Articolul original
Jacob Rosenblit, Cláudia Regina Abreu,
Leonel Nulman Szterling, José Mauro Kutner, Nelson Hamerschlak,
Paula Frutuoso, Thelma Regina Silva Stracieri de Paiva,
Orlando da Costa Ferreira Júnior
Evaluarea a trei metode de măsurare a hemoglobinei în cadrul unui donator de sânge
Serviciul de hemoterapie, Spitalul Israelita Albert Einstein, São Paulo, Brazilia
ABSTRACT
CONTEXT: Nivelul de hemoglobină (Hb) este cel mai utilizat parametru pentru depistarea donatorilor de sânge pentru prezența anemiei, una dintre cele mai utilizate metode de măsurare a nivelului de Hb se bazează pe detectarea fotometrică a cianmetahemoglobinei, ca o alternativă la această tehnologie, HemoCue a dezvoltat o metodă fotometrică bazată pe determinarea metahemoglobinei azide.
OBIECTIV: Evaluarea performanțelor a trei metode de determinare a hemoglobinei (Hb) în cadrul unei bănci de sânge.
DESIGN: Studiu prospectiv care utilizează probe de sânge pentru a compara metodele de determinare a Hb.
STADIU: Serviciul de hemoterapie al Spitalului Israelita Albert Einstein, o instituție privată din sistemul terțiar de asistență medicală.
SEMPLU: S-au colectat probe de sânge în serie de la 259 de persoane în perioada martie-iunie 1996.
MĂSURĂRI DE SÂNGE: Performanțele testelor și comparațiile dintre ele au fost evaluate prin analiza coeficienților de variație (CV), regresia liniară și diferențele medii.
REZULTATE: CV-ul pentru cele trei metode au fost:
Cecientul de variație (CV) pentru cele trei metode a fost Coulter 0,68%, Cobas 0,82% și HemoCue 0,69%. Nu a existat nicio diferență între determinarea medie a Hb pentru cele trei metode (p>0,05). Metodele Coulter și Cobas au prezentat cea mai bună concordanță, iar metoda HemoCue a oferit o determinare mai mică a Hb în comparație cu ambele metode Coulter și Cobas. Cu toate acestea, perechile de metode care implică HemoCue par să aibă limite de concordanță mai înguste (± 0,78 și ± 1,02) decât combinația Coulter și Cobas (± 1,13).
CONCLUZIE: Cele trei metode oferă o bună concordanță pentru determinarea hemoglobinei.
CUVINTE CHEIE: Hemoglobină. Metode. Cuantificare. Echipament.
INTRODUCERE
Nivelul hemoglobinei (Hb) este cel mai utilizat parametru pentru depistarea donatorilor de sânge pentru prezența anemiei. Această măsurare se efectuează de obicei în timpul interviului clinico-epidemiologic care precede donarea de sânge.
În prezent, una dintre cele mai utilizate metode de măsurare a nivelului de Hb se bazează pe detectarea fotometrică a cianmetahemoglobinei, care este un compus stabil derivat din Hb. În plus, sunt disponibili în comerț reactivi gata de utilizare, precum și soluții standard de cianmetahemoglobină pentru calibrare.
Ca alternativă la această tehnologie, HemoCue a dezvoltat o metodă fotometrică bazată pe determinarea metahemoglobinei azidice,1 standardizată față de metoda Comitetului Internațional pentru Standardizare în Hematologie (ICSH).2 Metahemoglobina azidică se măsoară la 570 nm. Pentru a compensa turbiditatea, de exemplu din cauza lipidelor, se efectuează o a doua măsurare la 880 nm.3 Avantajul acestei tehnologii este că este simplă, rapidă și nu necesită un echipament hematologic sofisticat. Sistemul este conceput pentru a utiliza sânge capilar, venos sau arterial. De asemenea, instrumentul este mic și portabil, ceea ce permite utilizarea sa în unitățile mobile de recoltare a sângelui și în cabinetele medicilor.
