Abstract
Un labrador mascul de cinci ani a fost prezentat la Clinica Veterinară Universitară GADVASU cu o plângere primară de abdomen distensat, febră și anorexie. Câinele a fost găsit amorțit, cu temperatură rectală ridicată (104°F), frecvență cardiacă (148 pe minut) și frecvență respiratorie (58 pe minut). Examinarea frotiului de sânge și testul PCR au arătat că câinele era pozitiv pentru Babesia gibsoni. Nivelul ridicat al bilirubinei, alanin amino transferazei (ALT), fosfatazei alcaline (ALP), creatininei, azotului ureei din sânge (BUN), numărului total de leucocite, hipoalbuminemiei și hipoproteinemiei au fost alterări hematobiochimice. Radiografia și ecografia au evidențiat aspect de sticlă măcinată și, respectiv, zonă anecoică a abdomenului.
1. Introducere
Babesioza canină este una dintre cele mai importante boli hemoprotozoare transmise de căpușe, care pun viața în pericol, la câini, cauzată de paraziți protozoari intraeritrocitare din genul Babesia, care sunt raportate în întreaga lume și în diferite părți ale Indiei, inclusiv în statul Punjab . Prevalența variabilă atât a B. canis, cât și a B. gibsoni a fost observată în India (de la 0,66 la 21,7 %), iar în Ludhiana prevalența a fost înregistrată ca fiind de 5,26 % . Patogeneza babesiozei canine variază în diferite regiuni , posibil din cauza variației în patogenitatea diferitelor tulpini de specii de Babesia în diferite condiții ecologice . Gravitatea babesiozei este legată de gradul de replicare a parazitului în globulele roșii ale gazdei cu liza celulară ulterioară. A fost observată o mare varietate de semne clinice, cum ar fi anorexia, letargia, icterul, vărsăturile și pierderea accentuată a stării corporale, împreună cu anomalii clinicopatologice variabile, inclusiv hemoglobinurie, hipoglicemie, tulburări acido-bazice, azotemie și creșteri ale nivelului enzimelor hepatice . Mai mult, B. gibsoni provoacă anemie hemolitică regenerativă și trombocitopenie . Sferocitoza și rezultatele pozitive la testul Coombs direct sugerează o componentă imunomediată. Trombocitopenia este o constatare frecventă. În comunicarea de față descriem observațiile clinico-hematobiochimice, radiografice și ultrasonografice într-un caz foarte rar de revărsare peritoneală datorată efectului patogen al infecției cu Babesia gibsoni.
2. Descrierea cazului
Un câine labrador mascul în vârstă de cinci ani a fost prezentat la Spitalul de Învățământ Veterinar al Universității de Științe Veterinare și Zootehnice Guru Angad Dev, Ludhiana, în iulie 2013, cu distensie abdominală și anorexie persistentă în ultimele două zile. Câinele a prezentat o stare corporală precară. În timpul examinării fizice, câinele era piric (104°F), cu o frecvență cardiacă de 148 de bătăi pe minut și o frecvență respiratorie de 58 de respirații pe minut. Membranele mucoase erau palide. Căpușele au fost îndepărtate de pe câine și au fost identificate ca fiind Rhipicephalus sanguineus.
S-au trimis probe de sânge pentru analize hematologice și biochimice serice.
2.1. Analiza hematologică și biochimică
Analiza hematologică și biochimică a evidențiat o anemie moderată până la severă, cu bilirubină, alanin amino transferază (ALT), fosfatază alcalină (ALP), creatinină, azot uree din sânge (BUN), număr total de leucocite, hipoalbuminemie și hipoproteinemie crescute au fost alterări hemobiochimice (tabelul 1). Insuficiența hepatică cronică în caz de babesioză ar putea duce la hipoalbuminemie . Parametrii hematologici au sugerat că acest câine ar putea avea paraziți sanguini sau alte boli infecțioase relevante. Patogeneza anemiei pare să implice mecanisme nonhemolitice și hemolitice. Hemoliza poate implica proteaze produse de parazitul invadator, o reacție imunitară la celulele parazite și/sau leziuni oxidative ale eritrocitelor. Valorile MCV, MCH și MCHC au fost doar la limita limitei intervalului normal (tabelul 1), ceea ce indică faptul că anemia nu s-a datorat deficitului de fier, dar MCV și MCHC nu reușesc frecvent să diferențieze corect diferitele modele de anemie . Cea mai frecventă anomalie a fost trombocitopenia. Motivul trombocitopeniei în babesioză s-ar putea datora sechestrării trombocitelor în splină sau distrugerii trombocitelor mediate imunitar și dezvoltării coagulării intravasculare diseminate .
