Cerința de a avea vectori bicistronici sau multicistronici fiabili în sistemele de livrare de gene se află în prim-planul tehnologiei bio/biomedicale. O metodă care să asigure o co-exprimare eficientă a mai multor proteine heterologe ar fi valoroasă pentru multe aplicații, în special în știința medicală pentru tratarea diferitelor tipuri de boli. În acest studiu, am conceput și am construit un vector de expresie bicistronic utilizând o peptidă 2A autodepășitoare derivată dintr-un virus al insectei Thosea asigna (T2A). Acesta a prezentat cea mai eficientă scindare a secvenței 2A. Două versiuni ale vectorului pe bază de T2A au fost construite prin comutarea secvențelor de ADN care codifică proteinele de interes, proteina N-mirozilată și proteina care se îndreaptă spre nucleu, în amonte și, respectiv, în aval de linkerul 2A. Rezultatele noastre au arătat că s-au constatat niveluri similare de expresie a ARNm și s-a observat o eficiență de 100% a clivajului T2A. Cu toate acestea, am raportat, de asemenea, dovezile clare că proteina N-myristoilată nu poate fi plasată în aval de secvența 2A. Având în vedere că produsul proteic nu reușește să se transloce în membrana plasmatică din cauza alterării procesului de miozilare, poziția genetică a vectorului bazat pe T2A este semnificativă pentru localizarea subcelulară a proteinei N-mirozilate. Prin urmare, observația a fost marcată ca o precauție pentru utilizarea peptidei 2A. Pentru a adopta tehnologia peptidei 2A în vederea generării expresiei bicistronice sau multicistronice, ar trebui să se ia în considerare cu atenție proiectarea vectorului în ceea ce privește poziția transgenei, secvențele de semnal și modificările posttraducționale ale fiecărei proteine individuale.
By adminLeave a Comment on Deteriorarea unei proteine cu țintă membranară tradusă de o genă din aval de o conjuncție peptidică T2A „auto-îndepărtabilă”