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Você está curioso sobre os ELISAs de quimioluminescência, mas não sabe exatamente o que são, ou como usá-los? Nosso vídeo A Comparison of Colorimetric and Chemiluminescence ELISAs discute como esses dois tipos de ensaios são semelhantes, e como eles podem melhorar seus testes de laboratório.

Veja o nosso vídeo para:

• Aprenda como os ELISAs colorimétricos e quimioluminescência medem biomarcadores
• Explore diferentes tipos de leitores de placas usados para executar cada ensaio
• Compare os componentes de cada ensaio

Uma comparação de ELISAs colorimétricos e quimioluminescência

Vídeo Transcript

Olá, Eu sou Christi Caillouette da ALPCO! Hoje, vou acompanhá-los através de uma comparação de ensaios imunossorbentes ligados a enzimas colorimétricas e quimioluminescentes, também chamados ELISAs.

Princípio de ELISAs de sanduíche

Embora existam muitos tipos de ensaios, os ELISAs a que hoje me referirei são ensaios de sanduíche. Os ELISAs sanduíche têm um anticorpo revestido na placa que se liga especificamente ao analito desejado. Após um passo de lavagem, um anticorpo de detecção e uma etiqueta enzimática são adicionados que se ligam à substância a analisar. É adicionado um substrato para gerar uma reacção nos poços. Dependendo do tipo de ensaio, ou é produzida cor ou luz. Esta reacção pode ser medida por um leitor de placas. O grau de mudança de cor ou luz emitida indica a quantidade de substância a analisar na amostra.

Medir Concentrações Desconhecidas de Biomarcadores

Both ensaios colorimétricos e quimioluminescentes usam padrões conhecidos para gerar uma curva padrão para medir a concentração desconhecida de uma substância a analisar nas amostras. Dependendo do kit, isto é conseguido usando programas de software com 4 ou 5 algoritmos de ajuste de curvas logísticas de parâmetros. Ambos os tipos de kits dão ao utilizador medições da substância a analisar de uma forma muito semelhante.

Elisa Colorimétrica

Elisa Colorimétrica requer um leitor de microplaca padrão para detectar a reação de mudança de cor entre o rótulo da enzima e o substrato. O leitor envia um comprimento de onda, tipicamente 450 nm, através de cada poço para determinar a densidade óptica, ou leitura “OD” das amostras. Dependendo do leitor de placas, as leituras de DO fornecidas estão entre 0 e 4 até a milésima casa decimal. As leituras de DO são limitadas pela capacidade do espectrofotômetro.

Eliminar de quimioluminescência ELISAs

Queiluminescência ELISAs requerem um leitor de microplacas capaz de medir a luminescência para detectar a reação de luz entre a etiqueta da enzima e o substrato. A luz emitida pela reacção nos poços é transmitida por um cabo de fibra óptica a um fotomultiplicador no leitor que emite unidades de luz relativa ou “RLUs”. Dependendo do leitor de placas, as RLUs podem variar de centenas a milhões. Esta dispersão de unidades proporciona aos utilizadores uma melhor sensibilidade analítica e uma gama dinâmica mais ampla, dando maior separação entre pontos e reduzindo as limitações das leituras de densidade óptica de um leitor de microplaca padrão.

Colorimétricos vs. Quimioluminescência ELISAs

Agora vou mostrar o que geralmente vem em nossas caixas de kits ELISA colorimétricos e quimioluminescentes e como esses kits são apenas ligeiramente diferentes. Vou mostrar-lhe o ELISA colorimétrico de Insulina Humana colorimétrica da ALPCO e o nosso STELLUX Chemi Active GLP-1 (7-36) amide ELISA.

Colorimétrico de Insulina Humana Componentes ELISA

Primeiro, vamos começar com o ELISA colorimétrico de Insulina Humana colorimétrica da ALPCO. Neste ensaio colorimétrico, receberá:

• 96 microplaca do poço – a placa é transparente para permitir medições de DO da cor na placa
• Padrão Zero
• Padrão, A até E – cada frasco tem valores conhecidos de insulina para estabelecer a curva padrão
• Controlos – contendo valores conhecidos de insulina para controle de qualidade.

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• Anticorpo de detecção marcado com enzima
• Tampão de lavagem concentrado
• SubstratoTMB – que, durante a incubação, muda o azul dos poços.

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• Solução de paragem – que é adicionada para parar a reacção de mudança de cor nos poços, tornando os poços amarelos.

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• E seladores de placa

STELLUX® Chemiluminescência Activa GLP-1 (7-36) amide ELISA Componentes

Próximo, temos o STELLUX® Chemi Active GLP-1 (7-36) amide ELISA da ALPCO. Neste ensaio quimioluminescente, receberá:

• Active GLP-1 96 microplaca de poço – Repare como a placa quimioluminescente é preta em vez de transparente. Uma placa preta reduz a interferência da luz de fundo quando a placa é lida.
• Padrão
• Níveis de controlo
• Bampão de ensaio
• Anticorpo detector
• Bampão de detecção de anticorpos
• Bampão de lavagem concentrado
• Streptavidin-HRP – que funciona como a etiqueta enzimática.

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• Tampão de Streptavidin-HRP – que é usado para diluir o streptavidin-hrp à força de trabalho.
• Substrato quimioluminescente A
• Substrato quimioluminescente B – que são combinados para fazer força de trabalho Substrato quimioluminescente que interage com o rótulo da enzima para gerar a reacção quimioluminescente em cada poço.
• Seladores de comprimidos

Conclusão

Como pode ver, alguns dos reagentes são diferentes entre ELISAs colorimétricos e quimioluminescentes, mas o princípio de cada ensaio é semelhante e ambos permitem medir a concentração de analitos desconhecidos nas amostras. Quer você use kits colorimétricos ou esteja interessado em experimentar nossos ensaios quimioluminescentes, nós temos algo para você. ALPCO está aqui para o ajudar a explorar as possibilidades do seu laboratório. Para ver as nossas ofertas ELISA completas, visite o nosso website. Temos muitos recursos ótimos para ajudá-lo com seus projetos, então, por favor, dê uma olhada ao redor.

Obrigado por assistir!

Para saber mais sobre os produtos da ALPCO, por favor, entre em contato com Robert Somogyi em [email protected].