Câteva studii efectuate pe donatori de sânge americani au atestat buna reproductibilitate și acuratețe a metodei HemoCue.4,5 Cu toate acestea, nu a fost realizată comparabilitatea nivelului de Hb măsurat prin metoda HemoCue cu alte echipamente hematologice disponibile mai recent.
În acest studiu am analizat performanța sistemului HemoCue în comparație cu metodele Coulter și Cobas. Ambele metode se bazează pe detectarea cianmetahemoglobinei.
METODE
Selecția eșantioanelor. Un total de 259 de probe de sânge au fost colectate în perioada martie-iunie 1996. Sângele a fost colectat cu sistemul Vacutainer, conținând EDTA-K3 (Becton-Dickinson) până la un volum total de 4,5 ml.
Măsurătorile Hb. Pentru cele 259 de probe au fost efectuate prin cele trei metode la un interval de 10-20 de minute pentru a evita variația în timpul procesării și măsurării. Pentru analiza reproductibilității măsurătorilor Hb, am utilizat o singură probă care a fost evaluată de 10 ori prin fiecare metodă. Pe baza acestor determinări am calculat coeficientul de variație (CV) definit ca fiind raportul dintre deviația standard și media nivelurilor de Hb, înmulțit cu 100. Aparatele Coulter și Cobas au fost calibrate zilnic în conformitate cu recomandările producătorilor. Fotometrul HemoCue este calibrat din fabrică și nu trebuie recalibrat. Calibrarea a fost verificată zilnic în conformitate cu recomandările producătorului. Calibrarea a fost stabilă în timpul perioadei noastre de studiu.
Metode statistice. Toate analizele statistice au fost efectuate pe softul shareware EPIINFO, versiunea 6 (analiza de regresie liniară, testul Student t, calculul mediei și al deviației standard).6 O valoare p mai mică de 0,05 a fost considerată semnificativă din punct de vedere statistic.
REZULTATE
Reproductibilitatea fiecărei metode a fost evaluată prin măsurarea nivelului de Hb de 10 ori dintr-o singură probă de sânge și determinarea coeficientului de variație (CV) pentru fiecare analiză. CV-ul pentru metodele Coulter, Cobas și HemoCue a fost de 0,68%, 0,82% și, respectiv, 0,69% (tabelul 1).
Am evaluat mai întâi măsurătorile tendinței centrale (media și mediana) și variației (intervalul și deviația standard) pentru cele 259 de determinări de Hb din fiecare metodă. După cum se arată în tabelul 2, nu am putut găsi nicio diferență statistică pentru acești parametri. Cu toate acestea, am observat că metoda HemoCue a prezentat cea mai mică medie (11,5 g/dl) și cea mai mică mediană (11,4 g/dl) în comparație cu ambele metode Coulter și Cobas (medie = 11,6 și mediană = 11,7 și, respectiv, 11,6 g/dl).
Am studiat în continuare coeficientul de corelație pentru perechile de metode, din analiza de regresie liniară a determinării Hb pentru cele trei metode. Tabelul 3 prezintă parametrii pentru această analiză și indică faptul că fiecare pereche a avut un coeficient de corelație excelent (intervalul 0,97 – 0,99). Acest rezultat era oarecum așteptat, deoarece toate cele trei metode au fost concepute pentru a măsura același parametru (nivelul Hb în g/dl). În această circumstanță, acordul dintre două variabile nu este reprezentat corect prin măsurarea forței relației lor sau, din punct de vedere statistic, prin determinarea coeficientului de corelație al regresiei liniare.
De aceea, am decis să evaluăm acordul celor trei metode de determinare a Hb prin utilizarea abordării propuse de Bland și Altman.7 Pe scurt, această abordare presupune că, dacă două metode trebuie să fie în acord, atunci media diferenței dintre fiecare determinare pereche nu va fi diferită statistic de zero. Prin utilizarea acestei abordări este, de asemenea, posibil să se stabilească o limită de concordanță (în cadrul unui interval de încredere dat) între cele două metode și să se vizualizeze grafic dispersia acestor diferențe între nivelurile de Hb. De exemplu, acest lucru ar putea indica dacă o variabilitate mai mare ar putea fi asociată cu un anumit interval de determinări Hb și, prin urmare, ar sugera o lipsă de precizie asociată cu acel interval de Hb.
