By Leave a Comment on O comparație între testele ELISA colorimetrice și cele cu chemiluminescență

Sunteți curioși în legătură cu testele ELISA cu chemiluminescență, dar nu știți exact ce sunt sau cum să le folosiți? Videoclipul nostru A Comparison of Colorimetric and Chemiluminescence ELISAs (O comparație între testele ELISA colorimetrice și cele cu chemiluminescență) discută despre cât de asemănătoare sunt aceste două tipuri de teste și despre modul în care acestea vă pot îmbunătăți testele de laborator.

Vizionați videoclipul nostru pentru a:

  • Învățați cum testele ELISA cu chemiluminiscență și ELISA colorimetrice măsoară biomarkerii
  • Explorați diferitele tipuri de cititoare de plăci utilizate pentru a efectua fiecare test
  • Comparați componentele fiecărui test

O comparație între testele ELISA cu colorimetrie și ELISA cu chemiluminiscență

Transcriere video

Bună ziua, Sunt Christi Caillouette de la ALPCO! Astăzi, vă voi prezenta o comparație între testele imunoenzimatice colorimetrice și chimiluminiscente, numite și ELISA.

Principiul testelor ELISA sandwich

Chiar dacă există mai multe tipuri de teste, testele ELISA la care mă voi referi astăzi sunt testele sandwich. Testele ELISA sandwich au un anticorp acoperit pe placă care se leagă în mod specific de analitul dorit. După o etapă de spălare, se adaugă un anticorp de detecție și un marker enzimatic care se leagă de analit. Se adaugă un substrat pentru a genera o reacție în godeuri. În funcție de tipul de analiză, se produce fie culoare, fie lumină. Această reacție poate fi măsurată cu ajutorul unui cititor de plăci. Gradul de schimbare a culorii sau de lumină emisă indică cantitatea de analit din probă.

Figura 1: O prezentare generală a principiului ELISA sandwich colorimetric față de cel chimiluminiscent.

Măsurarea concentrațiilor necunoscute de biomarkeri

Atât testele colorimetrice, cât și cele chimiluminiscente utilizează standarde cunoscute pentru a genera o curbă standard pentru a măsura concentrația necunoscută a unui analit în probe. În funcție de kit, acest lucru se realizează prin utilizarea unor programe software cu algoritmi de ajustare a curbei logistice cu 4 sau 5 parametri. Ambele tipuri de kituri oferă utilizatorului măsurători ale analitului într-un mod foarte similar.

Figura 2: Exemple de curbe standard generate de ALPCO Human Insulin Colorimetric ELISA și STELLUX® Chemi Active GLP-1 (7-36) amide ELISA.

Succesul ELISA colorimetric

Elisele ELISA colorimetrice necesită un cititor de microplăci standard pentru a detecta reacția de schimbare a culorii dintre markerul enzimatic și substrat. Cititorul trimite o lungime de undă, de obicei 450 nm, prin fiecare gode pentru a determina citirea densității optice, sau „OD”, a probelor. În funcție de cititorul de plăci, citirile OD furnizate sunt cuprinse între 0 și 4 cu o precizie de o mie de zecimale. Citirile OD sunt limitate de capacitatea spectrofotometrului.

Figura 3: Spectrofotometrele sunt utilizate pentru a citi plăcile colorimetrice pentru a obține densități optice pentru fiecare gode care sunt convertite în concentrații de biomarker.

Succesul ELISA cu chimiluminescență

Eliminarea ELISA cu chimiluminescență necesită un cititor de microplăci capabil să măsoare luminescența pentru a detecta reacția luminoasă dintre markerul enzimatic și substrat. Lumina degajată de reacția din godeuri este transmisă printr-un cablu de fibră optică către un fotomultiplicator din cititor care emite unități de lumină relativă sau „RLU”. În funcție de cititorul de plăci, RLU pot varia de la sute la milioane. Această răspândire a unităților oferă utilizatorilor o mai bună sensibilitate analitică și o gamă dinamică mai largă prin faptul că oferă o mai mare separare între puncte și reduce limitările citirilor densității optice de la un cititor de microplăci standard.

