7 mol/l) volt az I és II esetében. A spektrofotometriás módszert alkalmaztuk az I és II meghatározására a tablettáikban. A százalékos visszanyerés ± SD (n = 6) 99,45 ± 0,13 és 98,05 ± 0,53 volt. A spektrofluorimetriás módszert sikeresen alkalmazták az I és II meghatározására tüskézett emberi vizeletben és plazmában. A visszanyerési % ± SD (n = 5) 98,77 ± 0,29 és 98,39 ± 0,53 volt a vizelet esetében, illetve 99,32 ± 0,74 és 98,90 ± 0,96 a plazma esetében az I és II esetében. Nem tapasztaltak interferenciát az együtt beadott gyógyszerekkel: valproinsav (CAS 99-66-1), difenilhidantoin (CAS 57-41-0), fenobarbitál (CAS 50-06-6), karbamazepin (CAS 298-46-4), klonazepám (CAS 1622-61-3), klobazám (CAS 22316-47-8) vagy cimetidin (CAS 51481-61-9). Javaslatot teszünk a reakcióútvonalra. A javasolt módszerek előnyeit a meglévő módszerrel szemben megvitatjuk .
Egy közeli infravörös (IR) spektrofotométert, integráló optikát és párhuzamos vektoros szuperszámítógépet alkalmazunk egy olyan matematikai modell kifejlesztéséhez, amely az egyes ép tabletták oldódási sebességét a közeli IR spektrumokból jósolja meg (r2 = 0,985). Minden egyes tabletta roncsolásmentesen elemezhető a spektrofotométerrel kevesebb mint 1 perc alatt. A modell lehetővé teszi több száz közeli IR hullámhossz felhasználását az oldódási sebesség meghatározásához, ami megnövelt pontosságot eredményez .
Egy 0,5 ml szérum mintát, amely különböző AED-eket tartalmazott, egyenként vagy kombinációban, lúgossá tettük, izooktánnal fedtük, és KMnO4 jelenlétében gőzöltük. A szerves rétegben lévő oxidált termékek spektrumát az UV-tartományban vettük fel. Az oxidált fenobarbiton és primidon nem mutat abszorpciós csúcsot; a diazepam delta-max 228 nm-en; a fenitoin 247 nm-en; a karbamazepin 247 és 372 nm-en. Következésképpen a fenobarbiton és a diazepám nem zavarja a fenitoin mennyiségi meghatározását, de a karbamazepin igen. A karbamazepin 247 nm-es hozzájárulását a 372 nm-es abszorpcióból és a két hullámhosszon molekuláris extinkciós együtthatóinak arányából számították ki. Ezt kivontuk a teljes A247 értékekből, hogy megkapjuk a fenitoin okozta tényleges értékeket. Így kifejlesztettünk egy módszert a karbamazepin és a fenitoin egyidejű analízisére egyetlen mintában .
A karbamazepint és az 5,5-difenilhidantoint egyidejűleg 100-200 μl vérből 1,2-diklóretánnal extraháltuk. Az 5,5-difenilhidantoint egylépéses lúgos mosással távolítjuk el. A diklóretánt tovább mossuk savval, majd szárazra pároljuk. Az 5,5-difenilhidantoint a lúgos mosásban benzofenon eljárással határozzuk meg; a karbamazepint a szárított maradékban a korábban ismertetett 9-metilakridin eljárással határozzuk meg. A kombinált módszer gyors, megbízható, és a kimutatási küszöb mindkét hatóanyag esetében kevesebb, mint 0,1 mg/100 ml .
A karbamazepin vérben történő mikrodeterminációjának UV spektrofotometriás eljárását ismertetjük, amely a K.H. Beyer, K. Klinge, Arzneim által javasolt eredeti 9-metilakridin-módszeren alapul. Forsch. 19 (1969) 1759-1760). A karbamazepint diklórmetánnal vonják ki a vérből, amelyet lúggal és savval mosnak. A kivonószer egy aliquotját szárazra pároljuk, és a maradékot 150 °C-on rövid ideig sósavval hevítjük. A nem specifikus interferencia n-heptánnal történő eltávolítása után a savval katalizált átrendeződési termék (9-metilakridin) abszorbanciáját 258 nm-en határozzuk meg. Az így kapott eljárás gyors, megbízható, érzékeny és specifikus. Egyszeri becsléshez 100-200 μl minta szükséges, és a kimutatási küszöbérték kevesebb, mint 0,1 mg/100 ml. A következtetés az, hogy a módszer alkalmas rutinszerű klinikai használatra .
Specifikus közvetlen gázkromatográfiás módszert írunk le a karbamazepin és félkvantitatív módon a 10,11-epoxi-karbamazepin szérumban történő meghatározására. A karbamazepin átlagos visszanyerése 98%, a duplikált meghatározás hibája ± 4%. A módszert Herrmann klasszikus spektrofotometriás módszerével hasonlítják össze. 103 beteg anyagában a karbamazepin átlagos szérumkoncentrációja 25,5 ± 12,8 μmol/l volt GLC-vel és 23,0 ± 12,6 μmol/l spektrofotometriával. A különbség rendkívül szignifikáns volt. A vérminta térfogata 1/10-e a spektrofotometriánál szükségesnek .