Efeito de Digibind™ e DigiFab™ on Serum Digoxin Measurement
Digibind e DigiFab são fragmentos Fab de anticorpos antidigoxina usados no tratamento de uma overdose aguda de digoxina com risco de vida. Digibind, o primeiro antídoto disponível para tratar a overdose de digoxina, está disponível nos Estados Unidos desde 1986 (Glaxo Wellcome Inc.), e mais recentemente, em 2001, a Food and Drug Administration of the United States (FDA) aprovou o DigiFab para tratar a overdose de digoxina. O Digibind é produzido pela imunização de ovinos com conjugado de digoxina e albumina humana, seguido pelo isolamento do anticorpo específico da digoxina da digestão do sangue e papaína para gerar o fragmento Fab do anticorpo. O fragmento Fab do anticorpo antidigoxina é então purificado posteriormente. O DigiFab é preparado injectando carneiros com digoxina dicarboximetilamina, um análogo de digoxina, seguido pelo isolamento do anticorpo antidigoxina do sangue, digestão de papaína, e depois purificação do fragmento Fab usando cromatografia de afinidade. O peso molecular do DigiFab (46 000 Da) é semelhante ao peso molecular do Digibind (46 200 Da). Normalmente a dosagem do Digibind é 80 vezes a carga corporal da digoxina; se não se conhece a dose ingerida nem a concentração de digoxina plasmática, então 380 mg de Digibind são normalmente injectados no paciente. A meia-vida do fragmento de Fab em humanos é de 12-20 horas, mas isto pode ser prolongado em pacientes com insuficiência renal. Digibind e DigiFab são equivalentes na sua capacidade de ligação à digoxina. Além disso, ambos os compostos são capazes de ligar a DLIS endógena .
Além da digoxina, Digibind demonstra a capacidade de neutralizar o cardenolide que é glicosilado na posição 3 (digitoxina e ouabain) com uma potência semelhante, independentemente das substituições na parte esteróide da molécula. Portanto, o Digibind é eficaz no tratamento de intoxicações vegetais com dedaleira, que contém vários glicosídeos cardíacos. Rich et al. demonstraram o tratamento bem sucedido de um homem de 22 anos com Digibind, que sofreu uma overdose intencional com um extrato caseiro de dedaleira. Além disso, o Digibind é capaz de neutralizar tanto os glicosídeos cardíacos como os respectivos aglycons – por exemplo a oleandrina, o componente activo do extracto de oleandro – e é eficaz no tratamento da toxicidade do oleandro, que ameaça a vida. Além disso, o Digibind pode ser eficaz no tratamento da overdose de Chan Su – sendo Chan Su um medicamento chinês contendo bufalina e outros esteróides cardioactivos da classe do bufadienolide – mas a eficácia do Digibind no tratamento do envenenamento por Chan Su é fraca em comparação com a sua eficácia no tratamento da overdose de digoxina. Isto deve-se à fraca especificidade do Digibind em neutralizar a cinobufagina e a cinobufatolina, que também são constituintes do Chan Su, assim como o veneno de sapo .
Both Digibind e DigiFab interferem na medição da digoxina sérica através de imunoensaios. A magnitude da interferência depende do desenho do ensaio e da especificidade do anticorpo antidigoxina. O imunoensaio enzimático de micropartículas de digoxina (MEIA no analisador AxSYM, Abbott Laboratories, Abbott Park, IL) bem como o ensaio de digoxina Stratus demonstraram valores de digoxina superiores à concentração de digoxina livre medida na presença de Digibind . McMillin et al. estudaram o efeito do Digibind e do DigiFab em 13 imunoensaios diferentes de digoxina. A interferência positiva na presença e ausência de digoxina foi observada com Digibind e DigiFab, embora a magnitude da interferência tenha sido um pouco menor com o DigiFab. A magnitude da interferência variou significativamente com cada método, enquanto os métodos IMMULITE®, Vitros®, Dimension® e Access® digoxin mostraram a maior interferência. Foram observadas interferências mínimas com os métodos FPIA, MEIA, SYNCHRON e CEDIA. Os autores também comentaram que o monitoramento da digoxina livre (no ultrafiltrado livre de proteínas) elimina essa interferência, pois tanto o Digibind quanto o DigiFab, devido ao seu peso molecular aproximado de 46 000 Da, estão ausentes no ultrafiltrado livre de proteínas. O Digibind e o DigiFab não interferem na medição da digoxina sérica através de um método cromatográfico, como a cromatografia líquida combinada com a espectrometria de massa. Kanno et al. descreveram um método para análise simultânea de digoxina, digitoxina e compostos relacionados usando cromatografia líquida combinada com espectrometria de massa em tandem . Oiestad et al. também descreveram um método de espectrometria de massa por cromatografia líquida em tandem (LC-MS/MS) para digoxina e digitoxina em sangue total para casos de autópsia. As amostras foram preparadas por extração líquido-líquido usando acetato de etila/heptano/diclorometano (3 : 1 : 1 por volume), e as separações cromatográficas foram obtidas usando uma coluna C-18 de fase reversa. A detecção de massa foi realizada por electrospray de modo iônico positivo em adutos de amônio, e a digoxina deuterada (digoxin-d3) foi usada como padrão interno. Entretanto, métodos cromatográficos são raramente utilizados em laboratórios clínicos, embora laboratórios de toxicologia forense e laboratórios de crime envolvidos em investigações de morte estejam equipados com tais analisadores.