Figura 4: Luminometrele sunt utilizate pentru a citi plăcile cu chemiluminescență pentru a obține unități de lumină relativă care sunt convertite în concentrații de biomarker.

Colorimetric vs. Chemiluminescence ELISAs

Acum am să vă arăt ce vine în general în cutiile kiturilor noastre ELISA colorimetrice și chemiluminescente și cum aceste kituri sunt doar puțin diferite. Vă voi arăta kitul ELISA colorimetric pentru insulină umană de la ALPCO și kitul nostru STELLUX Chemi Active GLP-1 (7-36) amide ELISA.

Componente ELISA colorimetric pentru insulină umană

Primul rând, vom începe cu kitul ELISA colorimetric pentru insulină umană de la ALPCO. În acest test colorimetric, veți primi:

  • Microplacă cu 96 de godeuri – placa este transparentă pentru a permite măsurarea DO a culorii din placă
  • Standard zero
  • Standarde, de la A la E – fiecare flacon are valori cunoscute de insulină pentru a stabili curba standard
  • Controale – care conțin valori cunoscute de insulină pentru controlul calității.
  • Anticorp de detecție marcat enzimatic
  • Concentrat de tampon de spălare
  • Substrat TMB – care, în timpul incubării, modifică godeurile în albastru.
  • Soluție de oprire – care se adaugă pentru a opri reacția de schimbare a culorii în godeuri, transformând godeurile în galben.
  • Și dispozitive de sigilare a plăcilor
Figura 5: Componentele kitului ELISA pentru Insulină umană.

Componente ELISA STELLUX® Chemiluminescence Active GLP-1 (7-36) amide ELISA

În continuare, avem ELISA STELLUX® Chemi Active GLP-1 (7-36) amide ELISA de la ALPCO. În acest test chemiluminiscent, veți primi:

  • Microplacă de 96 de godeuri cu GLP-1 activ – Observați cum placa Chemi este neagră în loc să fie transparentă. O placă neagră reduce interferența luminii de fond atunci când placa este citită.
  • Standarde
  • Niveluri de control
  • Buffer de testare
  • Anticorp detector
  • Buffer anticorp detector
  • Buffer anticorp detector
  • Buffer de spălare concentrat
  • Streptavidină-HRP – care funcționează ca marker enzimatic.
  • Buffer de streptavidină-HRP – care se utilizează pentru a dilua streptavidina-HRP la puterea de lucru.
  • Substrat chemiluminescent A
  • Substrat chemiluminescent B – care se combină pentru a obține un substrat chemiluminescent de putere de lucru care interacționează cu marcajul enzimatic pentru a genera reacția chemiluminescentă în fiecare gode.
  • Sigilatoare de plăci
Figura 6: Componentele kitului ELISA STELLUX® Chemi Active GLP-1 (7-36) amidă Chemi Active GLP-1 (7-36) amidă.

Concluzie

După cum puteți vedea, unii dintre reactivi sunt diferiți între ELISA colorimetric și ELISA chemiluminiscent, dar principiul fiecărui test este similar și ambele vă permit să măsurați concentrația de analiți necunoscuți în probe. Indiferent dacă folosiți kituri colorimetrice sau sunteți interesat să încercați testele noastre chemiluminescente, avem ceva pentru dumneavoastră. ALPCO este aici pentru a vă ajuta să explorați posibilitățile pentru laboratorul dumneavoastră. Pentru a vedea oferta noastră completă de ELISA, vă rugăm să vizitați site-ul nostru web. Avem multe resurse excelente pentru a vă ajuta în proiectele dumneavoastră, așa că vă rugăm să aruncați o privire.

Mulțumim pentru vizionare!

Pentru a afla mai multe despre produsele ALPCO, vă rugăm să îl contactați pe Robert Somogyi la [email protected].

.

Lasă un răspuns

Adresa ta de email nu va fi publicată.