Aplicarea abordării Bland și Altman la datele noastre este prezentată în Tabelul 4. Se poate observa că singura pereche de metode cu o medie a diferenței care nu diferă de zero este perechea Coulter/Cobas (p = 0,588). Prin urmare, acestea sunt metodele care concordă în ceea ce privește măsurătorile Hb. Perechile de metode care au implicat metoda HemoCue au dat o medie a diferenței diferită statistic de zero (p < 0,001).
Abordarea Bland și Altman ne-a permis să calculăm limita de concordanță între oricare două metode. Aceste limite sunt, de asemenea, prezentate în tabelul 4. Perechea Coulter/Cobas a dat o limită de concordanță de 1,13 g/dl, în timp ce perechile care implică metoda HemoCue prezintă limite de concordanță mai mici (Coulter/HemoCue = 0,78 g/dl și Cobas/HemoCue = 1,02 g/dl). Limita de concordanță reflectă dispersia datelor în jurul mediei diferenței (ilustrată în figura 1).
Figura 1 – Diferențele individuale între valorile Hb (n=259) au fost reprezentate grafic față de valoarea medie a Hb, așa cum a fost determinată de perechile de metode de măsurare a Hb. Fiecare figură prezintă diagrame ale următoarelor diferențe și medii: A, Coulter-Cobas; B, Coulter-HemoCue; și C, Cobas-HemoCue. Linia indică diferența nulă.
DISCUȚII
Considerate în ansamblu, datele noastre indică faptul că metodele Coulter și Cobas prezintă cea mai bună concordanță și că metoda HemoCue oferă o determinare mai mică a Hb în comparație cu ambele metode Coulter și Cobas. Această diferență este de 0,10 și 0,13 g/dl în raport cu metodele Coulter și, respectiv, Cobas. Cu toate acestea, perechile de metode care implică HemoCue par să aibă limite de concordanță mai înguste decât combinația Coulter și Cobas. Acest lucru este în concordanță cu CV-ul pentru cele trei metode. Astfel, deși metoda HemoCue prezintă o măsurare mai mică a nivelurilor de Hb, aceste măsurători par să fluctueze mai puțin în comparație cu alte metode.
În acest studiu am folosit probe din puncție venoasă colectate direct în tuburi Vacutainer care conțin EDTA-K3. Acest lucru a fost făcut pentru a standardiza măsurarea Hb. O parte din diferența de 1% (0,10g/dl) dintre sistemul HemoCue și Coulter STKS poate fi explicată prin faptul că sistemul HemoCue compensează turbiditatea din proba de sânge. Turbiditatea datorată lipidelor, de exemplu, va da citiri fals crescute de către Coulter și alte instrumente care măsoară fotometric la o singură lungime de undă.1,3 Metoda ICSH2 acceptă o turbiditate de 0,003 unități de absorbție, ceea ce corespunde la 0,11 g/dl de hemoglobină. O turbiditate mai mare este de așteptat, deoarece donatorii de sânge nu sunt în post.
Este, de asemenea, posibil ca metoda biochimică utilizată pentru măsurarea Hb (cianmetahemoglobină versus hemoglobinazidă) să fi influențat rezultatul nostru. Trebuie menționat faptul că cianmetahemoglobina este metoda recomandată de ICSH.
Avantajele sistemului HemoCue în ceea ce privește rapiditatea, simplitatea și portabilitatea l-ar recomanda ca metodă de screening nu numai în cadrul unei bănci de sânge, ci și în cabinetul medicilor.
2. ICSH. Recomandări pentru metoda de referință pentru hemoglobinometrie în sângele uman (standard ICSH 1995) și Specificații pentru standardul internațional de hemoglobinamidă (ediția a 4-a). J Clin Pathol 1996;49:271-4.
