ヒト白血球抗原(HLA)は、すべての有核細胞に見られる細胞表面分子である。 各個人はそれぞれ固有の抗原を持ち、半分は親から受け継ぐ。臓器移植の前には、この抗原のタイピングが重要になる。 例えば、HLA B27は強直性脊椎炎などの疾患と密接な関係があることが知られています。
HLA抗原には、HLAクラスIとHLAクラスIIという2つの主要なクラスが認められています。 HLAクラスI抗原(ヒトではA、B、C)は各細胞を「自己」として認識させるのに対し、HLAクラスII抗原(ヒトではDR、DP、DQ)は免疫系を刺激します1。 1つ目は、より一般的な血清学的細胞毒性法で、(血液や脾臓から採取した)リンパ球の小さなサンプルをテラサキプレートに加える方法である。 このプレートには、異なる特異抗体(母体血清または製造されたモノクローナル抗体のいずれか)を含む個々のウェルがある。 クラスIIタイピングに最適な細胞はBリンパ球であり、クラスIタイピングは残りの白血球で行うことができる。 血液や脾臓から必要な細胞を精製するには磁気ビーズを用います。
HLA抗原と特異抗体が結合し、補体が加えられると、そのウェル内の細胞は殺傷されます。 この細胞死を示すウェルのパターンから、どのHLA抗原の組み合わせが元の組織細胞上に存在したかを推測することができる。
HLAタイピングに使用するもう一つの可能性のある方法はフローサイトメトリーで、特に特定の対立遺伝子を調べる場合に用いられる。 ここでは新鮮な有核白血球を、蛍光を発する分子で標識されたモノクローナル抗体に添加する。 抗体に結合した表面抗原を持つ細胞は蛍光を発する。 フローサイトメーターは、蛍光を発する細胞がレーザービームを通過する際に発する光を検出することにより、蛍光細胞を検出する。 フローサイトメトリーでは、細胞を準備し、装置を動かすのに約30分かかる。
第三の方法は、非常に詳細なタイピングが必要な場合-たとえば骨髄移植における正確なマッチングのために、人気を博している。 このプロセスでは、細胞からDNAを抽出し、ポリメラーゼ連鎖反応技術を使ってHLAペプチドをコードする遺伝子を増幅する。 この遺伝子は、IMGT/HLAデータベースを含むいくつかの遺伝子バンクデータベースに保存されている既知のHLAヌクレオチド配列と照合することができる
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