Effect of Digibind™ and DigiFab™ on Serum Digoxin Measurement
Digibind și DigiFab sunt fragmente Fab de anticorp antidigoxină utilizate în tratamentul supradozajului acut de digoxină care pune în pericol viața. Digibind, primul antidot disponibil pentru tratarea supradozajului de digoxină, este disponibil în Statele Unite din 1986 (Glaxo Wellcome Inc.), iar mai recent, în 2001, Food and Drug Administration of the United States (FDA) a aprobat DigiFab pentru tratarea supradozajului de digoxină. Digibind este produs prin imunizarea oilor cu conjugat de digoxină-albumină umană, urmată de izolarea anticorpilor specifici pentru digoxină din sânge și de digestia cu papaină pentru a genera fragmentul Fab al anticorpului. Fragmentul Fab al anticorpului antidigoxină este apoi purificat în continuare. DigiFab se prepară prin injectarea oilor cu digoxină-dicarboximetilamină, un analog al digoxinei, urmată de izolarea anticorpului antidigoxină din sânge, digestia cu papaina și apoi purificarea fragmentului Fab prin cromatografie de afinitate. Greutatea moleculară a DigiFab (46 000 Da) este similară cu greutatea moleculară a Digibind (46 200 Da). De obicei, doza de Digibind este de 80 de ori mai mare decât încărcătura corporală de digoxină; în cazul în care nu se cunoaște nici doza ingerată, nici concentrația plasmatică de digoxină, atunci se injectează de obicei 380 mg de Digibind în pacient. Timpul de înjumătățire al fragmentului Fab la om este de 12-20 de ore, dar acesta poate fi prelungit la pacienții cu insuficiență renală . Digibind și DigiFab sunt echivalente în ceea ce privește capacitatea lor de legare a digoxinei. Mai mult, ambii compuși sunt capabili să lege DLIS endogenă .
În plus față de digoxină, Digibind demonstrează capacitatea de a neutraliza cardenolidele care sunt glicozilate în poziția 3 (digitoxină și ouabaină) cu o potență similară, indiferent de substituțiile din partea steroidică a moleculei. Prin urmare, Digibind este eficient în tratarea otrăvirii cu plante cu digitală, care conține diverse glicozide cardiace. Rich et al. au demonstrat tratamentul cu succes al unui bărbat de 22 de ani cu Digibind, care a fost supradozat intenționat cu un extract de foxglove făcut în casă . În plus, Digibind este capabil să neutralizeze atât glicozidele cardiace, cât și agliconii respectivi – de exemplu oleandrinul, componenta activă a extractului de oleandru – și este eficient în tratarea toxicității de oleandru care pune în pericol viața . Mai mult, Digibind poate fi eficient în tratarea supradozajului de Chan Su – Chan Su fiind un medicament chinezesc care conține bufalină și alți steroizi cardioactivi din clasa bufadienolidelor – dar eficacitatea Digibind în tratarea intoxicației cu Chan Su este slabă în comparație cu eficacitatea sa în tratarea supradozajului de digoxină. Acest lucru se datorează specificității slabe a Digibind de a neutraliza cinobufagina și cinobufatolina, care sunt, de asemenea, constituenți ai Chan Su, la fel ca și veninul de broască .
Atât Digibind, cât și DigiFab interferează cu măsurarea digoxinei serice prin imunoanaliză. Magnitudinea interferenței depinde de designul testului și de specificitatea anticorpului antidigoxină. Analiza imunoenzimatică cu microparticule a digoxinei (MEIA pe analizorul AxSYM, Abbott Laboratories, Abbott Park, IL), precum și analiza de digoxină Stratus au demonstrat valori ale digoxinei care au fost mai mari decât concentrația de digoxină liberă măsurată în prezența Digibind . McMillin et al. au studiat efectul Digibind și DigiFab asupra a 13 imunoanalize diferite de digoxină. Interferența pozitivă în prezența și absența digoxinei a fost observată cu Digibind și DigiFab, deși amploarea interferenței a fost ceva mai mică în cazul DigiFab. Magnitudinea interferenței a variat semnificativ în funcție de fiecare metodă, în timp ce metodele de digoxină IMMULITE®, Vitros®, Dimension® și Access® au prezentat cea mai mare interferență. Au fost observate interferențe minime cu metodele FPIA, MEIA, SYNCHRON și CEDIA. Autorii au comentat, de asemenea, că monitorizarea digoxinei libere (în ultrafiltratul fără proteine) elimină această interferență, deoarece atât Digibind, cât și DigiFab, datorită greutății lor moleculare aproximative de 46 000 Da, sunt absente în ultrafiltratul fără proteine . Digibind și DigiFab nu interferează cu măsurarea digoxinei serice utilizând o metodă cromatografică, cum ar fi cromatografia lichidă combinată cu spectrometria de masă. Kanno et al. au descris o metodă de analiză simultană a digoxinei, digitoxinei și a compușilor înrudiți utilizând cromatografia lichidă combinată cu spectrometria de masă în tandem . Oiestad și colab. au descris, de asemenea, o metodă de cromatografie lichidă-spectrometrie de masă în tandem (LC-MS/MS) pentru digoxină și digitoxină în sângele integral pentru cazurile de autopsie. Probele au fost pregătite prin extracție lichid-lichid folosind acetat de etil/heptan/diclorometan (3 : 1 : 1 în volum), iar separările cromatografice au fost realizate prin utilizarea unei coloane C-18 cu fază inversă. Detecția de masă a fost realizată prin electrospray în modul ion pozitiv pe aduși de amoniu, iar digoxina deuterată (digoxină-d3) a fost utilizată ca standard intern. Cu toate acestea, metodele cromatografice sunt rareori utilizate în laboratoarele clinice, deși laboratoarele de toxicologie medico-legală și laboratoarele criminalistice implicate în investigațiile privind decesele sunt echipate cu astfel de analizoare.
.