4.2.1.2 Zichtbare spectrometrische methoden
CBZ en PHT zijn twee AED’s die gelijktijdig worden gebruikt. In dit document wordt een PLS-kalibratiemethode beschreven voor de gelijktijdige spectrofotometrische bepaling van CBZ en PHT in plasma. Binaire standaardmengsels van CBZ en PHT zijn opgelost door toepassing van PLS-1 op hun UV-spectra. Vervolgens werden de binaire standaardoplossingen, verrijkt met plasma, bereid, en na extractie van de drugs werd het overeenkomstige UV-spectrum geanalyseerd door PLS-regressie om de concentratie van de drugs in onbekend plasma te berekenen. Een leave-one-out kruisvalidatieprocedure werd gebruikt om het optimale aantal latente variabelen met PRESS te vinden. Er is ook een HPLC-methode toegepast voor de gelijktijdige bepaling van twee geneesmiddelen in het plasma en in methanol. De gemiddelde terugvinding verkregen met PLS was 98,4 en 98,2 voor CBZ en PHT en die verkregen met HPLC was 100,1 en 101,7, respectievelijk. Hoewel de HPLC-methode beter presteerde dan PLS, bleken de met PLS verkregen resultaten vergelijkbaar met die van de HPLC-methode.
Twee spectrofotometrische methoden worden voorgesteld voor de bepaling van OXC in bulk en in toedieningsvormen, waarbij Folin-Ciocalteu’s fenolreagens (FCP) en 3-methyl-2-benzothiazolinone hydrazine hydrochloride (MBTH) als reagentia worden gebruikt. Bij de eerste methode wordt FCP-reagens toegevoegd aan OXC in alkalisch medium, gevolgd door meting van de extinctie bij 760 nm (methode A), en bij de andere methode wordt een vast volume MBTH toegevoegd na behandeling van OXC met ijzer(III)chloride en meting van de extinctie bij 456 nm (methode B). Bij beide methoden komt de hoeveelheid gevormd chromogeen overeen met de hoeveelheid OXC en de gemeten extinctie bleek lineair toe te nemen met de concentratie OXC, hetgeen wordt bevestigd door de correlatiecoëfficiënten van 0,9985 en 0,9984 voor respectievelijk methode A en methode B. De systemen gehoorzamen aan de wet van Beer voor 5-30 en 10-50 μg/mL voor respectievelijk methode A en methode B. De schijnbare molaire extinctiecoëfficiënt is berekend op 8,06 × 103 en 3,126 × 103 L/mol/cm voor respectievelijk methode A en methode B. De LOD en LOQ werden berekend op 1,6 en 5 μg/mL voor methode A en 3 en 10 μg/mL voor methode B. De inter- en intraday imprecisies van de methoden bleken te liggen in het bereik van 1,1-1,7% en 0,9-1,1% voor methode A, en 1,1-1,9% en 0,6-0,9% voor methode B. De nauwkeurigheid lag tussen 98,9-99,7% en 99,3-100,1% voor respectievelijk methode A en methode B. Er werden geen interferenties waargenomen van gebruikelijke farmaceutische hulpstoffen. De methoden werden met succes toegepast op de bepaling van OXC in tabletpreparaten.
CBZ ondergaat enzymatische biotransformatie door epoxidatie met de vorming van zijn metaboliet, CBZ-E. Er is een eenvoudige chemometrisch ondersteunde spectrofotometrische methode voorgesteld voor de gelijktijdige bepaling van CBZ en CBZ-E in plasma. Er werd een vloeistofextractieprocedure toegepast om de analyten uit plasma te scheiden, en de UV-absorptiespectra van de resulterende oplossingen werden onderworpen aan PLS-regressie. Het optimale aantal latente PLS-variabelen werd geselecteerd op basis van de PRESS-waarden van de leave-one-out kruisvalidatie. Ter vergelijking werd ook een HPLC-methode gebruikt. De gemiddelde terugvinding voor de analyse van CBZ en CBZ-E in synthetische mengsels bedroeg respectievelijk 102,57 (± 0,25)% en 103,00 (± 0,09)% voor PLS en 99,40 (± 0,15)% en 102,20 (± 0,02)%. De concentraties van CBZ en CBZ-E werden ook bepaald bij vijf patiënten met behulp van de PLS- en HPLC-methoden. Uit de resultaten bleek dat de gegevens verkregen met PLS vergelijkbaar waren met die verkregen met de HPLC-methode.
