4.2.1.2 Metode spectrometrice vizibile
CBZ și PHT sunt două medicamente antidiabetice care sunt utilizate simultan. În această lucrare, este descrisă o metodă de calibrare PLS pentru determinarea spectrofotometrică simultană a CBZ și PHT în plasmă. Amestecuri binare standard de CBZ și PHT au fost rezolvate prin aplicarea PLS-1 la spectrele lor UV. Apoi, au fost pregătite soluțiile standard binare, îmbogățite în plasmă, iar după extracția medicamentelor, spectrul UV corespunzător acestora a fost analizat prin regresie PLS pentru a calcula concentrația de medicamente în plasma necunoscută. A fost utilizată o procedură de validare încrucișată leave-one-out pentru a găsi numărul optim de variabile latente cu ajutorul PRESS. S-a aplicat, de asemenea, o metodă HPLC pentru determinarea simultană a două medicamente în plasmă și în metanol. Recuperările medii obținute prin PLS au fost de 98,4 și 98,2 pentru CBZ și PHT, iar cele obținute prin HPLC au fost de 100,1 și, respectiv, 101,7. Deși metoda HPLC a arătat o performanță mai bună decât PLS, s-a constatat că rezultatele obținute prin PLS au fost comparabile cu cele obținute prin metoda HPLC.
Se propun două metode spectrofotometrice pentru determinarea OXC în vrac și în formele de dozare, utilizând ca reactivi reactivul fenolic Folin-Ciocalteu (FCP) și clorhidrat de 3-metil-2-benzotiazolinonă hidrazină (MBTH). Prima metodă presupune adăugarea reactivului FCP la OXC în mediu alcalin, urmată de măsurarea absorbției la 760 nm (metoda A), iar cealaltă presupune adăugarea unui volum fix de MBTH după tratarea OXC cu clorură ferică și măsurarea absorbției la 456 nm (metoda B). În ambele metode, cantitatea de cromogen formată corespunde cantității de OXC și s-a constatat că absorbanța măsurată crește liniar cu concentrația de OXC, ceea ce este coroborat de coeficienții de corelație de 0,9985 și, respectiv, 0,9984 pentru metodele A și B. Sistemele se supun legii lui Beer pentru 5-30 și 10-50 μg/mL pentru metodele A și, respectiv, B. Absorbtivitatea molară aparentă a fost calculată ca fiind de 8,06 × 103 și 3,126 × 103 L/mol/cm pentru metodele A și, respectiv, B. LOD și LOQ au fost calculate ca fiind de 1,6 și 5 μg/mL pentru metoda A și de 3 și 10 μg/mL pentru metoda B. S-a constatat că impreciziile inter și intrazilnice ale metodelor au fost cuprinse între 1,1-1,7 % și 0,9-1,1 % pentru metoda A și între 1,1-1,9 % și 0,6-0,9 % pentru metoda B. Acuratețea a fost cuprinsă între 98,9-99,7 % și 99,3-100,1 % pentru metodele A și B, respectiv. Nu s-a observat nicio interferență din partea excipienților farmaceutici obișnuiți. Metodele au fost aplicate cu succes la dozarea OXC în preparatele sub formă de comprimate .
CBZ suferă o biotransformare enzimatică prin epoxidare cu formarea metabolitului său, CBZ-E. A fost propusă o metodă spectrofotometrică simplă, asistată de chemometrie, pentru determinarea simultană a CBZ și CBZ-E în plasmă. O procedură de extracție lichidă a fost utilizată pentru a separa analiții din plasmă, iar spectrele de absorbție UV ale soluțiilor rezultate au fost supuse regresiei PLS. Numărul optim de variabile latente PLS a fost selectat în funcție de valorile PRESS ale validării încrucișate leave-one-out. O metodă HPLC a fost, de asemenea, utilizată pentru comparație. Recuperările medii respective pentru analiza CBZ și CBZ-E în amestecuri sintetice au fost de 102,57 (± 0,25) % și 103,00 (± 0,09) % pentru PLS și de 99,40 (± 0,15) % și 102,20 (± 0,02) % pentru PLS și 99,40 (± 0,15) % și 102,20 (± 0,02) %. Concentrațiile de CBZ și CBZ-E au fost, de asemenea, determinate la cinci pacienți folosind metodele PLS și HPLC. Rezultatele au arătat că datele obținute prin PLS au fost comparabile cu cele obținute prin metoda HPLC .
