4.2.1.2 Visible Spectrometric Methods
CBZ e PHT são dois DEA que são usados simultaneamente. Neste trabalho, um método de calibração PLS é descrito para a determinação espectrofotométrica simultânea de CBZ e PHT em plasma. As misturas binárias padrão de CBZ e PHT foram resolvidas pela aplicação de PLS-1 aos seus espectros de UV. Em seguida, foram preparadas as soluções padrão binárias, com picos para plasma, e após a extração dos fármacos, seu espectro UV correspondente foi analisado por regressão de PLS para calcular a concentração dos fármacos em plasma desconhecido. Um procedimento de validação cruzada de leave-one-out foi empregado para encontrar o número ótimo de variáveis latentes usando o PRESS. Também foi aplicado um método HPLC para determinação simultânea de dois fármacos no plasma e no metanol. As recuperações médias obtidas por PLS foram 98,4 e 98,2 para CBZ e PHT e as obtidas por HPLC foram 100,1 e 101,7, respectivamente. Embora o método HPLC tenha apresentado melhor desempenho que o PLS, verificou-se que os resultados obtidos pelo PLS foram comparáveis aos obtidos pelo método HPLC .
Dois métodos espectrofotométricos são propostos para o ensaio de OXC nas formas a granel e de dosagem utilizando como reagentes o fenol de Folin-Ciocalteu (FCP) e o cloridrato de 3-metil-2-benzotiazolinona hidrazina (MBTH). O primeiro método envolve a adição de reagente FCP ao OXC em meio alcalino seguido pela medição da absorvância a 760 nm (método A), e o outro envolve a adição de um volume fixo de MBTH após tratamento de OXC com cloreto férrico e medição da absorvância a 456 nm (método B). Em ambos os métodos, a quantidade de cromogénio formado corresponde à quantidade de OXC e a absorvância medida aumentou linearmente com a concentração de OXC, o que é corroborado pelos coeficientes de correlação de 0,9985 e 0,9984 para os métodos A e B, respectivamente. Os sistemas obedecem à lei de Beer para 5-30 e 10-50 μg/mL para os métodos A e B, respectivamente. A absortividade molar aparente foi calculada em 8,06 × 103 e 3,126 × 103 L/mol/cm para os métodos A e B, respectivamente. O LOD e LOQ foram calculados para ser 1,6 e 5 μg/mL para o método A e 3 e 10 μg/mL para o método B. As imprecisões inter e intradiárias dos métodos foram encontradas na faixa de 1,1-1,7% e 0,9-1,1% para o método A, e 1,1-1,9% e 0,6-0,9% para o método B. A precisão variou entre 98,9-99,7% e 99,3-100,1% para os métodos A e B, respectivamente. Não foi observada interferência de excipientes farmacêuticos comuns. Os métodos foram aplicados com sucesso no ensaio de OXC em preparações de comprimidos .
CBZ sofre biotransformação enzimática através da epoxidação com a formação de seu metabólito, CBZ-E. Um método espectrofotométrico simples de quimiometria assistida foi proposto para a determinação simultânea de CBZ e CBZ-E em plasma. Um procedimento de extração líquida foi operado para separar os analitos do plasma, e os espectros de absorção de UV das soluções resultantes foram submetidos à regressão do PLS. O número ótimo de variáveis latentes de PLS foi selecionado de acordo com os valores de PRESS da validação cruzada de leave-one-out. Um método de HPLC também foi utilizado para comparação. As respectivas recuperações médias para análise de CBZ e CBZ-E em misturas sintéticas foram 102,57 (± 0,25)% e 103,00 (± 0,09)% para PLS e 99,40 (± 0,15)% e 102,20 (± 0,02)%. As concentrações de CBZ e CBZ-E também foram determinadas em cinco pacientes usando os métodos PLS e HPLC. Os resultados mostraram que os dados obtidos pela PLS foram comparáveis aos obtidos pelo método HPLC .
