Abstract
Um Labrador macho de cinco anos de idade foi apresentado às Clínicas Veterinárias Didáticas da GADVASU com uma queixa primária de abdômen distendido, febre e anorexia. O cão era baço com temperatura retal elevada (104°F), frequência cardíaca (148 por minuto) e frequência respiratória (58 por minuto). O exame de esfregaço de sangue e o ensaio de PCR revelaram que o cão era positivo para Babesia gibsoni. Bilirrubina elevada, alanina amino transferase (ALT), fosfatase alcalina (ALP), creatinina, nitrogénio ureico no sangue (BUN), contagem total de leucócitos, hipoalbuminaemia e hipoproteinemia foram alterações hematobioquímicas. Radiografia e ultra-sonografia mostraram aspecto de vidro moído e área anecoica do abdome, respectivamente.
1. Introdução
A babesiose canina é uma das mais importantes doenças hemoprotozoárias transmitidas por carrapatos de cães causadas por parasitas protozoários intraerythrocytic do gênero Babesia que são relatadas mundialmente e em várias partes da Índia, incluindo o estado de Punjab. A prevalência variável de B. canis e B. gibsoni tem sido observada na Índia (0,66 a 21,7%) e em Ludhiana a prevalência foi registrada como 5,26%. A patogênese da babesiose canina varia em diferentes regiões, possivelmente devido à variação na patogenicidade de diferentes cepas de espécies de Babesia em várias condições ecológicas . A gravidade da babesiose está relacionada com a extensão da replicação de parasitas nos glóbulos vermelhos do hospedeiro com subsequente lise celular. Uma grande variedade de sinais clínicos como anorexia, letargia, icterícia, vômito e perda acentuada da condição corporal tem sido observada juntamente com anormalidades clinicopatológicas variáveis incluindo hemoglobinúria, hipoglicemia, distúrbios ácido-base, azotemia e elevações nos níveis das enzimas hepáticas . Além disso, B. gibsoni causa anemia hemolítica regenerativa e trombocitopenia. A esferocitose e os resultados positivos do teste directo de Coombs sugerem um componente imunomediário. A trombocitopenia é um achado frequente. Na presente comunicação descrevemos as observações clínico-haematobioquímicas, radiográficas e ultra-sonográficas em um caso muito raro de derrame peritoneal devido ao efeito patogênico da infecção por Babesia gibsoni.
2. Descrição do Caso
Um cão Labrador de cinco anos de idade foi apresentado ao Hospital de Ensino Veterinário da Universidade de Veterinária e Ciências Animais Guru Angad Dev, Ludhiana, julho de 2013, com distensão abdominal e anorexia persistente durante os últimos dois dias. O cão tinha mostrado um mau estado corporal. Durante o exame físico, o cão era piretico (104°F), com um ritmo cardíaco de 148 batimentos por minuto e um ritmo respiratório de 58 respirações por minuto. As membranas mucosas estavam pálidas. As carrapatos foram retirados do cão e identificados como Rhipicephalus sanguineus.
Amostras de sangue foram submetidas para análise hematológica e bioquímica sérica.
2,1. Análise Hematológica e Bioquímica
Análises hematológicas e bioquímicas revelaram anemia moderada a grave com bilirrubina elevada, alanina amino transferase (ALT), fosfatase alcalina (ALP), creatinina, nitrogênio uréico no sangue (BUN), contagem total de leucócitos, hipoalbuminaemia e hipoproteinemia foram alterações hematobioquímicas (Tabela 1). A insuficiência hepática crônica em caso de babesiose poderia levar à hipoalbuminaemia. Os parâmetros hematológicos sugerem que o cão pode ter parasitas sanguíneos ou outras doenças infecciosas relevantes. A patogénese da anemia parece envolver mecanismos não hemolíticos e hemolíticos. A hemólise pode envolver proteases produzidas pelo parasita invasor, uma reação imunológica às células parasitas, e/ou danos oxidativos aos eritrócitos. Os valores de MCV, CHM e CHC estavam no limite da faixa de normalidade (Tabela 1), indicando que a anemia não foi devida à deficiência de ferro, mas o MCV e a CHM não conseguem diferenciar corretamente os vários padrões de anemia. A anormalidade mais comum foi a trombocitopenia. A razão para trombocitopenia na babesiose pode ser devido ao seqüestro de plaquetas no baço ou destruição imune mediada de plaquetas e desenvolvimento de coagulação intravascular disseminada .
