Alai

Trypsine klieft specifiek peptide bindingen aan de C-terminale zijde van lysine en arginine residuen, met uitzondering van -Arg-Pro- en -Lys-Pro- bindingen die normaliter resistent zijn tegen proteolyse. Hier rapporteren we bewijs voor een -Lys-Pro- tryptische splitsing in gemodificeerde oligotuftsinederivaten, Ac-4-NH2) (1), gebruikmakend van hoge-resolutie massaspectrometrie en HPLC als primaire methoden voor de analyse van proteolytische reacties. De proteolytische gevoeligheid van -Lys-Pro- bindingen was sterk afhankelijk van de flankerende residuen, en de flexibiliteit van de peptide ruggengraat zou een eerste vereiste kunnen zijn voor deze ongewone splitsing. Terwijl -Lys-Gly- bindingen in 1 snel gekliefd werden, verhinderde de modificatie van deze Lys residuen door de aanhechting van een ß-amyloid(4-10) epitoop om -Lys(X)-Gly derivaten te bekomen de splitsing van deze binding, en zorgde voor trypsine splitsing van -Lys-Pro- bindingen, waarbij de weg van deze afbraak onafhankelijk was van het type Lys-Nε-zijketens (acetylgroep, aminozuur, peptide). Substitutie van de Lys-residuen door Ala op de P′2-posities verminderde de tryptische splitsing, terwijl vervanging van de volumineuze zijketen van Thr op de P2-posities de splitsing van -Lys-Pro- bindingen sterk deed toenemen. Circulaire dichroïsme (CD) gegevens van de gemodificeerde oligotuftsin derivaten zijn in overeenstemming met verhoogde flexibiliteit van de peptide ruggengraat, als een voorwaarde voor verhoogde gevoeligheid voor splitsing van -Lys-Pro- bindingen. Deze resultaten van oligotuftsinederivaten zouden implicaties kunnen hebben voor de proteolytische afbraak van doelpeptiden die specifieke conformatievoorwaarden vereisen. Copyright © 2007 European Peptide Society en John Wiley & Sons, Ltd.