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Kahn et al. . | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Pentru a distinge între aceste posibilități, examenul microscopic al frotiurilor subțiri de sânge colorate cu Giemsa, preparate de la marginea urechii, a fost efectuat sub lentilă cu imersie în ulei (100x). Examinarea a evidențiat prezența în eritrocite a unor organisme în formă de inel, ovale, parașute și virgule, cu diametrul de aproximativ 1-3 μm (figura 1). Pe baza dimensiunii paraziților intracelulari din acest caz, a fost luată în considerare posibilitatea ca acest câine să fi fost infectat cu Babesia spp. mici, în special cu B. gibsoni. Gradul de parazitemie, calculat ca procent de globule roșii infectate prin numărarea a 1000 de globule roșii, a fost de 10,5%. Căpușele prezente pe câine au fost identificate ca fiind Rhipicephalus sanguineus. Faptul că B. gibsoni nu poate fi diferențiat de alte izolate de babe mici canine prin microscopie ne-a determinat să efectuăm PCR pentru diagnosticul final folosind primerul specific B. gibsoni .
2.3. Extracția ADN-ului
ADN-ul din sângele integral (300 μL) a fost extras cu ajutorul kitului de purificare a ADN-ului (QIAGEN, GmbH, Germania) în conformitate cu instrucțiunile producătorului.
Un set de amorsă care include amorsă directă (Gib599 F): 5′CTCGGCTACTCTTGCCTTGTC3′ și amorsă inversă (Gib1270R): 5′GCCGGAAACTGAAATAACGGC 3′ a fost utilizat pentru a amplifica un fragment de 671 bp din regiunea genei 18 S ARNr specifică pentru B. gibsoni . Amestecul PCR a constat dintr-o concentrație molară 1X de 12,5 µL de master mix (1X tampon PCR QIAGEN, 2,5 unități de ADN polimerază Taq, 200 µM din fiecare dNTP și 1,5 mM MgCl2), 1,5 µL de 10 pmol din fiecare dintre primerii respectivi și 5 µL de șablon ca sursă de ADN.
După o denaturare inițială la 95°C timp de 5 min, s-au efectuat 30 de cicluri de denaturare (94°C timp de 45 sec), recoacere (57°C timp de 1 min) și extensie (72°C timp de 1 min), iar extensia finală a fost efectuată la 72°C timp de 8 min. În reacția PCR au fost incluse un control negativ al probei (numai ADN din sânge canin) și un control negativ al ADN (apă Milli-Q în loc de ADN). Produsele PCR au fost analizate pe un gel de agaroză de 1,5 % și colorate cu bromură de etidiu. Dimensiunea produsului PCR amplificat a fost de 671 pb (figura 2).
2.4. Analiza lichidului peritoneal
Pe baza distensiei abdominale s-a suspectat ascită. S-a efectuat o analiză peritoneală și s-au recoltat 2 ml de lichid peritoneal clar. Lichidul peritoneal a fost examinat în mod obișnuit pentru culoare, turbiditate, proteine totale și concentrația de albumină. Lichidul era transparent și limpede. Proteinele totale și albumina au fost de 0,4 g/dL și, respectiv, 0,2 g/dL, indicând hipoproteinemie (0,4 g/dL) și hipoalbuminemie (0,2 g/dL).
2.5. Radiografie și ultrasonografie
Radiografia și ultrasonografia au arătat aspect de sticlă măcinată și, respectiv, zonă anecoică a abdomenului (figurile 3 și 4). Cazul a fost astfel confirmat ca fiind vorba de ascită. Deși cele mai frecvente semne clinice ale babesiozei includ anorexia, letargia, febra recurentă, mucoasa palidă și emeza , constatările noastre au arătat că este important să nu se neglijeze babesioza în diagnosticul diferențial al ascitei. Câinii cu ascită ar trebui să fie supuși unui diagnostic parazitologic clasic sau molecular pentru a exclude babesioza. Organismele babesia infectează eritrocitele câinilor, ducând la anemie hemolitică. Se știe că infecția cu B. gibsoni provoacă semne clinice mai severe decât infecția cu Babesia spp. mari și poate duce la sindroame de disfuncție multiplă a organelor . Deoarece câinele era grav anemic, cu alte anomalii severe ale parametrilor legați de organele vitale, acesta a murit în două zile de la tratament.
3. Concluzie
Din câte știm noi, acesta este primul raport de caz de efuziune peritoneală la un câine asociată cu B. gibsoni diagnosticat prin examinare microscopică și reacția în lanț a polimerazei (PCR) în combinație cu analiza lichidului peritoneal, radiografie și ultrasonografie.
Conflict de interese
Autorii declară că nu există niciun conflict de interese în ceea ce privește publicarea acestei lucrări.