Chemiluminescence ELISAsに興味があるけど、どんなものか、どう使うのかよく分からないという方はいませんか？ このビデオでは、比色定量法と化学発光ELISA法の比較により、この2種類の測定法がいかに似ているか、また、これらの測定法がいかにあなたのラボの検査を強化するかについて説明します。
ビデオをご覧ください。
- 化学発光 ELISA と比色 ELISA がどのようにバイオマーカーを測定するかを学ぶ
- それぞれのアッセイを実行するために使用するプレート リーダーの種類を調べる
- それぞれのアッセイの要素を比較する
- A Comparison of Colorimetric and Chemiluminescence ELISAs
- ビデオの記録
- サンドイッチELISAの原理
- バイオマーカーの未知濃度測定
- Output of Colorimetric ELISAs
- Chemiluminescence ELISAの出力
- Colorimetric vs. Chemiluminescence ELISAs
- Colorimetric Human Inuslin ELISA Components
- STELLUX® Chemiluminescence Active GLP-1 (7-36) amide ELISA Components
- Conclusion
A Comparison of Colorimetric and Chemiluminescence ELISAs
ビデオの記録
Hello.Bhat’s a video transcripting? ALPCOのChristi Caillouetteです。 今日は、ELISAと呼ばれる比色法と化学発光法の比較について説明します。
サンドイッチELISAの原理
ELISAにはさまざまな種類がありますが、今日紹介するのはサンドイッチアッセイです。 サンドイッチELISAでは、目的の分析対象物に特異的に結合する抗体がプレートにコーティングされています。 洗浄の後、検出抗体と酵素標識が加えられ、これが分析対象物に結合します。 基質が添加され、ウェル内で反応が起こります。 アッセイの種類に応じて、色または光が生成されます。 この反応は、プレートリーダーで測定することができます。
バイオマーカーの未知濃度測定
比色法と化学発光法のどちらも、既知の標準物質を使用して標準曲線を作成し、サンプル中の分析対象物質の未知濃度を測定することができます。 キットによっては、4パラメータまたは5パラメータのロジスティックカーブフィットアルゴリズムを持つソフトウェアプログラムを使用することにより、これを実現します。
Output of Colorimetric ELISAs
Colorimetric ELISAでは、酵素標識と基質の間の色変化反応を検出するために、標準的なマイクロプレートリーダーが必要です。 リーダーは各ウェルに波長（通常450nm）を送り、サンプルの光学密度、または「OD」読み取り値を決定します。 プレートリーダーによって、OD 値は 0 ～ 4 の小数点以下となる。 OD測定値は分光光度計の容量によって制限されます。
Chemiluminescence ELISAの出力
化学発光ELISAでは、酵素標識と基質の光反応を検出するために発光を測定できるマイクロプレートリーダーが必要である。 ウェル内の反応によって発せられた光は、光ファイバーケーブルによってリーダー内の光電子増倍管に送られ、RLU（relative light units）を出力することができます。 プレートリーダーによって、RLUは数百から数百万の範囲となる。 このような単位の広がりは、分析感度の向上と、ポイント間の分離によるダイナミックレンジの拡大をもたらし、標準的なマイクロプレートリーダーから得られる光学密度の読み取りの制限を軽減することができます。
Colorimetric vs. Chemiluminescence ELISAs
では、通常、当社の比色および化学発光ELISAキットに入っているもの、これらのキットはわずかに異なることを紹介したいと思います。 今回は、ALPCO社のcolorimetric Human Insulin ELISAとSTELLUX社のChemi Active GLP-1 (7-36) amide ELISAです。
Colorimetric Human Inuslin ELISA Components
まず、ALPCO社のcolorimetric Human Insulin ELISAから紹介します。
- 96 well マイクロプレート-プレート内の色のOD測定ができるように透明になっています
- Zero standard
- Standards, A～E -各バイアルには標準曲線を確立するための既知の値のインスリンが含まれています
- Controls -品質管理のための既知の値のインスリンの含有物です。
- Enzyme labeled detection antibody
- Wash buffer concentrate
- TMB substrate – インキュベーション中にウェルを青色に変化させる基質。
- ストップ液-ウェルの変色反応を止めるために添加し、ウェルを黄色に変えます。
- プレートシーラー
STELLUX® Chemiluminescence Active GLP-1 (7-36) amide ELISA Components
次に、ALPCOのSTELLUX® Chemi Active GLP-1 (7-36) amide ELISAを紹介します。 この化学発光アッセイでは、
- Active GLP-1 96 well microplate – ケミプレートが透明ではなく黒色であることにご注目ください。
- 標準品
- コントロールレベル
- アッセイバッファー
- 検出抗体
- 検出抗体バッファ
- 洗浄バッファ濃縮液
- 酵素ラベルとして働くStreptavidin-HRP
- 。
- Streptavidin-HRP buffer -ストレプトアビジン-HRPを作業強度まで希釈するのに使用します。
- Chemiluminescent Substrate A
- Chemiluminescent Substrate B – これらは、各ウェルで化学発光反応を起こすために酵素標識と相互作用する作業強度化学発光基質を作るために組み合わせられます。
- プレートシーラー
Conclusion
ご覧のように、比色法と化学発光ELISAでは試薬の一部が異なりますが、それぞれの測定原理は似ており、どちらもサンプル中の未知分析物の濃度を測定することが可能です。 比色キットをお使いの方も、化学発光アッセイを試してみたいという方も、ぜひご利用ください。 アルプコは、お客様のラボの可能性を追求するお手伝いをいたします。 当社の ELISA 製品をご覧いただくには、当社のウェブサイトをご覧ください。 お客様のプロジェクトに役立つ素晴らしい資料がたくさんありますので、ぜひご覧ください。
ご覧いただきありがとうございます。
ALPCOの製品についてもっと知りたい方は、[email protected].
Robert Somogyiにご連絡ください。