Alai

Bent u nieuwsgierig naar chemiluminescentie-ELISA’s, maar weet u niet precies wat ze zijn, of hoe u ze moet gebruiken? In onze video Een vergelijking van colorimetrische en chemiluminescentie-ELISA’s wordt besproken hoe deze twee soorten assays op elkaar lijken en hoe ze uw laboratoriumtests kunnen verbeteren.

Bekijk onze video om:

• Leer hoe chemiluminescentie en colorimetrische ELISA’s biomarkers meten
• Ontdek verschillende soorten plaatlezers die worden gebruikt om elke assay uit te voeren
• Vergelijk de componenten van elke assay

Een vergelijking van colorimetrische en chemiluminescentie ELISA’s

Video Transcript

Hallo, Ik ben Christi Caillouette van ALPCO! Vandaag zal ik u door een vergelijking van colorimetrische en chemiluminescente enzyme linked immunosorbent assays, ook ELISA’s genoemd, leiden.

Principe van sandwich-ELISA’s

Hoewel er vele soorten assays zijn, zijn de ELISA’s waarnaar ik vandaag zal verwijzen sandwich-tests. Sandwich ELISA’s hebben een op de plaat gecoat antilichaam dat specifiek bindt aan de gewenste analyt. Na een wasstap worden een detectie-antilichaam en een enzymlabel toegevoegd, die zich aan de analyt binden. Een substraat wordt toegevoegd om een reactie in de wells op te wekken. Afhankelijk van het type assay wordt kleur of licht geproduceerd. Deze reactie kan worden gemeten met een plaatuitleesapparaat. De mate van kleurverandering of lichtemissie geeft de hoeveelheid analyt in het monster aan.

Meten van onbekende concentraties van biomarkers

Zowel colorimetrische als chemiluminescente bepalingen maken gebruik van bekende standaards om een standaardcurve te genereren voor het meten van de onbekende concentratie van een analyt in monsters. Afhankelijk van de kit wordt dit bereikt met behulp van softwareprogramma’s met logistische curve fit-algoritmen met 4 of 5 parameters. Beide soorten kits geven de gebruiker metingen van de analyt op een zeer vergelijkbare manier.

Uitvoer van colorimetrische ELISA’s

Colorimetrische ELISA’s vereisen een standaard microplaataflezer voor het detecteren van de kleurveranderingsreactie tussen het enzymlabel en het substraat. De lezer stuurt een golflengte, meestal 450 nm, door elke well om de optische dichtheid, of “OD”, van de monsters te bepalen. Afhankelijk van de plaatuitlezer liggen de OD-waarden tussen 0 en 4 met een duizendste decimaal. De OD-aflezingen worden beperkt door de capaciteit van de spectrofotometer.

Uitvoer van chemiluminescentie-ELISA’s

Chemiluminescentie-ELISA’s vereisen een microplaatlezer die de luminescentie kan meten om de lichtreactie tussen het enzymlabel en het substraat te detecteren. Het licht van de reactie in de wells wordt via een glasvezelkabel doorgegeven aan een fotomultiplicator in de lezer die relatieve lichteenheden of “RLU’s” produceert. Afhankelijk van de plaatuitlezer kunnen de RLU’s variëren van honderden tot miljoenen. Deze spreiding van eenheden biedt gebruikers een betere analytische gevoeligheid en een breder dynamisch bereik door meer scheiding tussen punten en vermindert de beperkingen van optische dichtheidsaflezingen van een standaard microplaatlezer.

Colorimetrische vs. chemiluminescentie-ELISA’s

Nu ga ik u laten zien wat er over het algemeen in onze colorimetrische en chemiluminescentie-ELISA-kitdozen zit en hoe deze kits slechts in geringe mate van elkaar verschillen. Ik zal u ALPCO’s colorimetrische humane insuline ELISA en onze STELLUX Chemi Active GLP-1 (7-36) amide ELISA laten zien.

Colorimetric Human Inuslin ELISA Components

Eerst beginnen we met ALPCO’s colorimetrische humane insuline ELISA. In deze colorimetrische assay ontvangt u:

• 96 wells microtiterplaat- de plaat is helder om OD metingen van de kleur in de plaat mogelijk te maken
• Nul standaard
• Standaarden, A tot en met E – elke injectieflacon bevat bekende waarden van insuline om de standaard curve vast te stellen
• Controles – bevat bekende waarden van insuline voor kwaliteitscontrole.
• Enzymgelabeld detectieantilichaam
• Wasbufferconcentraat
• TMB-substraat – dat tijdens de incubatie de putjes blauw kleurt.
• Stopoplossing – die wordt toegevoegd om de kleurveranderingsreactie in de wells te stoppen, waardoor de wells geel worden.
• En plaatafdichtingsmiddelen

STELLUX® Chemiluminescentie Actief GLP-1 (7-36) amide ELISA Componenten

Naast hebben we ALPCO’s STELLUX® Chemi Actief GLP-1 (7-36) amide ELISA. In deze chemiluminescentie assay ontvangt u:

• Actieve GLP-1 96 wells microtiterplaat – Merk op dat de chemiplaat zwart is in plaats van transparant. Een zwarte plaat vermindert de interferentie van achtergrondlicht bij het aflezen van de plaat.
• Standaarden
• Controle niveaus
• Assay buffer
• Detector antilichaam
• Detector antilichaam Buffer
• Wasbuffer concentraat
• Streptavidine-HRP – dat werkt als het enzym label.
• Streptavidine-HRP-buffer – die wordt gebruikt om de streptavidine-hrp te verdunnen tot werksterkte.
• Chemiluminescent substraat A
• Chemiluminescent substraat B – die worden gecombineerd om chemiluminescent substraat op werksterkte te maken dat een wisselwerking aangaat met het enzymlabel om de chemiluminescente reactie in elk putje op te wekken.
• Plate sealers

Conclusie

Zoals u ziet, zijn sommige reagentia verschillend tussen colorimetrische en chemiluminescente ELISA’s, maar het principe van elke assay is vergelijkbaar en met beide kunt u de concentratie van onbekende analyten in monsters meten. Of u nu colorimetrische kits gebruikt of geïnteresseerd bent in het uitproberen van onze chemiluminescente assays, wij hebben iets voor u. ALPCO is er om u te helpen de mogelijkheden voor uw laboratorium te onderzoeken. Om ons volledige ELISA-aanbod te bekijken, bezoekt u onze website. We hebben veel geweldige bronnen om u te helpen met uw projecten, dus kijkt u rustig rond.

Bedankt voor het kijken!

Om meer te weten te komen over ALPCO’s producten, kunt u contact opnemen met Robert Somogyi op [email protected].