Foi desenvolvido um método seletivo e sensível para a determinação dos anticonvulsivos vigabatrina (I) (CAS 60643-86-9) e gabapentina (II) (CAS 60142-96-3). O método é baseado na condensação dos fármacos através de seus aminogrupos com acetilacetona e formaldeído de acordo com a reação Hantzsch, produzindo os derivados de dihidropiridina altamente fluorescentes. A cor amarelo-alaranjada também foi medida espectrofotometricamente a 410 e 415 nm para I e II, respectivamente. As parcelas de absorção-concentração foram rectilíneas nas faixas 10-70 e 20-140 μg/mL para I e II, respectivamente. Quanto às parcelas de fluorescência-concentração, foram lineares nos intervalos 0,5-10 e 2,5-20 μg/mL com limites mínimos de detecção (S/N = 2) de 0,05 μg/mL (~ 2,1 × 10- 8 mol/L) e 0,1 μg/mL (~ 5,8 × 10- 7 mol/L) para I e II, respectivamente. O método espectrofotométrico foi aplicado para a determinação de I e II em seus comprimidos. As recuperações percentuais ± DP (n = 6) foram de 99,45 ± 0,13 e 98,05 ± 0,53, respectivamente. O método espectrofluorimétrico foi aplicado com sucesso na determinação de I e II em urina e plasma humanos com picos. A % de recuperações ± SD (n = 5) foram 98,77 ± 0,29 e 98,39 ± 0,53 para urina e 99,32 ± 0,74 e 98,90 ± 0,96 para plasma, para I e II, respectivamente. Nenhuma interferência foi encontrada com as drogas coadministradas: ácido valpróico (CAS 99-66-1), difenilidantoína (CAS 57-41-0), fenobarbital (CAS 50-06-6), carbamazepina (CAS 298-46-4), clonazepam (CAS 1622-61-3), clobazam (CAS 22316-47-8), ou cimetidina (CAS 51481-61-9). Uma proposta da via de reação é sugerida. As vantagens dos métodos propostos em relação ao método existente são discutidas .
Um espectrofotômetro quase infravermelho (IR), integrando óptica, e supercomputador de vetor paralelo são empregados para desenvolver um modelo matemático que prevê a taxa de dissolução de comprimidos individuais intactos de espectros quase IR (r2 = 0,985). Cada comprimido pode ser analisado de forma não destrutiva pelo espectrofotômetro em menos de 1 min. O modelo permite que centenas de comprimentos de onda próximos ao ar sejam utilizados na determinação da taxa de dissolução, levando ao aumento da precisão .
A amostra de soro 0,5-mL, contendo diferentes DAE, isoladamente ou em combinação, foi feita alcalina, revestida com isooctano, e vaporizada na presença de KMnO4. Os espectros dos produtos oxidados na camada orgânica foram registrados na faixa de UV. A fenobarbitona oxidada e a primidona não apresentam pico de absorção; diazepam a delta-max a 228 nm; fenitoína a 247 nm; e carbamazepina a 247 e 372 nm. Consequentemente, a fenobarbitona e a diazepam não interferem na quantificação da fenitoína, mas a carbamazepina sim. A contribuição da carbamazepina a 247 nm foi calculada a partir da absorção a 372 nm e da razão dos seus coeficientes de extinção molar nos dois comprimentos de onda. Isto foi subtraído dos valores totais de A247 para obter os valores reais devido à fenitoína. Assim, foi desenvolvido um método para análise simultânea de carbamazepina e fenitoína em uma única amostra .
Carbamazepina e 5,5-difenilidantoína são extraídos simultaneamente de 100 a 200 μL sangue com 1,2-dicloroetano. A 5,5-difenilidantoína é removida por uma lavagem de uma etapa em álcali. O dicloroetano é ainda lavado com ácido e depois evaporado até secar. A 5,5-difenilidantoína é determinada na lavagem alcalina por um procedimento de benzofenona; a carbamazepina é determinada no resíduo seco pelo procedimento de 9-metilacridina descrito anteriormente. O método combinado é rápido, confiável e tem um limiar de detecção inferior a 0,1 mg/100 mL para cada droga .
Descreve-se um procedimento espectrofotométrico UV para a microdeterminação da carbamazepina no sangue, que é baseado no método original de 9-metilacridina proposto por K.H. Beyer, K. Klinge, Arzneim. Forsch. 19 (1969) 1759–1760). A carbamazepina é extraída do sangue com diclorometano, que é depois lavado com álcali e ácido. Uma alíquota do extrator é evaporada até secar e o resíduo é aquecido brevemente com ácido clorídrico a 150°C. Após a remoção da interferência não específica com o n-heptano, a absorvância do produto de rearranjo catalisado por ácido (9-metilacridina) é determinada a 258 nm. O procedimento resultante é rápido, confiável, sensível e específico. Requer 100-200 μL amostra para uma única estimativa e tem um limiar de detecção inferior a 0,1 mg/100 mL. Conclui-se que o método é adequado para uso clínico de rotina .
Um método cromatográfico de gás direto específico para determinar carbamazepina e, semiquantitativamente, 10,11-epoxy carbamazepina no soro é descrito. A recuperação média da carbamazepina é de 98% e o erro na determinação de duplicados é de ± 4%. O método é comparado com o método espectrofotométrico clássico de Herrmann. Em material de 103 pacientes, a concentração sérica média de carbamazepina foi de 25,5 ± 12,8 μmol/L com GLC e 23,0 ± 12,6 μmol/L com espectrofotometria. A diferença foi altamente significativa. O volume da amostra de sangue é 1/10 do necessário na espectrofotometria .