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| Kahn et al. . | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
2.2. Exame Parasitológico
Para distinguir entre estas possibilidades, o exame microscópico de esfregaços de sangue finos manchados de Giemsa preparados a partir da margem da orelha foi realizado sob lente de imersão em óleo (100x). O exame revelou a presença de organismos em forma de anel, oval, pára-quedas e semelhantes a vírgulas, cerca de 1-3 μm de diâmetro nos eritrócitos (Figura 1). Com base no tamanho dos parasitas intracelulares neste caso, foi considerada a possibilidade do cão ter sido infectado com Babesia spp. pequena, especialmente com B. gibsoni. O grau de parasitemia, calculado como a percentagem de eritrócitos infectados pela contagem de 1000 eritrócitos, foi de 10,5%. As carrapatos presentes no cão foram identificados como Rhipicephalus sanguineus. O fato de B. gibsoni não poder ser distinguido de outros pequenos isolados caninos babesiais por microscopia nos levou a realizar PCR para diagnóstico final usando o primer específico de B. gibsoni .
2.3. Extracção de ADN
DNA de sangue total (300 μL) foi extraído usando o kit de purificação de ADN (QIAGEN, GmbH, Alemanha) de acordo com as instruções do fabricante.
Um conjunto de primer incluindo primer para a frente (Gib599 F): 5′CTCGGCTACTTGCCTTGTC3′ e primer reverso (Gib1270R): 5′GCCGAAACTGAAATAACGGC 3′ foi usado para amplificar um fragmento de 671 bp da região do gene 18 S rRNA específico para B. gibsoni . A mistura PCR consistiu em 1X concentração molar de 12,5 µL de master mix (1X tampão PCR QIAGEN, 2,5 unidades de Taq DNA polimerase, 200 µM de cada dNTP, e 1,5 mM MgCl2), 1,5 µL de 10 pmol cada um dos respectivos primers, e 5 µL de modelo como fonte de ADN.
Após uma desnaturação inicial a 95°C por 5 min, 30 ciclos de desnaturação (94°C por 45 seg), recozimento (57°C por 1 min), e extensão (72°C por 1 min) foram conduzidos e a extensão final foi realizada a 72°C por 8 min. Na reacção PCR foram incluídos um controlo negativo da amostra (apenas DNA canino do sangue) e um controlo negativo do DNA (Milli-Q água num substituto do DNA). Os produtos PCR foram executados em gel de agarose a 1,5% e corados com brometo de etídeo. O tamanho do produto PCR amplificado foi 671 bp (Figura 2).
2.4. Análise do Fluido Peritoneal
Baseada em ascites de distensão abdominal foi suspeitada. Uma aba peritoneal foi realizada e 2 mL de líquido peritoneal transparente foi coletado. O fluido peritoneal foi examinado tipicamente para cor, turbidez, proteína total, e concentração de albumina. O fluido era transparente e claro. A proteína total e a albumina foram 0,4 g/dL e 0,2 g/dL, respectivamente, indicando hipoproteinemia (0,4 g/dL) e hipoalbuminaemia (0,2 g/dL).
2,5. Radiografia e Ultrassonografia
Radiografia e Ultrassonografia mostraram aspecto de vidro moído e área anecoica do abdômen, respectivamente (Figuras 3 e 4). O caso foi assim confirmado como sendo ascite. Embora os sinais clínicos mais comuns de babesiose incluam anorexia, letargia, febre recorrente, membrana mucosa pálida e emese , nossos achados revelaram que é importante não negligenciar a babesiose no diagnóstico diferencial da ascite. Os cães com ascite devem ser submetidos ao diagnóstico parasitológico ou molecular clássico para excluir a babesiose. Os organismos babásicos infectam os eritrócitos dos cães, levando à anemia hemolítica. A infecção com B. gibsoni é conhecida por causar sinais clínicos mais graves do que a infecção com Babesia spp. grandes e pode resultar em múltiplas síndromes de disfunção orgânica. Como o cão era severamente anêmico com outras anomalias graves em parâmetros relacionados a órgãos vitais, morreu dentro de dois dias após o tratamento.
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3. Conclusão
Pelo que sabemos, este é o primeiro relato de caso de derrame peritoneal em um cão associado a B. gibsoni diagnosticada por exame microscópico e reação em cadeia da polimerase (PCR) em combinação com análise de fluido peritoneal, radiografia e ultra-sonografia.
Conflito de Interesses
Os autores declaram não haver conflito de interesses em relação à publicação deste trabalho.