A fost dezvoltată o metodă selectivă și sensibilă pentru determinarea anticonvulsivantelor vigabatrin (I) (CAS 60643-86-9) și gabapentin (II) (CAS 60142-96-3). Metoda se bazează pe condensarea medicamentelor prin intermediul grupărilor lor amino cu acetilacetonă și formaldehidă, conform reacției Hantzsch, obținându-se derivați de dihidropiridină foarte fluorescenți. Culoarea galben-portocalie a fost, de asemenea, măsurată spectrofotometric la 410 și 415 nm pentru I și, respectiv, II. Graficele absorbție-concentrație au fost rectilinii în intervalele 10-70 și 20-140 μg/mL pentru I și, respectiv, II. În ceea ce privește diagramele fluorescență-concentrație, acestea au fost liniare în intervalele 0,5-10 și 2,5-20 μg/mL, cu limite minime de detecție (S/N = 2) de 0,05 μg/mL (~ 2,1 × 10- 8 mol/L) și 0,1 μg/mL (~ 5,8 × 10- 7 mol/L) pentru I și II, respectiv. Metoda spectrofotometrică a fost aplicată pentru determinarea I și II în comprimatele acestora. Procentele de recuperare ± SD (n = 6) au fost de 99,45 ± 0,13 și, respectiv, 98,05 ± 0,53. Metoda spectrofluorimetrică a fost aplicată cu succes la determinarea I și II în urina și plasma umană îmbogățită. Procentele de recuperare ± SD (n = 5) au fost de 98,77 ± 0,29 și 98,39 ± 0,53 pentru urină și de 99,32 ± 0,74 și 98,90 ± 0,96 pentru plasmă, pentru I și II, respectiv. Nu au fost întâlnite interferențe cu medicamentele coadministrate: acid valproic (CAS 99-66-1), difenilhidantoină (CAS 57-41-0), fenobarbital (CAS 50-06-6), carbamazepină (CAS 298-46-4), clonazepam (CAS 1622-61-3), clobazam (CAS 22316-47-8) sau cimetidină (CAS 51481-61-9). Se sugerează o propunere de cale de reacție. Avantajele metodelor propuse față de metoda existentă sunt discutate .
Un spectrofotometru în infraroșu apropiat (IR), o optică integratoare și un supercalculator cu vectori paraleli sunt utilizate pentru a dezvolta un model matematic care prezice viteza de dizolvare a comprimatelor individuale intacte din spectrele IR apropiat (r2 = 0,985). Fiecare comprimat poate fi analizat în mod nedistructiv cu ajutorul spectrofotometrului în mai puțin de 1 minut. Modelul permite utilizarea a sute de lungimi de undă în infraroșu apropiat în determinarea vitezei de dizolvare, ceea ce conduce la o acuratețe crescută .
O probă de 0,5 ml de ser, care conține diferite AED, singure sau în combinație, a fost făcută alcalină, suprapusă cu izooctan și aburită în prezența KMnO4. Spectrele produselor oxidate din stratul organic au fost înregistrate în domeniul UV. Fenobarbitona și primidona oxidate nu prezintă niciun vârf de absorbție; diazepamul un delta-max la 228 nm; fenitoina la 247 nm; și carbamazepina la 247 și 372 nm. În consecință, fenobarbitona și diazepamul nu interferează în cuantificarea fenitoinei, dar carbamazepina o face. Contribuția carbamazepinei la 247 nm a fost calculată pornind de la absorbția la 372 nm și de la raportul dintre coeficienții săi de extincție molară la cele două lungimi de undă. Aceasta a fost scăzută din valorile totale A247 pentru a obține valorile reale datorate fenitoinei. Astfel, a fost dezvoltată o metodă de analiză simultană a carbamazepinei și fenitoinei într-o singură probă .
Carbamazepina și 5,5-difenilhidantoina sunt extrase simultan din 100 până la 200 μL de sânge cu 1,2-dicloroetan. 5,5-difenilhidantoina se elimină printr-o spălare într-o singură etapă în soluție alcalină. Dicloroetanul se spală în continuare cu acid și apoi se evaporă până la uscare. 5,5-difenilhidantoina se determină în spălarea alcalină prin procedeul cu benzofenonă; carbamazepina se determină în reziduul uscat prin procedeul cu 9-metilacridină descris anterior. Metoda combinată este rapidă, fiabilă și are un prag de detecție mai mic de 0,1 mg/100 ml pentru fiecare medicament.
Se descrie o procedură spectrofotometrică UV pentru microdeterminarea carbamazepinei în sânge, care se bazează pe metoda originală a 9-metilacridinei propusă de K.H. Beyer, K. Klinge, Arzneim. Forsch. 19 (1969) 1759-1760). Carbamazepina este extrasă din sânge cu diclormetan, care este apoi spălat cu alcalin și acid. O parte aliquotă din extractant se evaporă până la uscare, iar reziduul se încălzește pentru scurt timp cu acid clorhidric la 150°C. După eliminarea interferențelor nespecifice cu n-heptan, se determină absorbția produsului de rearanjare catalizată de acid (9-metilacridina) la 258 nm. Procedura rezultată este rapidă, fiabilă, sensibilă și specifică. Este nevoie de 100-200 μL de probă pentru o singură estimare și are un prag de detecție mai mic de 0,1 mg/100 ml. Se concluzionează că metoda este adecvată pentru utilizarea clinică de rutină.
Se descrie o metodă specifică de cromatografie în fază gazoasă directă pentru determinarea carbamazepinei și, semicantitativ, a 10,11-epoxi carbamazepinei în ser. Recuperarea medie a carbamazepinei este de 98%, iar eroarea de determinare în duplicat este de ± 4%. Metoda este comparată cu metoda spectrofotometrică clasică a lui Herrmann. La un material de 103 pacienți, concentrația medie de carbamazepină în ser a fost de 25,5 ± 12,8 μmol/L cu GLC și de 23,0 ± 12,6 μmol/L cu spectrofotometrie. Diferența a fost foarte semnificativă. Volumul probei de sânge este de 1/10 din cel necesar în spectrofotometrie .