Alai

A exigência de vetores bicistrônicos ou multicistrônicos confiáveis em sistemas de fornecimento de genes está na vanguarda da tecnologia bio/biomédica. Um método que forneça uma co-expressão eficiente de múltiplas proteínas heterólogas seria valioso para muitas aplicações, especialmente na ciência médica para o tratamento de vários tipos de doenças. Neste estudo, desenhamos e construímos um vetor de expressão bicistrônica usando um peptídeo 2A autolimpante derivado de um vírus do inseto Thosea asigna (T2A). Este apresentou a clivagem mais eficiente da sequência de 2A. Duas versões do vetor T2A foram construídas através da troca das sequências de DNA codificando as proteínas de interesse, a proteína N-myristoylated e a proteína nuclear-homing, a montante e a jusante do linker 2A, respectivamente. Nossos resultados mostraram que níveis similares de expressão do mRNA foram encontrados e 100% da eficiência de clivagem do T2A foi observada. No entanto, também relatamos a evidência clara de que a proteína N-miristoilada não pode ser colocada a jusante da seqüência 2A. Como o produto protéico não consegue translocar para a membrana plasmática devido ao processo de miristoilação alterado, a posição do gene do vetor baseado em T2A é significativa para a localização subcelular da proteína N-miristoylated. Portanto, a observação foi marcada como uma precaução para o uso do peptídeo 2A. Para adotar a tecnologia do peptídeo 2A para gerar a expressão bicistrônica ou multicistrônica, o desenho do vetor deve ser cuidadosamente considerado para a posição transgênica, seqüências de sinal e modificações pós-tradução de cada proteína individual.