Abstract
Een vijf jaar oude mannelijke Labrador werd gepresenteerd aan Teaching Veterinary Clinics van GADVASU met als primaire klachten een opgezwollen buik, koorts, en anorexia. De hond bleek suf te zijn met verhoogde rectale temperatuur (104°F), hartslag (148 per minuut), en ademhalingsfrequentie (58 per minuut). Onderzoek van het bloeduitstrijkje en PCR-test toonden aan dat de hond positief was voor Babesia gibsoni. Verhoogde bilirubine, alanine-aminotransferase (ALT), alkalische fosfatase (ALP), creatinine, bloedureumstikstof (BUN), totaal aantal leukocyten, hypoalbuminemie en hypoproteïnemie waren hematobiochemische veranderingen. Radiografie en ultrasonografie toonden respectievelijk een matglazen uiterlijk en een anechoïsch gebied van het abdomen.
1. Inleiding
Canine babesiosis is een van de belangrijkste levensbedreigende door teken overgedragen hemoprotozoaire ziekten van honden veroorzaakt door intra-erythrocytaire protozoaire parasieten van het geslacht Babesia die wereldwijd en in verschillende delen van India, waaronder de deelstaat Punjab, worden gemeld. De variabele prevalentie van zowel B. canis als B. gibsoni is waargenomen in India (0,66 tot 21,7%) en in Ludhiana werd de prevalentie genoteerd op 5,26% . De pathogenese van babesiose bij de hond varieert in verschillende regio’s, mogelijk als gevolg van variatie in de pathogeniciteit van verschillende stammen van Babesia-soorten in verschillende ecologische omstandigheden. De ernst van babesiose hangt samen met de mate van replicatie van de parasiet in de rode bloedcellen van de gastheer en de daaropvolgende cellysis. Een grote verscheidenheid van klinische verschijnselen zoals anorexie, lethargie, icterus, braken en duidelijk verlies van lichaamsconditie is waargenomen samen met variabele klinisch-pathologische afwijkingen waaronder hemoglobinurie, hypoglykemie, zuur-basestoornissen, azotemie, en verhogingen in de niveaus van leverenzymen . Verder veroorzaakt B. gibsoni regeneratieve hemolytische anemie en trombocytopenie . Sferocytose en positieve directe Coombs-testresultaten wijzen op een immunomediate component. Trombocytopenie is een frequente bevinding. In deze mededeling beschrijven wij de klinisch-hematobiochemische, radiografische en ultrasonografische waarnemingen in een zeer zeldzaam geval van peritoneale effusie ten gevolge van het pathogene effect van Babesia gibsoni infectie.
2. Casusbeschrijving
Een vijf jaar oude mannelijke Labradorhond werd gepresenteerd aan het Veterinary Teaching Hospital van de Guru Angad Dev Veterinary and Animal Sciences University, Ludhiana, juli, 2013, met abdominale distensie en aanhoudende anorexie gedurende de laatste twee dagen. De hond had een slechte lichaamsconditie. Tijdens het lichamelijk onderzoek was de hond pyretisch (104°F), met een hartslag van 148 slagen per minuut en een ademhalingsfrequentie van 58 ademhalingen per minuut. De slijmvliezen waren bleek. De teken werden van de hond verwijderd en geïdentificeerd als Rhipicephalus sanguineus.
Bloedmonsters werden ingestuurd voor hematologische en serum biochemische analyse.
2.1. Hematologic and Biochemical Analysis
Hematologic and biochemical analysis revealed moderate to severe anaemia with elevated bilirubin, alanine amino transferase (ALT), alkaline phosphatase (ALP), creatinine, blood urea nitrogen (BUN), total leucocyte count, hypoalbuminaemia, and hypoproteinaemia were haematobiochemical alterations (Table 1). Chronische leverinsufficiëntie in het geval van babesiose kan leiden tot hypoalbuminemie. Hematologische parameters suggereerden dat de hond bloedparasieten of andere relevante infectieziekten zou kunnen hebben. De pathogenese van anemie lijkt gepaard te gaan met niet-hemolytische en hemolytische mechanismen. Hemolyse kan veroorzaakt worden door proteasen geproduceerd door de binnendringende parasiet, een immuunreactie tegen geparasiteerde cellen, en/of oxidatieve schade aan erytrocyten. MCV, MCH, en MCHC waarden waren net op de grens van het normale bereik (Tabel 1) wat aangeeft dat de anemie niet te wijten was aan ijzertekort, maar MCV en MCHC falen vaak om de verschillende patronen van anemie correct te onderscheiden. De meest voorkomende afwijking was trombocytopenie. De reden voor trombocytopenie bij babesiose kan te wijten zijn aan sekwestratie van bloedplaatjes in de milt of aan immuun gemedieerde vernietiging van bloedplaatjes en de ontwikkeling van gedissemineerde intravasale stolling.
