Effect of Digibind™ and DigiFab™ on Serum Digoxin Measurement
Digibind i DigiFab są fragmentami Fab przeciwciała antydigoksyny stosowanymi w leczeniu zagrażającego życiu ostrego przedawkowania digoksyny. Digibind, pierwsze antidotum dostępne w leczeniu przedawkowania digoksyny, jest dostępne w Stanach Zjednoczonych od 1986 roku (Glaxo Wellcome Inc.), a ostatnio, w 2001 roku, Amerykańska Agencja ds. Żywności i Leków (FDA) zatwierdziła DigiFab do leczenia przedawkowania digoksyny. Digibind jest wytwarzany poprzez immunizację owiec koniugatem digoksyny z ludzką albuminą, po czym następuje izolacja przeciwciała specyficznego dla digoksyny z krwi i trawienie papainą w celu wytworzenia fragmentu Fab przeciwciała. Fragment Fab przeciwciała antydigoksynowego jest następnie dalej oczyszczany. DigiFab jest przygotowywany przez wstrzykiwanie owcom digoksyny-dikarboksymetyloaminy, analogu digoksyny, po czym następuje izolacja przeciwciała antydigoksyny z krwi, trawienie papainą, a następnie oczyszczanie fragmentu Fab przy użyciu chromatografii powinowactwa. Masa cząsteczkowa preparatu DigiFab (46 000 Da) jest podobna do masy cząsteczkowej preparatu Digibind (46 200 Da). Zwykle dawka produktu Digibind jest 80-krotnie większa od obciążenia organizmu digoksyną; jeśli nie jest znana ani przyjęta dawka, ani stężenie digoksyny w osoczu, wówczas zwykle wstrzykuje się pacjentowi 380 mg produktu Digibind. Okres półtrwania fragmentu Fab u ludzi wynosi 12-20 godzin, ale może być wydłużony u pacjentów z niewydolnością nerek. Digibind i DigiFab są równoważne pod względem zdolności wiązania digoksyny. Ponadto oba związki są zdolne do wiązania endogennego DLIS .
Oprócz digoksyny, Digibind wykazuje zdolność neutralizowania kardenolidu, który jest glikozylowany w pozycji 3 (digitoksyna i ouabaina) z podobną siłą, niezależnie od substytucji w części steroidowej cząsteczki. Dlatego Digibind jest skuteczny w leczeniu zatruć roślinnych naparstnicą, która zawiera różne glikozydy nasercowe. Rich i wsp. wykazali skuteczne leczenie 22-letniego mężczyzny produktem Digibind, który został celowo przedawkowany domowej roboty ekstraktem z naparstnicy. Ponadto Digibind jest w stanie neutralizować zarówno glikozydy nasercowe, jak i odpowiednie aglikony – na przykład oleandrynę, aktywny składnik wyciągu z oleandra – i jest skuteczny w leczeniu zagrażającej życiu toksyczności oleandra. Ponadto, produkt Digibind może być skuteczny w leczeniu przedawkowania Chan Su – Chan Su jest chińskim lekiem zawierającym bufalinę i inne kardioaktywne steroidy z klasy bufadienolidów – ale skuteczność produktu Digibind w leczeniu zatrucia Chan Su jest słaba w porównaniu z jego skutecznością w leczeniu przedawkowania digoksyny. Wynika to ze słabej swoistości preparatu Digibind w neutralizowaniu cynobufaginy i cynobufatoliny, które są również składnikami Chan Su, podobnie jak jad ropuchy .
Obie preparaty Digibind i DigiFab zakłócają pomiar stężenia digoksyny w surowicy za pomocą testów immunologicznych. Wielkość interferencji zależy od projektu testu i specyficzności przeciwciała antydigoksyny. Mikrocząsteczkowe enzymatyczne oznaczenie immunologiczne digoksyny (MEIA na analizatorze AxSYM, Abbott Laboratories, Abbott Park, IL), jak również oznaczenie digoksyny Stratus wykazały wartości digoksyny, które były wyższe niż zmierzone stężenie wolnej digoksyny w obecności produktu Digibind . McMillin i wsp. badali wpływ Digibind i DigiFab na 13 różnych testów immunologicznych do oznaczania digoksyny. Dodatnie interferencje w obecności i nieobecności digoksyny obserwowano w przypadku Digibind i DigiFab, chociaż wielkość interferencji była nieco mniejsza w przypadku DigiFab. Wielkość interferencji różniła się znacząco dla każdej metody, podczas gdy metody IMMULITE®, Vitros®, Dimension® i Access® digoksyny wykazywały największą interferencję. Minimalne interferencje obserwowano w metodach FPIA, MEIA, SYNCHRON i CEDIA. Autorzy komentują również, że monitorowanie wolnej digoksyny (w ultrafiltracie bezbiałkowym) eliminuje te zakłócenia, ponieważ zarówno Digibind, jak i DigiFab, ze względu na ich przybliżoną masę cząsteczkową 46 000 Da, są nieobecne w ultrafiltracie bezbiałkowym. Digibind i DigiFab nie zakłócają pomiaru digoksyny w surowicy przy użyciu metody chromatograficznej, takiej jak chromatografia cieczowa połączona ze spektrometrią mas. Kanno i wsp. opisali metodę jednoczesnej analizy digoksyny, digitoksyny i związków pokrewnych przy użyciu chromatografii cieczowej połączonej z tandemową spektrometrią mas. Oiestad i wsp. również opisali metodę chromatografii cieczowej z tandemową spektrometrią mas (LC-MS/MS) dla digoksyny i digitoksyny w krwi pełnej w przypadkach autopsyjnych. Próbki przygotowywano metodą ekstrakcji ciecz-ciecz przy użyciu octanu etylu/heptanu/dichlorometanu (3 : 1 : 1 objętościowo), a rozdziały chromatograficzne uzyskiwano przy użyciu kolumny z odwróconą fazą C-18. Detekcję masową przeprowadzono metodą elektrospray w trybie jonów dodatnich na adduktach amonowych, a jako wzorzec wewnętrzny zastosowano deuterowaną digoksynę (digoksynę-d3). Metody chromatograficzne są jednak rzadko stosowane w laboratoriach klinicznych, chociaż laboratoria toksykologii sądowej i laboratoria kryminalistyczne zajmujące się badaniem zgonów są wyposażone w takie analizatory.