Alai

Abstract

GADVASU Teaching Veterinary Clinicsに腹部膨満、発熱、食欲不振を主訴に5歳の雄ラブラドールが来院された． 直腸温（104°F），心拍数（148/分），呼吸数（58/分）の上昇を認め，犬の体温が低下していることが判明した。 血液塗抹検査とPCR検査により，Babesia gibsoni陽性であることが判明した． 血液生化学的変化として，ビリルビン，アラニンアミノトランスフェラーゼ（ALT），アルカリホスファターゼ（ALP），クレアチニン，血中尿素窒素（BUN），総白血球数，低アルブミン血症，低タンパク血症が上昇し，血中濃度が低下した． X線撮影と超音波検査では、それぞれ腹部のground glass appearanceとanechoic areaを示した

1. バベシア症はバベシア属の赤血球内寄生原虫によって引き起こされる犬の最も重要な生命を脅かすダニ媒介性血小板疾患の1つであり、世界的にもパンジャブ州を含むインドの様々な地域で報告されている.バベシア症は犬にとって最も重要な疾患である.バベシア属の赤血球内原虫は,犬の血小板内寄生原虫であり、赤血球内寄生原虫は犬の血小板内原虫である. インドではB. canisとB. gibsoniの有病率は0.66〜21.7％であり、Ludhianaでは5.26％であった。 犬バベシア症の病態は地域によって異なるが，これはバベシア属の異なる菌株の病原性が，さまざまな生態的条件下で変化するためと考えられる． バベシア症の重症度は、宿主の赤血球内での寄生虫の複製とその後の細胞溶解の程度に関連している。 食欲不振、嗜眠、黄疸、嘔吐、体調不良など様々な臨床症状が見られ、ヘモグロビン尿、低血糖、酸塩基平衡異常、アゾ血症、肝酵素値の上昇など臨床病理学的異常も多様である . さらに、B. gibsoni は再生性溶血性貧血と血小板減少症を引き起こす。 球状赤血球症と直接クームス試験陽性は、免疫学的な要素を示唆しています。 血小板減少症は頻度の高い所見である。 本報告では、Babesia gibsoni感染による腹水貯留の非常に稀な症例について、臨床血液生化学的、X線学的、超音波学的観察を記述する

2. 症例説明

2013年7月、ルディアナのGuru Angad Dev Veterinary and Animal Sciences UniversityのVeterinary Teaching Hospitalに、5歳の雄のラブラドール犬が、ここ2日間腹部膨満と持続的食欲不振で受診してきた。 この犬は体調不良を示していた。 身体検査では、犬は発熱し（104°F）、心拍数は148回/分、呼吸数は58回/分であった。 粘膜は蒼白であった。 犬からマダニが摘出され、Rhipicephalus sanguineusと同定された。

血液サンプルが血液学的および血清生化学的分析のために提出された。

2.1. 血液生化学的分析

血液生化学的分析では、ビリルビン、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ALT）、アルカリホスファターゼ（ALP）、クレアチニン、血尿窒素（BUN）、総白血球数の上昇、低アルブミン血症と低蛋白血症を伴う中程度から重度の貧血が、血液生化学的変化として認められた（表1）。 バベシア症では慢性肝不全が低アルブミン血症を引き起こす可能性がある． また、血液学的指標から、血液寄生虫やその他の感染症が疑われた。 貧血の病態には、非溶血性機序と溶血性機序があるようである。 溶血には、侵入した寄生虫が産生するプロテアーゼ、寄生された細胞に対する免疫反応、赤血球の酸化的損傷が関与している可能性がある。 MCV、MCH、MCHCの値はちょうど正常範囲の境界線上にあり（表1）、鉄欠乏による貧血ではないことがわかるが、MCVとMCHCはしばしば貧血の様々なパターンを正しく区別することができない。 最も多い異常は血小板減少であった。 バベシア症で血小板減少が起こる原因としては、脾臓への血小板封鎖、あるいは免疫による血小板破壊と播種性血管内凝固症候群の発症が考えられる。