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Kahn et al. . | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
2.2. Parasitologisch onderzoek
Om een onderscheid te kunnen maken tussen deze mogelijkheden, werd microscopisch onderzoek van met Giemsa gekleurde dunne bloeduitstrijkjes van de oorschelp uitgevoerd onder een olie-immersielens (100x). Uit het onderzoek bleek de aanwezigheid van ringvormige, ovale, parachute- en komma-achtige organismen met een diameter van ongeveer 1-3 μm in de erytrocyten (figuur 1). Op basis van de grootte van de intracellulaire parasieten in dit geval, werd de mogelijkheid overwogen dat de hond besmet was met kleine Babesia spp., vooral met B. gibsoni. De mate van parasitemie, berekend als het percentage geïnfecteerde rode bloedcellen door 1000 rode bloedcellen te tellen, was 10,5%. De op de hond aanwezige teken werden geïdentificeerd als Rhipicephalus sanguineus. Het feit dat B. gibsoni door microscopie niet kan worden onderscheiden van andere isolaten van kleine hondenteken, was voor ons aanleiding om voor de definitieve diagnose PCR uit te voeren met gebruikmaking van B. gibsoni specifieke primer .
2.3. DNA-extractie
DNA uit volbloed (300 μL) werd geëxtraheerd met de DNA-zuiveringskit (QIAGEN, GmbH, Duitsland) volgens de instructies van de fabrikant.
Een primerset bestaande uit een voorwaartse primer (Gib599 F): 5′CTCGGCTTGCCTTGTC3′ en een achterwaartse primer (Gib1270R): 5′GCCGAAACTGAAATAACGGC 3′ werd gebruikt voor de amplificatie van een 671 bp fragment van het 18 S rRNA-gengebied dat specifiek is voor B. gibsoni . De PCR-mix bestond uit 1X molaire concentratie van 12,5 µL mastermix (1X QIAGEN PCR-buffer, 2,5 eenheden Taq DNA-polymerase, 200 µM van elk dNTP, en 1,5 mM MgCl2), 1,5 µL van 10 pmol elk van de respectieve primers, en 5 µL sjabloon als DNA-bron.
Na een initiële denaturatie bij 95°C gedurende 5 min werden 30 cycli van denaturatie (94°C gedurende 45 sec), annealing (57°C gedurende 1 min), en extensie (72°C gedurende 1 min) uitgevoerd en de laatste extensie werd uitgevoerd bij 72°C gedurende 8 min. Een negatieve monstercontrole (alleen DNA van hondenbloed) en een negatieve DNA-controle (Milli-Q water ter vervanging van DNA) werden in de PCR-reactie opgenomen. De PCR-producten werden op 1,5% agarose gel gerund en met ethidiumbromide gekleurd. De grootte van het geamplificeerde PCR-product was 671 bp (figuur 2).
2.4. Peritoneale vochtanalyse
Op basis van abdominale distensie werd ascites vermoed. Een peritoneaal tabblad werd uitgevoerd en 2 mL helder peritoneaal vocht werd verzameld. Peritoneale vloeistof werd typisch onderzocht op kleur, troebelheid, totaal eiwit, en albumine concentratie. De vloeistof was transparant en helder. Totaal eiwit en albumine waren respectievelijk 0,4 g/dL en 0,2 g/dL, wat wijst op hypoproteïnemie (0,4 g/dL) en hypoalbuminemie (0,2 g/dL).
2.5. Radiografie en ultrasonografie
Radiografie en ultrasonografie toonden respectievelijk een matglazen uiterlijk en een anechoïsch gebied van het abdomen (figuren 3 en 4). Het geval werd dus bevestigd als zijnde ascites. Hoewel de meest voorkomende klinische tekenen van babesiose anorexia, lethargie, recidiverende koorts, bleke slijmvliezen en emesis zijn, toonden onze bevindingen aan dat het belangrijk is babesiose niet te verwaarlozen in de differentiële diagnose van ascites. Honden met ascites moeten worden onderworpen aan een klassieke parasitologische of moleculaire diagnose om babesiose uit te sluiten. Babesia organismen infecteren de erytrocyten van honden, wat leidt tot hemolytische anemie. Infectie met B. gibsoni veroorzaakt ernstiger klinische verschijnselen dan infectie met grote Babesia spp. en kan leiden tot meervoudige orgaansyndromen. Aangezien de hond ernstig anemisch was met andere ernstige afwijkingen in parameters die verband houden met vitale organen, overleed hij binnen twee dagen na de behandeling.
3. Conclusie
Voor zover wij weten is dit het eerste geval van peritoneale effusie bij een hond in verband met B. gibsoni infectie gediagnosticeerd door microscopisch onderzoek en polymerase kettingreactie (PCR) in combinatie met peritoneale vloeistof analyse, radiografie, en ultrasonografie.
Conflict of Interests
De auteurs verklaren dat er geen belangenconflict is met betrekking tot de publicatie van dit artikel.