A Digibind™ és DigiFab™ hatása a szérum digoxin mérésére
A Digibind és DigiFab antidigoxin antitest Fab fragmentumai, amelyeket életveszélyes akut digoxin túladagolás kezelésére használnak. A Digibind, a digoxin-túladagolás kezelésére rendelkezésre álló első antidotum 1986 óta kapható az Egyesült Államokban (Glaxo Wellcome Inc.), és nemrégiben, 2001-ben az Egyesült Államok Élelmiszer- és Gyógyszerügyi Hivatala (FDA) engedélyezte a DigiFab-ot a digoxin-túladagolás kezelésére. A Digibindet úgy állítják elő, hogy juhokat immunizálnak digoxin-humán albumin konjugátummal, majd a vérből elkülönítik a digoxin-specifikus antitestet, és papain emésztéssel létrehozzák az antitest Fab fragmentumát. Az antidigoxin antitest Fab-fragmentumát ezután tovább tisztítják. A DigiFab-ot úgy állítják elő, hogy a juhoknak digoxin-dikarboximetilamint, egy digoxin-analógot injektálnak, majd a vérből izolálják az antidigoxin antitestet, papain emésztéssel, majd affinitáskromatográfiával tisztítják a Fab-fragmentumot. A DigiFab molekulatömege (46 000 Da) hasonló a Digibind molekulatömegéhez (46 200 Da). A Digibind adagja általában a digoxin testterhelésének 80-szorosa; ha sem a bevitt dózis, sem a plazma digoxinkoncentrációja nem ismert, akkor általában 380 mg Digibindot adnak be a betegnek. A Fab-fragmentum felezési ideje emberben 12-20 óra, de ez veseelégtelenségben szenvedő betegeknél meghosszabbodhat . A Digibind és a DigiFab digoxinmegkötő képessége egyenértékű. Továbbá mindkét vegyület képes az endogén DLIS megkötésére .
A digoxin mellett a Digibind bizonyítja a 3. pozícióban glikozilált kardenolid (digitoxin és ouabain) hasonló hatékonysággal történő semlegesítésének képességét, függetlenül a molekula szteroid részének helyettesítésétől. Ezért a Digibind hatásos a különböző szívglikozidokat tartalmazó gyűszűvirággal történő növényi mérgezés kezelésében. Rich és munkatársai bemutatták egy 22 éves férfi sikeres kezelését Digibinddel, akit szándékosan túladagoltak egy házi készítésű foxglove-kivonattal . Ezenkívül a Digibind képes semlegesíteni mind a szívglikozidokat, mind a megfelelő aglikonokat – például az oleandrin, az oleander-kivonat aktív összetevője -, és hatékony az életveszélyes oleander-mérgezés kezelésében . Ezenkívül a Digibind hatékony lehet a Chan Su túladagolás kezelésében – a Chan Su egy bufalint és más, a bufadienolid osztályba tartozó kardioaktív szteroidokat tartalmazó kínai gyógyszer -, de a Digibind hatékonysága a Chan Su mérgezés kezelésében gyenge a digoxin túladagolás kezelésében mutatott hatékonyságához képest. Ez annak köszönhető, hogy a Digibind kevéssé specifikus a cinobufagin és a cinobufatolin semlegesítésére, amelyek szintén a Chan Su összetevői, akárcsak a varangyméreg .
A Digibind és a DigiFab egyaránt zavarja a szérum-digoxin mérését immunoassay segítségével. Az interferencia nagysága a vizsgálat kialakításától és az antidigoxin antitest specifitásától függ. A digoxin mikropartikuláris enzimes immunoassay (MEIA az AxSYM analizátoron, Abbott Laboratories, Abbott Park, IL), valamint a Stratus digoxin assay a Digibind jelenlétében a mért szabad digoxin koncentrációnál magasabb digoxin értékeket mutatott ki. McMillin és munkatársai tanulmányozták a Digibind és a DigiFab hatását 13 különböző digoxin-immunpróbára. A Digibind és a DigiFab esetében pozitív interferenciát figyeltek meg digoxin jelenlétében és hiányában, bár az interferencia mértéke a DigiFab esetében valamivel kisebb volt. Az interferencia nagysága jelentősen változott az egyes módszereknél, míg az IMMULITE®, Vitros®, Dimension® és Access® digoxin módszerek mutatták a legnagyobb interferenciát. Minimális interferenciát figyeltek meg az FPIA, MEIA, SYNCHRON és CEDIA módszereknél. A szerzők azt is megjegyezték, hogy a szabad digoxin (a fehérjeszegény ultrafiltrátban történő) monitorozása kiküszöböli ezt az interferenciát, mivel mind a Digibind, mind a DigiFab – megközelítőleg 46 000 Da molekulatömegük miatt – hiányzik a fehérjeszegény ultrafiltrátból . A Digibind és a DigiFab nem zavarja a szérum-digoxin kromatográfiás módszerrel, például tömegspektrometriával kombinált folyadékkromatográfiával történő mérését. Kanno és munkatársai leírtak egy módszert a digoxin, a digitoxin és a rokon vegyületek egyidejű elemzésére folyadékkromatográfiával kombinált tandem tömegspektrometriával . Oiestad és munkatársai szintén folyadékkromatográfia-tandem tömegspektrometriás (LC-MS/MS) módszert írtak le a digoxin és a digitoxin teljes vérben történő meghatározására boncolási esetekben. A mintákat folyadék-folyadék extrakcióval állították elő etil-acetát/heptán/diklórmetán (3 : 1 : 1 térfogatszázalék) felhasználásával, és a kromatográfiás elválasztást C-18 fordított fázisú oszlop segítségével végezték. A tömegdetektálást pozitív ion módú elektrospray-vel végeztük ammónium-adduktokon, és belső standardként deuterált digoxint (digoxin-d3) használtunk. A kromatográfiás módszereket azonban ritkán alkalmazzák klinikai laboratóriumokban, bár az igazságügyi toxikológiai laboratóriumok és a halálesetek kivizsgálásában részt vevő bűnügyi laboratóriumok rendelkeznek ilyen analizátorokkal.