Er werd een selectieve en gevoelige methode ontwikkeld voor de bepaling van de anticonvulsiva vigabatrine (I) (CAS 60643-86-9) en gabapentine (II) (CAS 60142-96-3). De methode is gebaseerd op de condensatie van de geneesmiddelen via hun aminogroepen met acetylaceton en formaldehyde volgens de Hantzsch-reactie die de sterk fluorescerende dihydropyridinederivaten oplevert. De geelachtig-oranje kleur werd ook spectrofotometrisch gemeten bij 410 en 415 nm voor respectievelijk I en II. De absorptie-concentratie plots waren rechtlijnig over het bereik 10-70 en 20-140 μg/mL voor I en II, respectievelijk. De fluorescentie-concentratieplots waren lineair over het bereik van 0,5-10 en 2,5-20 μg/mL met minimale detectiegrenzen (signaal-ruisverhouding = 2) van 0,05 μg/mL (~ 2,1 × 10- 8 mol/l) en 0,1 μg/mL (~ 5,8 × 10- 7 mol/l) voor respectievelijk I en II. De spectrofotometrische methode werd toegepast voor de bepaling van I en II in hun tabletten. De terugvindingspercentages ± SD (n = 6) bedroegen respectievelijk 99,45 ± 0,13 en 98,05 ± 0,53. De spectrofluorimetrische methode werd met succes toegepast op de bepaling van I en II in verrijkte menselijke urine en plasma. De terugvindingspercentages ± SD (n = 5) bedroegen 98,77 ± 0,29 en 98,39 ± 0,53 voor urine en 99,32 ± 0,74 en 98,90 ± 0,96 voor plasma, voor I en II, respectievelijk. Er trad geen interferentie op met de gelijktijdig toegediende geneesmiddelen: valproïnezuur (CAS 99-66-1), difenylhydantoïne (CAS 57-41-0), fenobarbital (CAS 50-06-6), carbamazepine (CAS 298-46-4), clonazepam (CAS 1622-61-3), clobazam (CAS 22316-47-8), of cimetidine (CAS 51481-61-9). Er wordt een voorstel gedaan voor het reactietraject. De voordelen van de voorgestelde methoden ten opzichte van de bestaande methode worden besproken.
Een nabij-infrarood (IR) spectrofotometer, integrerende optiek, en parallelle-vector supercomputer worden gebruikt om een wiskundig model te ontwikkelen dat de oplossnelheid van afzonderlijke intacte tabletten voorspelt uit de nabij-infrarood spectra (r2 = 0,985). Elk tablet kan door de spectrofotometer in minder dan 1 min. niet-destructief worden geanalyseerd. Het model maakt het mogelijk honderden nabij-IR-golflengten te gebruiken bij de bepaling van de oplossnelheid, hetgeen leidt tot grotere nauwkeurigheid.
Een monster van 0,5 ml serum, dat verschillende AED’s bevat, afzonderlijk of in combinatie, werd alkalisch gemaakt, overgoten met isooctaan, en gestoomd in aanwezigheid van KMnO4. De spectra van geoxideerde producten in de organische laag werden opgenomen in het UV-bereik. Geoxideerd fenobarbiton en primidon vertonen geen absorptiepiek; diazepam een delta-max bij 228 nm; fenytoïne bij 247 nm; en carbamazepine bij 247 en 372 nm. Fenobarbiton en diazepam interfereren dus niet met de kwantificering van fenytoïne, maar carbamazepine wel. De bijdrage van carbamazepine bij 247 nm werd berekend uit de absorptie bij 372 nm en de verhouding van de molaire extinctiecoëfficiënten bij de twee golflengten. Dit werd afgetrokken van de totale A247-waarden om de werkelijke waarden door fenytoïne te verkrijgen. Aldus is een methode ontwikkeld voor de gelijktijdige analyse van carbamazepine en fenytoïne in één monster.
Carbamazepine en 5,5-difenylhydantoïne worden gelijktijdig uit 100 tot 200 μL bloed geëxtraheerd met 1,2-dichloorethaan. 5,5-Difenylhydantoïne wordt verwijderd door het in één stap met alkali te wassen. Het dichloorethaan wordt verder gewassen met zuur en vervolgens ingedampt tot droogte. 5,5-Difenylhydantoïne wordt in het alkalisch waswater bepaald met behulp van de benzofenonprocedure; carbamazepine wordt in het gedroogde residu bepaald met behulp van de eerder beschreven 9-methylacridineprocedure. De gecombineerde methode is snel, betrouwbaar en heeft een detectiedrempel van minder dan 0,1 mg/100 ml voor elk geneesmiddel.
Een UV-spectrofotometrische procedure voor de microdeterminatie van carbamazepine in bloed wordt beschreven, die gebaseerd is op de oorspronkelijke 9-methylacridine-methode, voorgesteld door K.H. Beyer, K. Klinge, Arzneim. Forsch. 19 (1969) 1759-1760). Carbamazepine wordt uit bloed geëxtraheerd met dichloormethaan, dat vervolgens wordt gewassen met alkali en zuur. Een aliquot van het extractiemiddel wordt drooggedampt en het residu wordt kort verhit met zoutzuur bij 150°C. Na verwijdering van aspecifieke interferentie met n-heptaan wordt de extinctie van het door zuur gekatalyseerde herschikkingsproduct (9-methylacridine) bepaald bij 258 nm. De resulterende procedure is snel, betrouwbaar, gevoelig en specifiek. Er is 100-200 μl monster nodig voor één enkele bepaling en de detectiedrempel ligt onder 0,1 mg/100 ml. Geconcludeerd wordt dat de methode geschikt is voor klinisch routinegebruik.
Een specifieke directe gaschromatografische methode voor de bepaling van carbamazepine en, semikwantitatief, 10,11-epoxy carbamazepine in serum wordt beschreven. De gemiddelde terugvinding van carbamazepine is 98%, en de fout op duplobepalingen is ± 4%. De methode wordt vergeleken met de klassieke spectrofotometrische methode van Herrmann. In materiaal van 103 patiënten was de gemiddelde serumconcentratie van carbamazepine 25,5 ± 12,8 μmol/L met GLC en 23,0 ± 12,6 μmol/L met spectrofotometrie. Het verschil was zeer significant. Het volume van het bloedmonster is 1/10 van het volume dat nodig is bij spectrofotometrie.