A megbízható bicistronikus vagy multicistronikus vektorok iránti igény a génszállító rendszerekben a bio/biogyógyászati technológia élvonalába tartozik. Egy olyan módszer, amely több heterológ fehérje hatékony koexpresszióját biztosítja, számos alkalmazásban értékes lenne, különösen az orvostudományban a különböző betegségek kezelésére. Ebben a tanulmányban a Thosea asigna rovar (T2A) vírusából származó önhasadó 2A peptidet használó bicisztronikus expressziós vektort terveztünk és konstruáltunk. Ez mutatta a 2A szekvencia leghatékonyabb hasítását. A T2A alapú vektor két változatát úgy állítottuk elő, hogy az érdeklődésre számot tartó fehérjéket, az N-mirisztoilált fehérjét és a nukleáris célú fehérjét kódoló DNS-szekvenciákat a 2A linker fel-, illetve lefelé fordítottuk. Eredményeink azt mutatták, hogy hasonló mRNS-expressziós szintet találtunk, és a T2A hasítási hatékonysága 100%-os volt. Mindazonáltal arról a tisztázott bizonyítékról is beszámoltunk, hogy az N-mirisztoilált fehérje nem helyezhető a 2A szekvenciától lefelé. Mivel a fehérjetermék a megváltozott mirisztoilezési folyamat miatt nem transzlokálódik a plazmamembránba, a T2A alapú vektor génpozíciójának jelentősége van az N-mirisztoilezett fehérje szubcelluláris lokalizációja szempontjából. Ezért a megfigyelést a 2A peptid használatára vonatkozó elővigyázatosságként jelöltük meg. A 2A peptidtechnológia bicisztronikus vagy multicisztronikus expresszió létrehozására történő elfogadásához a vektortervezés során gondosan figyelembe kell venni a transzgén pozícióját, a szignálszekvenciákat és az egyes fehérjék poszt-transzlációs módosításait.
By adminLeave a Comment on Impairment of a membrane-targeting protein translated from a downstream gene of a “self-cleaving” T2A peptide conjunction