3. Nicholls PD. An evaluation of the HemoCue for Correcting the Hemoglobin Value of Lipemic Samples. Med Lab Sciences 1990;47:226-9.
4. Cable RG. Determinarea hemoglobinei la donatorii de sânge. Transfusion Med Ver 1995;9:131-44.
5. Carlson DA, Daigneault RW, Statland BE. Evaluarea fotometrului HemoCue pentru măsurarea hemoglobinei donatorilor de sânge. Rezumat pentru cea de-a 40-a reuniune aniversară a Asociației Americane a Băncilor de Sânge, Orlando, FL, 1987.
7. Bland JM, Altman DG. Metode statistice pentru evaluarea acordului între două metode de măsurare clinică. Lancet 1986;i:307-10.
Jacob Rosenblit – MD, Serviciul de hemoterapie, Spitalul Israelita Albert Einstein.
Cláudia Regina Abreu – BSC, Serviciul de hemoterapie, Spitalul Israelita Albert Einstein.
Leonel Nulman Szterling – MD, Serviciul de hemoterapie, Spitalul Israelita Albert Einstein.
José Mauro Kutner – MD, Serviciul de hemoterapie, Spitalul Israelita Albert Einstein.
Nelson Hamerschlak – MD, Serviciul de hemoterapie, Spitalul Israelita Albert Einstein.
Paula Frutuoso – BSc, Serviciul de hemoterapie, Spitalul Israelita Albert Einstein.
Thelma Regina Silva Stracieri de Paiva – BSC, Serviciul de hemoterapie, Spitalul Israelita Albert Einstein.
Orlando da Costa Ferreira Júnior – MD, PhD. Serviciul de hemoterapie, Spitalul Israelita Albert Einstein.
Surse de finanțare: Nu sunt declarate
Conflict de interese: Nu este declarat
Ultimul primit: 15 iunie 1998
Acceptat: 23 iulie 1998
Adresa pentru corespondență:
Jacob Rosenblit
Serviciul de hemoterapie al Spitalului Albert Einstein
Av. Albert Einstein, 627, 4th floor
São Paulo/SP, Brazilia – CEP 05651-901
E-mail: [email protected]
RESUMO
CONTEXT: Măsurarea hemoglobinei (Hb) este cel mai utilizat indicator pentru verificarea anemiei, în screeningul donatorilor de sânge. În prezent, cea mai utilizată metodă fotometrică este cea a ciano-metahemoglobinei. Ca o alternativă la această tehnologie, Hemocue a dezvoltat o metodă fotometrică bazată pe determinarea azide-metahemoglobinei. OBIECTIV: Evaluarea performanței a trei metode de determinare a hemoglobinei (Hb) la donatorii de sânge. TIPUL STUDIULUI: Studiu prospectiv care utilizează probe de sânge pentru a compara testele de dozare a Hb. SITE: Serviciul de hemoterapie al Spitalului Israelita Albert Einstein, o instituție privată de îngrijire terțiară. EȘ antioane: Au fost recoltate probe de sânge în serie de la 259 de persoane în perioada martie-iunie 1996. VARIABILELE STUDIATE: Performanțele testelor și comparațiile acestora au fost realizate prin analiza coeficientului de corelație, regresie liniară și compararea mediilor. REZULTATE: Coeficienții de variație pentru cele trei metode au fost: Coulter, 0,68%, Cobas, 0,82%, și HemoCue, 0,69%. Nu au existat diferențe semnificative din punct de vedere statistic între mediile de determinare a hemoglobinei prin cele trei metode (p>0,05). Metodele Coulter și Cobas au prezentat o concordanță mai bună, în timp ce metoda HemoCue a avut măsurători mai mici ale hemoglobinei. Cu toate acestea, perechile Coulter/HemoCue și Cobas/HemoCue au avut limite de concordanță mai înguste (+ 0,78 și + 1,02) decât perechea Coulter/Cobas (+ 1,13). CONCLUZII: Cele trei metode au demonstrat o concordanță excelentă pentru dozarea hemoglobinei.