2.2. 寄生虫学的検査

そこで、これらの可能性を区別するために、耳縁から調製したギムザ染色薄血液塗抹標本を油浸レンズ（100倍）下で顕微鏡検査した。 検査の結果、赤血球中に直径1〜3μm程度のリング状、楕円状、パラシュート状、コンマ状の生物の存在が確認された(図1)。 本症例の細胞内寄生虫の大きさから、小型のバベシア属、特にB. gibsoniに感染している可能性が考えられました。 赤血球1000個を数えて感染赤血球の割合として算出した寄生虫症の程度は10.5％であった． 犬に存在するマダニはRhipicephalus sanguineusと同定された。 B. gibsoniは顕微鏡検査では他の犬小バベシアルとの区別がつかないことから，B. gibsoni特異的プライマーを用いたPCRによる最終診断を実施した．

2.3. DNA抽出

全血（300μL）からDNA精製キット（QIAGEN, GmbH, Germany）を用いて、製造者の指示に従いDNAを抽出した。

B. gibsoniに特異的な18 S rRNA遺伝子領域671 bpを増幅するために、フォワードプライマー (Gib599 F): 5′CTCGGCTACTTGCCTTGTC3′ とリバースプライマー (Gib1270R): 5′GCCGAAACTGAAATAACGC 3′ のプライマーセットが用いられた． PCRミックスは、1Xモル濃度のマスターミックス12.5μL（1X QIAGEN PCR buffer, 2.5 units of Taq DNA polymerase, 200μM of each dNTP, and 1.5 mM MgCl2）、各プライマー10 pmol 1.5μL, DNAソースとしてのテンプレート5μLから構成されていた。

95℃で5分間の初期変性後、変性（94℃、45秒）、アニーリング（57℃、1分）、伸長（72℃、1分）を30サイクル行い、最終伸長は72℃で8分間実施した。 PCR反応には、陰性サンプルコントロール（イヌ血液DNAのみ）および陰性DNAコントロール（DNAの代わりにMilli-Q水を使用）を含むようにした。 PCR産物は1.5%アガロースゲルで行い、エチジウムブロマイドで染色した。 増幅されたPCR産物のサイズは671bpであった（図2）。

2.4. 腹膜液分析

腹部膨満感から腹水が疑われた。 腹膜タブを実施し、透明な腹膜液を2mL採取した。 腹水は通常、色調、濁度、総蛋白、アルブミン濃度を検査した。 液は透明で澄んでいた。 総蛋白とアルブミンはそれぞれ0.4g/dLと0.2g/dLであり、低蛋白血症（0.4g/dL）と低アルブミン血症（0.2g/dL）であった。

2.5. X線撮影と超音波検査

X線撮影と超音波検査では、それぞれ腹部のground glass appearanceとanechoic areaを認めた（図3、図4）。 このため、本症例は腹水であることが確認された。 バベシア症の臨床症状としては，食欲不振，嗜眠，繰り返す発熱，粘膜の蒼白，嘔吐などが挙げられるが，今回の結果から腹水の鑑別診断においてバベシア症を軽視しないことが重要であることが明らかとなった． 腹水の鑑別診断ではバベシア症を軽視しないことが重要であり，腹水のある犬では古典的寄生虫学的診断や分子生物学的診断を行い，バベシア症を除外する必要がある． バベシア属菌は犬の赤血球に感染し溶血性貧血を引き起こす。 B. gibsoniの感染は、大型バベシア属の感染よりも重篤な臨床症状を引き起こすことが知られており、多臓器不全症候群を引き起こす可能性がある。 この犬は重度の貧血を呈し、その他にも重要な臓器に関するパラメータに重度の異常があったため、治療後2日で死亡した。

3 結論

我々の知る限り、これは犬の腹水貯留に関連した最初の症例報告であるB. gibsoni感染に関連して，顕微鏡検査とポリメラーゼ連鎖反応（PCR），腹膜液分析，X線撮影，超音波検査を併用して診断された最初の症例報告である．